大孔吸附樹脂純化貫葉連翹總黃酮工藝研究

1、大孔吸附樹脂純化貫葉連翹總黃酮工藝研究    【摘要】   目的 研究大孔吸附樹脂分離和純化貫葉連翹總黃酮的工藝條件。方法 以總黃酮的吸附量和解吸率為考察指標，對4種不同類型的樹脂進行評價。結(jié)果 AB8型大孔吸附樹脂對貫葉連翹中總黃酮具有較好的分離能力。結(jié)論 采用本法分離純化貫葉連翹總黃酮簡單可行。 【關(guān)鍵詞】   貫葉連翹； 總黃酮； 大孔吸附樹脂； 純化    【Abstract】  Objective To obtain the optimal conditions for separat

2、ing the flavonoids from the extract of Hypericum perforactum L. by selecting appropriate macroporous absorption resins.Methods Separating efficiency of four types of macroporous absorption were evaluated by measuring the absorption ratio and eluting ratio of flavonoids. Results The AB8 macroporous a

3、bsorption resin had better separating efficiency. Conclusion This method is simple,feasible and suitable for industry production.    【Key words】  Hypericum perforactum L.；flavonoids；macroporous absorption resin; purification    貫葉連翹（Hypericum perforatum）屬金絲桃屬藤黃科多年生

4、草本植物，全草可入藥。這種野生植物的全草或帶根全草有藥用價值。貫葉連翹具有清熱解毒、收斂止血、利濕等功效，主要用于止血、抗炎、 治療 婦科病等。目前，用貫葉連翹提取物制成的制劑已在歐美大量上市，用于治療抑郁癥、甲型和乙型肝炎及艾滋病等。此外，還有 文獻 報道其有抗腫瘤活性。貫葉連翹含有多種具有生物活性的化學(xué)成分，不同成分具有不同的藥用價值，成分相互之間發(fā)揮協(xié)同作用從而用于不同疾病的治療。因此，分離純化貫葉連翹總黃酮具有重要意義。    大孔樹脂物理化學(xué)穩(wěn)定性高、比表面積大、吸附容量大、選擇性好、吸附速度快、解吸條件溫和、再生處理方便、使用周期長，現(xiàn)已廣泛 應(yīng)用 于

5、天然產(chǎn)物的分離和富集。但大孔吸附樹脂型號很多，性能用途各異，因此本文特選了四種不同型號的大孔樹脂，從中篩選出分離純化效果最好的樹脂種類。    1  試藥     貫葉連翹（購于五塊石中藥材市場）；AB8、 D101、 NKA、 D4020大孔吸附樹脂，其余試劑均為分析純。     2  方法與結(jié)果     2.1  總黃酮含量的測定可見光分光光度計下400700 nm 處掃描，標準品最大吸收波長511.3 nm，樣品液最大吸收波長為510.5

6、nm，綜合上述實驗擬定510 nm為檢測波長。 的標準品溶液。精密量取上述蘆丁標準品溶液0 ml、 1 ml、 2 ml、 3 ml、 4 ml、 5 ml、 6 ml分別于7支50 ml容量瓶中，編號，各加水至6 ml，加入1ml 5% 亞硝酸鈉溶液，搖勻，靜置6 min，加入1 ml 10% Al(NO3)3 溶液，搖勻，放置6 min，后加入4.3%的NaOH溶液10 ml，再加水至刻度，搖勻，放置15 min，以0號容量瓶為空白試劑，照紫外可見分光光度法（ 中國 藥典2005年版一部附錄VA），在波長510nm處測定吸光度（結(jié)果見表1）。表1  各樣品液吸光度表以吸光度A和濃

7、度C進行回歸，得線性回歸方程為：C= 0.093 0A+0.000 2，r=0.999 83，線性范圍0.008 mg/ml0.048 mg/ml.     2.2  樣品溶液的制備    藥材的取樣：因為貫葉連翹是全草入藥，且在各個部位的總黃酮的含量不一致，為使取樣均一性且保證其全草入藥，故將其分為枝和葉兩部分分別粉碎干燥，混勻后稱取，以消除取樣帶來的誤差。    貫葉連翹中黃酮的提取：選用4種方法提取貫葉連翹中的黃酮，分別是：乙醇回流提取法、堿液提取法、超聲提取法、滲漉法。由實驗結(jié)

8、果得堿提效果最佳，后進行堿提提取條件的考察，包括堿水量、提取次數(shù)、堿水濃度、提取時間，從而確定最佳提取工藝，得到黃酮的提取液。    2.3  靜態(tài)吸附實驗g，分別置120 ml磨口三角瓶中，將樣品液（樣品原液濃度0.076 46 mg/ml，吸光度0.820）過濾，分別精密加樣品液50ml，靜置24 h，充分吸附后，取上層液，過濾，先吸取濾液0.1ml，測得吸光度為0.013，因吸光度在0.30.7之間穩(wěn)定性較好，故初選設(shè)定各吸取1ml，測得吸光度（結(jié)果見表2）。表2  各樹脂吸光度表吸附率 s=（PoPa）/Po. 式中：Po為樣品溶液中總

9、黃酮的初始濃度（mg/ml），Pa為吸附平衡后溶液中總黃酮濃度（mg/ml），由此得到各樹脂的吸附率（結(jié)果見表3）。表3  各型號樹脂吸附率由吸附率可得，相同條件下AB8 吸附最高。    洗脫率的測定：濾出飽和吸附的樹脂，分別精密加入95%乙醇50 ml，在溫度為20 ，震蕩頻率為100 Hz條件下，洗脫1.5 h，待其樹脂顏色基本恢復(fù)白色后，將洗脫液過濾后各吸取3 ml，測定吸光度（結(jié)果見表4）。表4  各型號樹脂洗脫液吸光度 解析率 D=Pd×Vd（PoP1）×Vo×100。式中：P0為吸附前供試樣液中黃酮的

10、質(zhì)量濃度（mgml)；Pl為吸附平衡時上清液中黃酮的質(zhì)量濃度（mg/ml）；Vo為樣液的體積（ml）；Pd為解吸液中黃酮的質(zhì)量濃度（mg/ml）；Vd為解吸定容的體積（ml）。由公式得到各樹脂型號解吸率（結(jié)果見表5）。表5  各型號樹脂解析率由表6得，相同條件下AB8的解析率最高。    上述結(jié)果表明，4種樹脂中AB8具有較好的靜態(tài)吸附效果及解析效果，吸附率高于其他3種樹脂，故在本次實驗中選擇AB8 型樹脂來純化和富集貫葉連翹中黃酮類成分。    可見，在一定范圍內(nèi)，隨著乙醇的濃度增加，吸光值隨之增加，當乙醇的濃度達到60時

11、，吸光值達到最大值，因此，選用60的乙醇進行洗脫。    2.4  動態(tài)洗脫曲線的研究     3  結(jié)  論     不同類型大孔吸附樹脂對同一有效成分的吸附能力有差異，本試驗對D101、D4020、NKA、AB8,四種型號的大孔吸附樹脂進行了篩選,以大孔吸附樹脂的吸附容量及洗脫率為指標, 最終確定AB8型大孔吸附樹脂為貫葉連翹中黃酮的分離樹脂。另外，通過對洗脫劑濃度和劑量的考察，確定最佳洗脫劑為濃度60%的乙醇，最佳洗脫劑劑量為3BV。【 參考 文獻 】   1 侯團章. 貫葉連翹中草藥提取物M.北京： 中國 醫(yī)藥科技出版社, 2000,(1):37.2 江蘇新 醫(yī)學(xué) 院. 中藥大辭典(上)M. 上海：上海 科學(xué) 技術(shù)出版社,1997:102103.3 王浴生,鄧文龍,薛春生.中藥藥理與 應(yīng)用 M. 北京：人民衛(wèi)生出