P27和skp2在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其意義

1、P27和skp2在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其意義【摘要】 目的 探討肝細(xì)胞癌P27和skp2蛋白的表達(dá)情況與臨床病理意義。方法 用免疫組化二步法檢測P27和skp2在60例肝細(xì)胞癌及20例癌旁組織中的表達(dá)。結(jié)果 60例肝細(xì)胞癌P27的陽性表達(dá)率為23%(14/60)，癌旁組織為80%(16/20)，60例肝細(xì)胞癌高分化癌陽性表達(dá)率為47%(7/15)，低分化癌為16%(7/45)。P27在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)明顯低于癌旁組織，P27蛋白的表達(dá)隨病理分級增高而降低。60例肝細(xì)胞癌skp2陽性表達(dá)率為47%(28/60) ，癌旁組織為15%(3/20)，60例肝細(xì)胞癌高分化癌陽性表達(dá)率13%(2/15)，低

2、分化癌為58%(26/45)，可見skp2在肝細(xì)胞癌中表達(dá)明顯高于癌旁組織(P<0.05)，低分化癌明顯高于高分化癌(P<0.01)。 結(jié)論 P27和skp2蛋白的表達(dá)情況與肝細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展及惡性度有關(guān)。 【關(guān)鍵詞】 肝細(xì)胞癌 P27 skp2 免疫組織化學(xué)Abstract:Objective To explore the expression and significance of P27 and skp2 proteins in hepatocellular carcinoma (HCC). Methods Immunohistochemical(S-P) m

3、ethod was used to detect the expression of P27 and skp2 proteins in the 60 patients with HCC and 20 cases of peri-cancer tissues. Results The positive rate of P27 protein in 60 cases of hepatocellular carcinoma was 23% , that in the adjacent tumor tissue was 80% , The positive rate of p27 protein ex

4、pression was significantly lower in tumor than in adjacent tumor tissue. The expression of p27 protein becomes lower with the increase in grading. The positive rate of skp2 protein in 60 cases of hepatocellular carcinoma was 47% , that in the adjacent tumor was 15% , The positive rate of skp2 protei

5、n expression was significantly higher in tumor than that in adjacent tumor tissue(P<0.05), lower grade differentiation was significantly higher than high grade differentitiation (P<0.01).Conclusions Expression of p27 and skp2 protein is closely correlated to the occurrence, development

6、 and malignancy degree of hepatocellular carcinoma.Keywords:hepatocellular carcinoma; protein p27; protein skp2; immunohistochemistryp27是skp2降解的靶蛋白，關(guān)于p27和skp2在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)研究甚少，本文檢測60例肝細(xì)胞癌p27和skp2蛋白的表達(dá)情況，以探討它們在肝細(xì)胞癌中的作用及臨床病理意義。1材料與方法1.1標(biāo)本來源收集我院2004.8-2007.8手術(shù)切除，經(jīng)病理證實的60例肝細(xì)胞癌標(biāo)本，患者年齡(18-66)歲，其中男性42例，女性18例。術(shù)

7、前均未行化療和放療，其中高分化癌15例，低分化癌45例，同時取20例癌旁組織作對照。所有標(biāo)本均為中性福爾馬林固定，石蠟包埋，4m厚切片。1.2免疫組織化學(xué)操作步驟按免疫組化試劑盒說明進(jìn)行，用已知的乳腺癌陽性片作為陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，中性樹膠封片。1.3結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)p27和skp2判定標(biāo)準(zhǔn)參考文獻(xiàn)1以細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒沉淀為陽性細(xì)胞(圖1，2)，陽性細(xì)胞率 >10%為陽性，在病變處隨機(jī)選取至少5個高倍視野(×400)，計數(shù)1000個細(xì)胞核，計算陽性細(xì)胞所占的百分率，作為p27和skp2的陽性率，每例標(biāo)本重復(fù)三次，由兩位有經(jīng)驗的

8、病理醫(yī)師在沒有患者任何臨床資料的情況下采用雙盲法進(jìn)行評估。1.4統(tǒng)計學(xué)處理采用t檢驗和x2檢驗。肝細(xì)胞癌p27蛋白表達(dá)細(xì)胞核陽性。S-P法10×10肝細(xì)胞癌skp2蛋白表達(dá)細(xì)胞核陽性。S-P法10×102結(jié)果2.1p27在肝細(xì)胞癌和癌旁組織中表達(dá)見表1。肝細(xì)胞癌與癌旁組織比，x2=20.6, P<0.05 ，高分化與低分化癌比x2=6.09, P<0.052.2skp2在肝細(xì)胞癌和癌旁組織中的表達(dá) 見表2。肝細(xì)胞癌與癌旁組織比，x2=6.34，P<0.05，高分化與低分化癌比x2=8.93，P<0.01。3討論研究表明

9、，肝癌的發(fā)生與細(xì)胞生長調(diào)控機(jī)制紊亂、癌基因的激活、染色體缺失、抑癌基因缺失、黃曲霉素以及HBV和HCV感染等多種因素有關(guān)。P27是近年來發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑家族中重要的一員，作為細(xì)胞周期的負(fù)性調(diào)控因子，被認(rèn)為是一種抑癌基因，可直接抑制Cyclin-CDK復(fù)合物的生物學(xué)活性，從而阻止細(xì)胞通過G1期到S期轉(zhuǎn)換的關(guān)卡。2，3P27基因的突變、丟失與細(xì)胞增殖、癌變有密切關(guān)系。本組資料表明，p27在肝細(xì)胞癌中表達(dá)率為23%，顯著低于癌旁組織(P<0.05)，p27在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)率隨著分化程度的降低而顯著降低。這表明p27在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)降低與肝細(xì)胞癌生物學(xué)行為，腫瘤細(xì)胞

10、發(fā)生發(fā)展等相關(guān)，本文研究結(jié)果表明，p27可以作為一個判斷預(yù)后的有用指標(biāo)。Skp2作為人類F-box蛋白家族中的一員，在許多細(xì)胞周期調(diào)控因子的泛素依賴性蛋白水解途徑中起到特異性識別底物的作用，從而參與細(xì)胞周期的調(diào)控。4我們的研究顯示，skp2在60例肝細(xì)胞癌中47%(28/60)陽性表達(dá)，癌旁組織中為15%(3/20)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，說明skp2與肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系。60例肝細(xì)胞癌中高分化癌13%(2/15)陽性表達(dá)，低分化癌為58%(26/45)，skp2蛋白在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)率隨著分化程度的降低而增高，提示skp2與腫瘤的惡性度有一定關(guān)系。本研究與Koga等5的研究基本吻合，由于

11、skp2的表達(dá)特異性，故對于skp2的檢測可能可以作為判斷肝細(xì)胞癌預(yù)后的一個指標(biāo)，也是中低分化肝細(xì)胞癌的一個治療靶位點?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】 1Oliveira AM, Okuno SH, Nascimento AG, et al. Skp2 protein expression in soft tissue sarcomasJ.J Clin Oncol, 2003, 21(4)722.2Ganoth D, Bornstein G , Ko TK, et al. The cell-cycle regulatory protein CKSL is reguired for SCF (skp2) medi

12、ated ubiquitinylation of p27J.Nat cell Biol, 2001, 3(3)321.3Philipp-staheli J, Payne SR, Kemp CJ. P27kip1: Regulation and Function of a Haplouin sufficient Tumor Suppressor and Its Misregulation in CancerJ.Exp cell Res, 2001, 264(1)148-168.4Nakayama KI, Nakayama K. Regulation of the cell cycle by SCF-type ubiquitin ligasesJ.Semin cell Dev Biol, 2005, 16 (3)32