CMYC突變型P53蛋白在小細胞肺癌中的表達及意義

1、C-MYC、突變型P53蛋白在小細胞肺癌中的表達及意義【關(guān)鍵詞】 C-MYC蛋白；P53蛋白；小細胞肺癌；免疫組織化學(xué) 摘要 目的 研究C-MYC、突變型P53蛋白在小細胞肺癌（SCLC）中的表達并分析其與SCLC臨床病理學(xué)特征及預(yù)后之間的關(guān)系。方法 用免疫組化的方法檢測30例原發(fā)灶及10例正常肺組織中C-MYC、突變型P53蛋白的表達水平，按陽性表達率進行2分析。結(jié)果 SCLC中C-MYC、突變型P53蛋白表達顯著高于正常肺組織。兩者陽性表達都與患者的生存期及SCLC分化程度呈負相關(guān)（P<0.05），與SCLC的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)（P<0.05），與患者的年齡、腫

2、瘤大小無關(guān)（P>0.05）。C-MYC 蛋白表達與腫瘤p-TNM分期呈正相關(guān)（P<0.05），而突變型P53蛋白表達與腫瘤p-TNM分期無相關(guān)性（P>0.05）。結(jié)論 SCLC存在C-MYC、突變型P53蛋白過度表達，提示它們在SCLC發(fā)生、發(fā)展過程中可能起著重要作用。 關(guān)鍵詞 C-MYC蛋白；P53蛋白；小細胞肺癌；免疫組織化學(xué) Abstract Objective This study observed the expression of C-MYC and mutated P53 protein in SCLC,in order to analy

3、se the relationship between their expression and prognosis of the patients as well as clinicpathological characteristic.Methods The immunohistochemical staining method,strepatavidin-peroxidase（S-P）method was used to detect the C-MYC and mutated P53 protein in 30 cases of SCLC.10 normal lung tissues

4、were contrasted.The positive expression was analyzed with 2 test.Results The expression level of the C-MYC and mutated P53 in cancer tissues were significantly higher than that in the normal lung tissues.Their expression were negatively correlated with survival time and differentiation degree （P&

5、;lt;0.05）,positive correlated with lymph nodes metastasis.They were not correlated with age and the size of tumor （P>0.05）.There was a positive correlation between C-MYC protein and p-TNM stages of the cancer （P<0.05）,but mutated P53 protein was not correlated with p-TNM （P>0.05

6、）.Conclusion There are the overexpression of C-MYC and mutated P53 protein in SCLC,which suggests that they may play an important role in the occurrence development of SCLC. Key words C-MYC protein;P53 protein;SCLC;immunohistochemistry 目前人們對非小細胞中的P53基因研究較多，而對小細胞肺癌中P53基因、C-MYC基因的表達及兩者之間關(guān)系的相關(guān)性研究，國內(nèi)外文獻

7、仍較少。本研究應(yīng)用免疫組化技術(shù)對30例小細胞肺癌組織突變型P53、C-MYC蛋白的表達水平進行分析，以探討突變型P53及C-MYC蛋白表達水平與小細胞肺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系，并用SPSS軟件包進行檢驗兩種蛋白的表達水平與小細胞肺癌臨床病理學(xué)特征及預(yù)后之間的關(guān)系。 1 資料與方法 1.1 一般資料 收集我院19892005年手術(shù)切除的30例小細胞肺癌標本。男27例，女3例；年齡2570歲，平均51.2歲；腫瘤直徑3 cm的20例，腫瘤3 cm的10例；病理分期期10例，期17例，期3例；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移10例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移20例；低分化19例，中高分化11例；所有患者術(shù)后均進行16次化療。對照標本為非腫

8、瘤手術(shù)時收集的正常肺組織。 1.2 主要試劑 鼠抗人C-MYC；突變型P53單克隆抗體；生物素標記L的羊抗鼠第二抗體IgG；DAB顯色劑均購自武漢博士德試劑公司。 1.3 方法 10%中性甲醛固定，石蠟包埋，石蠟塊連續(xù)5 m切片，采用免疫組化SP法對C-MYC，突變型P53蛋白進行檢測，嚴格按試劑盒推薦方法進行。 1.4 結(jié)果判斷 每張切片均在400倍的顯微鏡下觀察5個視野，每個視野100個細胞，然后計算陽性細胞百分率，C-MYC主要表現(xiàn)為細胞核棕黃色顯色，少數(shù)細胞漿顯色；突變型P53陽性表現(xiàn)為細胞核棕黃色顯色。陰性（-）：陽性細胞數(shù)<10%；陽性（+）：陽性細胞數(shù)10%1。數(shù)據(jù)

9、采用2檢驗，P<0.05表示有相關(guān)或差異有顯著性。 2 結(jié)果 2.1 小細胞肺癌和正常肺組織中C-MYC、P53蛋白的表達 見表1。 表1 小細胞肺癌和正常肺組織中C-MYC、P53蛋白的表達（略） 2.2 C-MYC及P53蛋白表達與SCLC臨床病理特征的關(guān)系 見表2。表2 C-MYC及P53蛋白表達與SCLC臨床病理特征的關(guān)系（略） 3 討論 近年來，肺癌的發(fā)病率呈不斷上升的趨勢，成為威脅人類健康最常見的惡性腫瘤之一。大量實驗研究表明：P53基因的突變或缺失與肺癌的發(fā)生有密切關(guān)系2，人類SCLC中P53基因突變是最常見的基因突變之一，P53蛋白是突變型P53基因產(chǎn)物，它的聚集

10、與許多惡性腫瘤發(fā)生關(guān)系密切。P53蛋白過度表達與臨床肺癌病理學(xué)特征的相關(guān)性己有較多的報道，大多數(shù)的研究結(jié)果認為P53過度表達預(yù)示著肺癌患者的侵襲力強、預(yù)后差3。本實驗研究對30例SCLC的石蠟標本切片進行P53基因突變免疫組化染色，結(jié)果顯示20例陽性（20/30），突變型P53蛋白陽性率達66.67%，其與患者的年齡、腫瘤大小、p-TNM分期無明顯相關(guān)性，而在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及低分化程度的病例中表達較高，突變型P53蛋白的高表達可能預(yù)示著該腫瘤惡性度高、轉(zhuǎn)移早、預(yù)后差。本組研究未觀察到突變型P53與p-TNM分期的關(guān)系，可能與SCLC的病程關(guān)系不明顯。 近來研究表明C-MYC基因同時參與細胞凋亡的

11、調(diào)節(jié)，在胸部腫瘤形成過程中處于重要地位4。幾乎所有的SCLC患者存在C-MYC癌基因的過量表達，尤其是曾接受化療的患者5。C-MYC基因的過度表達的SCLC患者復(fù)發(fā)率高、生存期短6。本實驗研究了C-MYC蛋白在SCLC中的表達情況及其與臨床病理學(xué)特征和預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果顯示：14例表達陽性（14/30），陽性率為46.67%，C-MYC蛋白過度表達在分化差的、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及p-TNM晚期的病例中表現(xiàn)突出，且與患者的生存期呈負相關(guān)，提示C-MYC蛋白過度表達是SCLC較晚期分子事件，從而可望為評估預(yù)后提供分子水平依據(jù)。 C-MYC癌基因的過量表達和P53突變是SCLC發(fā)展中的常見事件。本研究發(fā)現(xiàn)兩

12、種蛋白的表達具有一定的相關(guān)性，在同一組織中，突變型P53、C-MYC可同時有高表達。兩種蛋白均被檢出異常者不僅復(fù)發(fā)率高，而且多出現(xiàn)在惡性程度高的組織類型中，表明P53、C-MYC基因間可能具有協(xié)同作用。本實驗患者因為均接受16次化療，故尚不能排除是否化療對突變型P53、C-MYC 蛋白表達有影響，是否經(jīng)過化療后未被殺死的瘤細胞發(fā)生了某種變異而獲得了更加惡性的表型。 本實驗從免疫組化方面研究了突變型P53、 C-MYC蛋白的表達，發(fā)現(xiàn)兩種蛋白在SCLC中均有較高表達。因此突變型P53、 C-MYC蛋白的高表達，可作為診斷SCLC的重要參考指標之一。兩種蛋白與SCLC的生物學(xué)行為及手術(shù)預(yù)后有重要關(guān)

13、系，有希望作為一項較好的判斷SCLC預(yù)后的指標。SCLC的高侵襲力、高轉(zhuǎn)移力和預(yù)后差與突變型P53、 C-MYC蛋白高表達的相互關(guān)系，需要積累更多的病歷資料來確證。而闡明突變型P53、C-MYC的生物學(xué)特征和作用機制對于SCLC的診斷、生物學(xué)行為的判斷、發(fā)生學(xué)及治療等都具有重要意義，這方面的工作尚待進一步研究。 參考文獻 1 Stefanaki K,Rontogiannis D. Immunohistochemical detection of bcl2,P53,mdm2,and PZl wafl protein in smallcell lung carcinomas. Anticancer

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