血液成分制備操作規(guī)程

1、3 血液成分制備操作規(guī)程血液成分制備是用離心分離、照射、過濾及光化學(xué)等方法制備各種血液成分，包括紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板、血漿和冷沉淀凝血因子制品等。 3.1血液成分制備的一般要求：血液成分制備的環(huán)境要求.1 血液成分制備的環(huán)境應(yīng)整潔衛(wèi)生，定期有效消毒。.2 密閉系統(tǒng)制備血液成分，可在潔凈的環(huán)境中進(jìn)行。.3 開放系統(tǒng)制備血液成分，整體須在醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)類環(huán)境、局部在醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)類環(huán)境中進(jìn)行。.4 輻照室的環(huán)境，須符合電離輻射防護(hù)與輻射源安全基本標(biāo)準(zhǔn)的要求。.5 血液成分制備環(huán)境溫度應(yīng)滿足冷鏈的要求。血液成分制備應(yīng)盡可能縮短室溫條件下的制備時(shí)間，以確保血液成分制品的有效性和安全性。 血液成分

2、制備的設(shè)備要求.1 血液成分制備所涉及的設(shè)備應(yīng)與相應(yīng)工作匹配，其數(shù)量及功能應(yīng)能滿足制備工作的要求。.2 血液成分制備的關(guān)鍵設(shè)備，必須建立設(shè)備檔案；應(yīng)建立和實(shí)施設(shè)備的確認(rèn)、維護(hù)、校準(zhǔn)和持續(xù)監(jiān)控等管理制度，實(shí)施惟一性標(biāo)簽及狀態(tài)標(biāo)記，以確保設(shè)備符合預(yù)期使用要求。 血液成分制備的物料要求.1 成分制備所涉及的物料應(yīng)能滿足制備工作的需要。.2 成分制備所涉及的物料須符合國(guó)家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)并經(jīng)確認(rèn)。.3 使用物料前，必須檢查物料的有效期、外觀質(zhì)量等，確認(rèn)符合質(zhì)量要求后方可使用。對(duì)不合格物料，進(jìn)行有效標(biāo)識(shí)、隔離，防止誤用。 血液制備程序和方法的審核確認(rèn)開展新的血液成分制品制備前或原血液成分制品制備條件發(fā)生改變時(shí)，

3、血液制備程序和方法需進(jìn)行確認(rèn)。 血液成分制備前的血液要求.1 血液接收時(shí)，須核對(duì)血液數(shù)量，檢查血液外觀、血袋標(biāo)簽及血液運(yùn)輸過程中的溫度記錄等內(nèi)容，確認(rèn)符合符合質(zhì)量要求后方可進(jìn)行成分制備。.2 用于制備手工血小板、新鮮冰凍血漿及冷沉淀凝血因子的血液應(yīng)采集順利、無(wú)凝血。.3 制備冰凍紅細(xì)胞的血液自采血之日起6日內(nèi)進(jìn)行制備。.4 采用白細(xì)胞濾器制備少白細(xì)胞血液成分制品，應(yīng)在血液貯存前進(jìn)行制備。.5 制備血小板的血液保存溫度為22±2。 血液成分制備的時(shí)間要求.1 制備濃縮血小板應(yīng)在血液采集后6小時(shí)內(nèi)完成。.2 制備新鮮冰凍血漿時(shí)，抗凝劑為CPD、CP2D、CPDA-1的血液應(yīng)在血液采集后8

4、小時(shí)之內(nèi)分離并速凍，抗凝劑為ACD的血液應(yīng)在血液采集后6小時(shí)之內(nèi)分離并速凍。.3 自血液采集至冰凍完成的時(shí)間超過中規(guī)定的時(shí)間，可制備冰凍血漿。 血液成分制備離心時(shí)的溫度要求.1 制備血小板濃縮液的離心溫度為22±2。.2 制備冷沉淀凝血因子的離心溫度為2±2。.3 制備其它血液成分的離心溫度為在4±2。 血液制備過程的標(biāo)識(shí)要求.1 使用聯(lián)袋制備時(shí)，在原袋和轉(zhuǎn)移袋分離之前，應(yīng)檢查每個(gè)血袋上獻(xiàn)血條碼的一致性。.2 血液進(jìn)行過濾、分裝和冰凍等操作而需要采用非一體性的血袋時(shí)，必須保證在每一個(gè)血袋貼上正確的獻(xiàn)血條碼。.3 應(yīng)對(duì)血液制備過程中發(fā)現(xiàn)的不合格品進(jìn)行標(biāo)識(shí)。 血液制備

5、過程的目視檢查要求.1 每一袋血液在接收、離心、分離、熱合及交付的各個(gè)環(huán)節(jié)都應(yīng)經(jīng)過目視檢查。.2 血液制備過程的目視檢查內(nèi)容主要包括：血袋標(biāo)簽是否完整、是否有滲漏、離心界面是否清晰、血漿外觀顏色是否正常及熱合口是否嚴(yán)密等。.3 在血液制備過程中若發(fā)現(xiàn)有質(zhì)量異常，應(yīng)按不合格品實(shí)施標(biāo)識(shí)、隔離及進(jìn)一步處理；血袋滲漏的一律報(bào)廢,不得用于臨床。 血液成分制備的質(zhì)量記錄.1 血液成分制備記錄應(yīng)確保對(duì)血液制備過程的人員、設(shè)備、血液來(lái)源和原材料、方法、環(huán)境條件及相關(guān)信息的可追溯性。.2 血液成分制備的質(zhì)量記錄主要包括：血液交接，成分制備的過程，儀器使用、維護(hù)校準(zhǔn)，成分室環(huán)境控制，醫(yī)療廢物的處理等。 血液制備過

6、程中，有關(guān)血液接收、成分制備及血液成分制品交付等信息必須正確輸入計(jì)算機(jī)信息管理系統(tǒng)中。2 制備的血液成分制品質(zhì)量，須達(dá)到全血及成分血質(zhì)量要求的相關(guān)規(guī)定。3 血液成分制備過程中產(chǎn)生的醫(yī)療廢物，應(yīng)依照醫(yī)療廢物管理?xiàng)l例的有關(guān)規(guī)定進(jìn)行處置。3.2 多聯(lián)袋血液成分制備利用多聯(lián)袋技術(shù)，依據(jù)不同的離心轉(zhuǎn)速、時(shí)間和溫度，在適宜的條件下進(jìn)行血液成分的制備。 離心.1 根據(jù)離心機(jī)種類和血液成分制品的制備要求，確定離心時(shí)間、溫度、轉(zhuǎn)速。離心溫度見3.1.7.2 將多聯(lián)袋按不同制備要求，分別整理，平衡血袋；必須將所有的平衡物和多聯(lián)袋放入離心杯中并將離心杯對(duì)稱放入離心機(jī)內(nèi)。.3 根據(jù)不同血液成分制品的操作規(guī)程進(jìn)行離心，

7、最大相對(duì)離心力不能超過5000g。.4 離心過程中須對(duì)離心機(jī)的運(yùn)行進(jìn)行監(jiān)視并記錄。.5 離心機(jī)停止轉(zhuǎn)動(dòng)之前，不可開蓋，不可晃動(dòng)。.6 離心工作結(jié)束后，擦拭、保養(yǎng)離心機(jī)，清潔整理臺(tái)面、地面衛(wèi)生。如有漏血，立即用有效消毒液消毒處理。 離心機(jī)轉(zhuǎn)速與相對(duì)離心力的換算公式為：RCF（g）=11.18×(rpm/1000)2×Rrpm=299×RCF/R式中： RCF為相對(duì)離心力，R為半徑，rpm為轉(zhuǎn)速，離心半徑是離心機(jī)軸中央到離心機(jī)杯底間的距離，單位用厘米表示。 血液成分分離 血液成分分離有虹吸、夾板法及機(jī)器分離方法。機(jī)器分離應(yīng)按設(shè)備操作規(guī)程操作。.1 離心后的外觀檢查.1

8、.1 離心后輕輕取出離心杯，觀察血袋、塑料管有無(wú)滲漏，離心杯中有無(wú)血痕，如有破損應(yīng)查找滲漏點(diǎn)。血袋破漏的,應(yīng)作報(bào)廢處理并做好記錄，記錄包括：血袋生產(chǎn)廠家、產(chǎn)品批號(hào)、破損部位、血袋編號(hào)等。.1.2 觀察血液的分層情況，若有分層不清、脂血嚴(yán)重、血細(xì)胞比積過低等不合格項(xiàng)目，按不同情況予以處理。.2 二聯(lián)袋制備(2種血液成分)。經(jīng)一次重離心可制備濃縮紅細(xì)胞和血漿，若需制備血清可用無(wú)抗凝劑的二聯(lián)袋制備。.3 三聯(lián)袋制備(23種血液成分)。.3.1 紅細(xì)胞、新鮮冰凍血漿(FFP)的制備程序：第一次重離心后將一定量的血漿分入第2袋；再將第3袋的紅細(xì)胞保存液加入原袋與紅細(xì)胞混合即為懸浮紅細(xì)胞。熱合分開紅細(xì)胞袋

9、，血漿再經(jīng)第二次重離心，上清血漿分入第3袋中，速凍并冰凍保存，如符合的時(shí)間要求，制備成新鮮冰凍血漿。.3.2 紅細(xì)胞、濃縮血小板（PC）、乏血小板血漿（PPP）的制備程序（富血小板血漿法）：第一次輕離心，制備富含血小板血漿（PRP）和紅細(xì)胞，紅細(xì)胞含一定量血漿及保存液。再次將PRP袋重離心，制備PC和PPP，不保存PC容量留2530ml/袋，保存PC容量為5070ml/袋。PC在室溫靜置12小時(shí)，使其自然解聚后，輕搖血袋使其成為均勻混懸液，在22±2的環(huán)境下振蕩保存；PPP速凍并冰凍保存。3.2.2.3.3 紅細(xì)胞、冷沉淀凝血因子血漿的制備程序：第一次重離心，將血漿分入第2袋，第3袋

10、保存液加入原袋紅細(xì)胞內(nèi)，若血漿外觀符合質(zhì)量要求即與另一空袋立即速凍并冰凍保存，待制備冷沉淀凝血因子使用（冷沉淀凝血因子制備詳見3.6）。.4 四聯(lián)袋制備(34種血液成分).4.1 紅細(xì)胞、濃縮血小板、冷沉淀凝血因子及冷上清的制備程序（PRP法）：第一次輕度離心，將PRP分入第2袋，原袋紅細(xì)胞與保存液混合，即為懸浮紅細(xì)胞。PRP再次重度離心，制成PC和PPP，PC容量同，PPP及空袋一起速凍并冰凍保存（冷沉淀凝血因子及冷上清的制備詳見3.6）。.4.2 紅細(xì)胞、濃縮血小板、新鮮冰凍血漿(FFP)的制備程序（白膜法）：第一次重離心，將血漿分入第2袋，將含有一定量血漿及白膜層分入第3袋；再將第4袋的

11、紅細(xì)胞保存液加入原袋與紅細(xì)胞混合即為少白細(xì)胞的紅細(xì)胞。第3袋及另一空袋再次輕離心，分離制備成PC。血漿制備符合.2，即為FFP。3.3 開放性血液成分制備 對(duì)血液成分制備的環(huán)境要求見.3 血液成分制備所需器具應(yīng)高壓消毒，所用剪刀、鹽水、針頭等器材均應(yīng)每袋一份，防止交叉污染。 工作人員進(jìn)入凈化室前應(yīng)洗手并穿戴工作服、口罩、帽子和手套。操作應(yīng)符合無(wú)菌技術(shù)操作規(guī)程的要求。 血液成分離心、制備程序參見多聯(lián)袋血液成分制備。3.4 洗滌紅細(xì)胞制備 鹽水聯(lián)袋式洗滌紅細(xì)胞（手工法）：用三聯(lián)鹽水袋或四聯(lián)鹽水袋洗滌紅細(xì)胞時(shí)，應(yīng)使用無(wú)菌導(dǎo)管連接設(shè)備連接紅細(xì)胞袋和鹽水袋。 .1 三聯(lián)鹽水袋洗滌紅細(xì)胞三聯(lián)鹽水袋為3個(gè)容

12、積為400ml的單袋，用塑料管道相連的密閉無(wú)菌、無(wú)熱原系統(tǒng)。每袋內(nèi)裝有200ml注射用生理鹽水，首袋有游離管或接穿刺針頭一個(gè)，3個(gè)袋子之間用導(dǎo)管夾夾住，彼此不相通。.1.1 凡未超過保存期的紅細(xì)胞均可洗滌。.1.2 將三聯(lián)鹽水袋首袋上的針頭插入紅細(xì)胞袋的進(jìn)針座或用無(wú)菌導(dǎo)管連接設(shè)備與紅細(xì)胞袋相連，使首袋內(nèi)的鹽水緩慢流入紅細(xì)胞袋內(nèi)，邊加鹽水邊混合，將中間塑料管道用導(dǎo)管夾夾住。.1.3 4個(gè)袋子分別裝于兩個(gè)離心杯中（一側(cè)裝血袋與空袋，另側(cè)裝兩個(gè)鹽水袋），平衡后，離心杯對(duì)稱放入離心機(jī)內(nèi)離心。.1.4 離心后將血袋輕輕取出，懸掛于支架上或放入分漿夾中，將上清液及白膜層分入空袋內(nèi)，然后熱合并切斷相連接的導(dǎo)

13、管，棄去裝有上清液和白膜層的廢液袋。.1.5 依次反復(fù)洗滌紅細(xì)胞至少3次。.1.6 最后一次擠出上清液及殘余白膜后灌入生理鹽水制成洗滌紅細(xì)胞。.2 四聯(lián)袋洗滌紅細(xì)胞：四聯(lián)袋為4個(gè)容積為300ml（或350ml）的單袋，用塑料管道相連無(wú)熱原、無(wú)菌的密閉系統(tǒng)。每袋內(nèi)裝有100150ml注射用生理鹽水，各袋之間用導(dǎo)管夾夾住，彼此不相通。.2.1 凡未超過保存期的紅細(xì)胞均可洗滌。.2.2 將連接管與紅細(xì)胞袋相連，使首袋內(nèi)的鹽水緩慢流入紅細(xì)胞袋內(nèi)，邊加鹽水邊混合，混勻后將中間塑料管用導(dǎo)管夾夾住。.2.3 將5個(gè)袋子按要求放入離心機(jī)內(nèi)離心。.2.4 離心后將血袋輕輕取出，懸掛于支架上或放入分漿夾中，把上清

14、和白膜層分入空袋中，熱合并切斷相連接的導(dǎo)管，棄去廢液袋。.2.5 同.2.6 同. 開放式洗滌紅細(xì)胞.1 凡未超過保存期的紅細(xì)胞均可洗滌。.2 在百級(jí)凈化臺(tái)內(nèi)按無(wú)菌操作技術(shù)將無(wú)菌、無(wú)熱原生理鹽水加入被洗滌的紅細(xì)胞袋內(nèi)，熱合后離心。.3 在百級(jí)凈化臺(tái)內(nèi)分出上清液及白膜層至廢液袋中。.4 同.5 同. 機(jī)器洗滌紅細(xì)胞 .1 選擇適用于血細(xì)胞洗滌設(shè)備所規(guī)定的儲(chǔ)存期以內(nèi)的紅細(xì)胞。.2 按照細(xì)胞洗滌設(shè)備操作說(shuō)明書進(jìn)行洗滌制備。所制備的洗滌紅細(xì)胞須達(dá)到全血及成分血質(zhì)量要求。3.5 少白細(xì)胞的紅細(xì)胞制備（濾器過濾法） 白細(xì)胞過濾方法按濾器生產(chǎn)廠家說(shuō)明書操作。 檢查待濾過血液的外觀質(zhì)量并充分混勻血液。 根據(jù)血

15、液的規(guī)格選擇合格的白細(xì)胞過濾器。 關(guān)閉過濾器袋上所有導(dǎo)管夾，用無(wú)菌導(dǎo)管連接設(shè)備將過濾器與血袋連接。 打開濾器兩端夾子使主血袋內(nèi)血液通過濾器流入貯存袋內(nèi)，關(guān)閉濾器兩端夾子。 用熱合機(jī)熱合切斷少白細(xì)胞制品與濾器裝置的連接,并留取血樣以供臨床血型鑒定及配血交叉使用。3.6 冷沉淀凝血因子制備 離心法：.1 取出待制備冷沉淀的新鮮冰凍血漿（FFP），置室溫中約5分鐘，待雙聯(lián)袋導(dǎo)管（連接管）變軟后進(jìn)行制備。.2 在26水浴裝置中融化血漿。.3 當(dāng)血漿基本融化時(shí)，取出血漿，在2±2的環(huán)境線重離心，使冷沉淀凝血因子下沉于塑料袋底部。.4 離心后將上清分入空袋內(nèi)，血袋底部的沉淀內(nèi)大約含有2030ml

16、血漿，即為冷沉淀凝血因子。 虹吸法：.1 同.2 將新鮮冰凍血漿袋置于26水浴裝置中，另一空袋懸于水浴箱外且位置低于血漿袋，兩袋形成一定的高度落差。.3 新鮮冰凍血漿融化時(shí)，上清血漿隨時(shí)被虹吸入空袋中，冷沉淀遺留在新鮮冰凍血漿袋中。在融化過程中控制水浴溫度在26。.4 待新鮮冰凍血漿融化至約4050ml時(shí)，即為冷沉淀凝血因子。3.7 冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞制備 手工制備法（羥乙基淀粉鹽溶液洗滌法）：.1 紅細(xì)胞甘油化.1.1 取采集之日起6天內(nèi)的全血或懸浮紅細(xì)胞，離心去除上清及白膜層，用無(wú)菌接管技術(shù)將1單位紅細(xì)胞轉(zhuǎn)移至400ml血袋內(nèi)。.1.2 紅細(xì)胞在無(wú)菌條件下，緩慢滴加復(fù)方甘油溶液，邊加邊振

17、蕩，使其充分混勻。.1.3 在室溫中靜置平衡30分鐘,置-65以下保存。.2 解凍冰凍紅細(xì)胞從-65以下的冰箱中取出冰凍紅細(xì)胞，立即放入3740恒溫水浴箱中，輕輕振動(dòng)使其快速融化，直至冰凍紅細(xì)完全解凍。.3 冰凍紅細(xì)胞去甘油化紅細(xì)胞去甘油化，采取滲透壓梯度遞減方法洗滌。洗滌冰凍紅細(xì)胞質(zhì)量須達(dá)到全血及成份血質(zhì)量要求。 全自動(dòng)細(xì)胞洗滌設(shè)備操作程序.1 紅細(xì)胞加甘油冰凍操作程序.1.1 將400ml全血低溫輕離心后擠去白膜和血漿，得到濃縮少白細(xì)胞紅細(xì)胞制劑，用無(wú)菌導(dǎo)管連接設(shè)備將其與8001000ml血袋無(wú)菌接合，然后將濃縮少白細(xì)胞紅細(xì)胞制劑轉(zhuǎn)移至8001000ml血袋中。.1.2 將濃縮少白細(xì)胞紅細(xì)

18、胞制品用無(wú)菌導(dǎo)管連接設(shè)備與配套耗材的無(wú)菌接合。.1.3 紅細(xì)胞甘油化按設(shè)備操作說(shuō)明書操作。.1.4 將甘油化紅細(xì)胞，室溫靜置30分鐘，離心去上清液， -65以下保存。.2 紅細(xì)胞解凍去甘油操作程序.2.1 將-65以下保存的冰凍紅細(xì)胞取出，放入水浴箱中37-40，輕輕振動(dòng)使其快速融化，直至冰凍紅細(xì)完全解凍至液體狀態(tài)后取出。.2.2 紅細(xì)胞去甘油按設(shè)備操作說(shuō)明書操作。3.8 病毒滅活血漿(亞甲藍(lán)光化學(xué)法) 亞甲藍(lán)光化學(xué)法血漿病毒滅活原理為：亞甲藍(lán)是一種光敏劑，可以與病毒的核酸以及病毒的脂質(zhì)包膜相結(jié)合，在可見光的作用下發(fā)生光化學(xué)反應(yīng)，使病毒核酸斷裂、包膜破損，從而達(dá)到病毒滅活效果。 病毒滅活血漿操

19、作規(guī)程3.8.2.1 根據(jù)設(shè)備操作說(shuō)明書設(shè)置醫(yī)用血漿病毒滅活柜的參數(shù)。3.8.2.2 根據(jù)血漿的規(guī)格選擇適宜、質(zhì)量合格的耗材。3.8.2.3 用無(wú)菌導(dǎo)管連接設(shè)備將血漿袋與耗材連接。 3.8.2.4 將血袋懸掛于支架上，打開導(dǎo)管夾，使血漿經(jīng)“亞甲藍(lán)添加元件”，流入光照袋。3.8.2.5 在醫(yī)用血漿病毒滅活柜中進(jìn)行光照。3.8.2.6 光照處理后的血漿經(jīng)病毒滅活裝置配套用輸血過濾器過濾，濾除亞甲藍(lán)和絕大部分白細(xì)胞,即得病毒滅活血漿。3.9 輻照血 采用血液輻照儀，用2530Gy射線照射以滅活含有白細(xì)胞的血液成分制品中的活性淋巴細(xì)胞，從而防止輸血相關(guān)移植物抗宿主?。═A-GVHD）的發(fā)生。 按照輻照

20、儀說(shuō)明書的要求，設(shè)置程序及參數(shù)。 輻照血液制品，按照輻照儀說(shuō)明書的操作規(guī)程操作。3.10 速凍血漿操作規(guī)程 速凍是保存血漿內(nèi)各種有效蛋白質(zhì)成分及生物活性因子的重要條件。為達(dá)到快速冷凍的目的，可采用速凍裝置，具體操作按速凍設(shè)備操作說(shuō)明書操作。311 血液成分保存的條件及有效期限（見表3-1）表3-1 血液成分保存、運(yùn)輸?shù)臈l件及有效期限編號(hào)品名貯存溫度運(yùn)輸溫度最終有效期限備注1全 血26210ACD/CPD/CP2D：21天CPDA：35天2紅細(xì)胞26210ACD/CPD/CP2D：21天CPDA-1：35天特殊添加液：42天開放系統(tǒng)：24小時(shí)3冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞26210解凍后24小時(shí)4冰凍紅細(xì)胞（40%甘油）冰凍紅細(xì)胞（20%甘油）65120冷凍狀態(tài)10年采集后6天內(nèi)冷凍5去白細(xì)胞紅細(xì)胞26210ACD/CPD/C