IL17及IFNγ在潰瘍性結(jié)腸炎中的表達(dá)

1、IL-17及IFN-在潰瘍性結(jié)腸炎中的表達(dá) 作者：何英 李春明 侯鳳雪 劉玉杰 摘要 目的:檢測(cè)Th17類細(xì)胞因子IL-17和Th1類細(xì)胞因子IFN-在潰瘍性結(jié)腸炎(UC)患者中的表達(dá),以此來探討潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)病機(jī)制。方法:用ELISA法分別檢測(cè)潰瘍性結(jié)腸炎患者和正常對(duì)照組結(jié)腸組織及血單核細(xì)胞中IL-17和IFN-的表達(dá)。結(jié)果:UC組結(jié)腸組織中IL-17表達(dá)較正常對(duì)照組顯著增加(P<0.05);而UC組結(jié)腸組織IFN-表達(dá)較正常對(duì)照組無顯著增加(P>0.05);UC組血單核細(xì)胞IL-17、IFN-表達(dá)較正常對(duì)照組無顯著差異(P>0.05)。結(jié)論:局部

2、IL-17升高在UC的發(fā)病中可能起重要作用。 關(guān)鍵詞 Th17細(xì)胞;Th1細(xì)胞;潰瘍性結(jié)腸炎;IL-17;IFN- Abstract Objective:Th17 cytokines IL-17 and Th1 type cytokines IFN- in ulcerative colitis (UC) patients expressed so as to explore the pathogenesis of ulcerative colitis. Methods:ELISA,were detected in patients with ulcerative colitis and nor

3、mal colon tissue and the control group blood mononuclear cells of IL-17 and IFN- expression.Results:UC Colonic tissue IL-17 expression compared with control group increased significantly (P<0.05);while the UC group colon of IFN- expression compared with control group had no significant increa

4、se (P>0.05);UC group blood mononuclear cell IL-17,IFN- expression compared with control group had no significant difference (P>0.05). Conclusion:Local IL-17 increased in the pathogenesis of UC may play an important role. Key words Th17 cells;Th1 cells;Ulcerative colitis;IL-17;IFN- 潰瘍性結(jié)

5、腸炎(ulcerative colitis,UC)是一類病因不明的胃腸道慢性非特異性炎癥,近年來其發(fā)病率不斷增加,已成為消化系統(tǒng)常見疾病和慢性腹瀉的主要病因1。目前大多數(shù)研究者認(rèn)為,該病的發(fā)病多與環(huán)境、遺傳、感染和免疫學(xué)因素有關(guān),是一種多基因參與的作用于免疫系統(tǒng)和靶器官的疾病,而免疫學(xué)因素在其發(fā)病過程中起至關(guān)重要的作用2。CD4+T細(xì)胞是免疫應(yīng)答的重要效應(yīng)細(xì)胞,本研究通過檢測(cè)UC患者結(jié)腸組織和外周血單核細(xì)胞Th17類細(xì)胞因子IL-17和Th1類細(xì)胞因子IFN-的表達(dá),以此來探討UC的發(fā)病機(jī)制。 1 資料與方法 1.1 一般資料 UC組選擇2008年1月2009年10月哈爾濱市第一醫(yī)院門診及住院

6、確診為潰瘍性結(jié)腸炎患者25例,診斷均符合2007年對(duì)我國炎癥性腸病診斷治療規(guī)范的共識(shí)意見中的診斷標(biāo)準(zhǔn)3。其中,男患12例,女患13例,年齡1870歲,輕度UC患者7例,中度UC患者14例,重度UC患者4例。對(duì)照組10例健康者,對(duì)照組與UC組相比年齡、性別構(gòu)成差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 1.2 實(shí)驗(yàn)材料 UC組結(jié)腸鏡下選擇病變最顯著的腸段結(jié)腸組織3塊活檢,對(duì)照組取正常腸組織3塊活檢,結(jié)腸組織均放入液氮罐中保存。另外,UC組和對(duì)照組均清晨空腹取外周血。 1.3 主要試劑 IL-17和IFN- ELISA試劑盒購自晶美生物工程有限公司;Ficoll-Hypaque分離液為天津市

7、川頁生化制品有限公司產(chǎn)品。 1.4 方法 1.4.1 外周血單核細(xì)胞(PBMC)培養(yǎng)將血置于抗凝管中,經(jīng)Ficoll- Hypaque分離液密度梯度離心,得到PBMC。取1×106/ml PBMC將其置于加有10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液中,在37、5%CO2條件下培養(yǎng)24 h,取上清液。 1.4.2 ELISA方法檢測(cè)PBMC中IL-17、IFN-嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)行操作,終止反應(yīng)后在450 nm處讀取各孔吸光度值,以各孔OD值為縱坐標(biāo),以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品OD值查找對(duì)應(yīng)的濃度。 1.4.3 結(jié)腸組織IL-17、IFN-測(cè)定將取得的結(jié)腸標(biāo)本在含有

8、10 mmol/L DTT的HBSS中清洗15 min,再用HBSS洗凈,測(cè)濕重,并將其置于加有10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液中,在37、5%CO2條件下培養(yǎng)24 h,取上清液,再按ELISA操作說明進(jìn)行操作。終止反應(yīng)后在450 nm處讀取各孔吸光度值,以各孔OD值為縱坐標(biāo),以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品OD值查找對(duì)應(yīng)的濃度。 1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)均數(shù)采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行方差分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2 結(jié)果 2.1 ELISA法檢測(cè)PBMC中IL-17及IFN- 見表1。25例UC患者PBMC中IL-17與正常對(duì)照組PBM

9、C中IL-17比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);25例UC患者PBMC中IFN-與10例正常對(duì)照組PBMC中IFN-比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 2.2 ELISA法檢測(cè)結(jié)腸組織IL-17及IFN- 見表2。25例UC患者結(jié)腸組織中IL-17與10例正常對(duì)照組結(jié)腸組織中IL-17比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);25例UC患者結(jié)腸組織中IFN-與10例正常對(duì)照組結(jié)腸組織中IFN-比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 3 討論 長期以來,人們按照CD4+ T細(xì)胞分化和功能特征將其分為輔助性T細(xì)胞(Thelp cel

10、l)和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cells,Treg)4。CD4+輔助性T細(xì)胞(Th)在適應(yīng)性免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用,人們根據(jù)其產(chǎn)生細(xì)胞因子的不同,把APC活化的抗原特異性CD4+ T細(xì)胞主要分為兩個(gè)亞群:Th1細(xì)胞亞群和Th2細(xì)胞亞群。Th1細(xì)胞主要產(chǎn)生干擾素(IFN-)和IL-2,其效應(yīng)與IFN-及IL-2的作用有關(guān),能調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫應(yīng)答,清除某些細(xì)胞內(nèi)寄生的病原體;Th2細(xì)胞產(chǎn)生IL-4、IL-5和IL-13,其效應(yīng)主要與IL-4的作用有關(guān),介導(dǎo)體液免疫應(yīng)答和超敏反應(yīng),能增強(qiáng)對(duì)寄生蟲的清除作用參與變態(tài)反應(yīng)5。近年研究中發(fā)現(xiàn)一種特殊的產(chǎn)生白介素17 (interleuki

11、n 17,IL-17)的輔助型T 細(xì)胞,其具有重要的免疫調(diào)節(jié)作用,被稱為Th17細(xì)胞亞群。Th17細(xì)胞介導(dǎo)炎性反應(yīng)(防御胞外病原菌的感染)、自身免疫性疾病、腫瘤和移植排斥等的發(fā)生和發(fā)展6。 過去人們認(rèn)為Th1細(xì)胞是自身免疫性疾病發(fā)病的主要原因,但缺乏IFN-、IFN-R或STAT1的動(dòng)物對(duì)試驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜(EAU)高度易感;STAT1缺陷鼠可發(fā)生嚴(yán)重的EAE,伴有中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)M、中性細(xì)胞浸潤,這說明除Th1外,還存在另一類能誘導(dǎo)自身免疫的細(xì)胞亞群7。因此,以前關(guān)于Th1細(xì)胞是引起自身免疫病的主要效應(yīng)細(xì)胞的報(bào)道是一種誤解。在類風(fēng)

12、濕性關(guān)節(jié)炎(RA)、多發(fā)性硬化、哮喘、狼瘡和移植排斥反應(yīng)中IL-17的表達(dá)都增加8。Kotake等人研究提示在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者關(guān)節(jié)滑液中IL-17的含量,明顯高于骨性關(guān)節(jié)炎患者關(guān)節(jié)滑液中IL-17的含量。由此可見,Th17細(xì)胞很可能在自身免疫病中發(fā)揮關(guān)鍵性作用。 Ogawa A9應(yīng)用抗-CD3或抗-CD68與抗-IL-17進(jìn)行雙重染色,發(fā)現(xiàn)T細(xì)胞和單核/巨噬細(xì)胞是UC患者炎癥局部IL-17的來源。這與IL-17的生物學(xué)特性一致,因此,可以說來源于T細(xì)胞和單核/巨噬細(xì)胞的IL-17,可以誘導(dǎo)并維持UC黏膜炎癥應(yīng)答,并證實(shí)了IL-17表達(dá)與疾病活動(dòng)指數(shù)呈正相關(guān),局部IL-17濃度的高低也反映了U

13、C疾病炎癥的嚴(yán)重程度。 本實(shí)驗(yàn)用ELISA方法檢測(cè)UC患者結(jié)腸組織和外周血單核細(xì)胞Th17類細(xì)胞因子IL-17和Th1類細(xì)胞因子IFN-的表達(dá),結(jié)果為UC組結(jié)腸組織中IL-17表達(dá)明顯增高;而UC組結(jié)腸組織IFN-及血單核細(xì)胞IL-17、IFN-表達(dá)均無顯著增加。說明局部IL-17增高,可以引發(fā)UC的發(fā)病。目前生物治療在潰瘍性結(jié)腸炎的治療中發(fā)揮著越來越重要的作用10,通過本實(shí)驗(yàn)我們可以進(jìn)一步推測(cè)阻斷IL-17分泌可能為治療UC的一個(gè)新的手段。 參考文獻(xiàn) 1鄭家駒,史肖華,郭志榮.炎癥性腸病的流行病學(xué)研究方法及進(jìn)展J.中華內(nèi)科雜志, 2009,48(6):522-523. 2盛劍秋,陸曉娟.炎癥

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