顯微鏡油鏡的使用和原核微生物形態(tài)與結構的觀察

1、顯微鏡油鏡的使用和原核微生物形態(tài)與結構的觀察一、實驗目的1掌握光學顯微鏡的結構、原理，學習顯微鏡的操作方法和保養(yǎng)2觀察細菌的個體形態(tài)，學會生物圖的繪制。二、顯微鏡的結構、光學原理及其操作方法(一)顯微鏡的結構1顯微鏡各部件構成及名稱(實驗圖-1)實驗圖-12開關和控制旋鈕（實驗圖-2）實驗圖-2（二）光學系統(tǒng)及其光學原理(1)   目鏡：目鏡用螺釘固定在目鏡筒上(2)   物鏡：物鏡裝在轉換器的孔上，物鏡有多種放大倍數(shù)物鏡有低倍(8×、10×、20×三種)、高倍(40×或45×)及油鏡(100×

2、)。物鏡的性能由數(shù)值孔徑(Numerical Aperture ,N.A.)決定,數(shù)值孔徑=n.sin/2,其意為玻片和物鏡之間的折射率乘上光線投射到物鏡上的最大夾角的一半的正弦。光線投射到物鏡的角度越大,顯微鏡的效能越大,該角度的大小決定于物鏡的直徑和焦距。n是影響數(shù)值孔徑的因素,空氣的折射率n=1,水的折射率n=1.33,香柏油的折射率n=1.52,用油鏡時光線a/2為60o,則sin60=0.87。從實驗圖-3可知:實驗圖-3以空氣為介質時：N.A.=1×0.87=0.87以水為介質時：N.A.=1.33×0.87=1.16以香柏油為介質時：N.A.=1.52

3、5;0.87=1.32顯微鏡的性能還依賴于物鏡的分辨率,分辨率即能分辨兩點之間的最小距離的能力。分辨率用表示,=0.61×/N.A(為波長),分辨率與數(shù)值孔徑成正比,與波長成反比。增大數(shù)值孔徑,縮短波長可提高顯微鏡的分辨率,使目的物的細微結構更清晰可見。事實上可見光的波長(0.380.7m)是不可能縮短的,只有靠增大數(shù)值孔徑來提高分辨率。物鏡上標有:N.A.1.25、100×、“0I"、160/0.17、0.16等字樣,其中N.A.1.25為數(shù)值孔徑，100×為放大倍數(shù)，"160/0.17"中160表示鏡筒長，0.17表示要求蓋玻片的

4、厚度。"OI"表示油鏡，(即Oil Immersion)，0.16為工作距離。顯微鏡的總放大倍數(shù)為物鏡放大倍數(shù)和目鏡放大倍數(shù)的乘積。(3)   聚光器：聚光器安裝在載物臺的下面，反光鏡反射來的光線通過聚光器被聚集成光錐照射到標本上，可增強照明度，提高物鏡的分辨率。聚光器可上、下調節(jié)，它中間裝有光圈可調節(jié)光亮度，在看高倍鏡和油鏡時需調節(jié)聚光器，合理調節(jié)聚光器的高度和光圈的大小，可得到適當?shù)墓庹蘸颓逦膱D像。(4)   濾光片：自然光由各種波長的光組成，如只需某一波長的光線，可選用合適的濾光片，以提高分辨率，增加反差和清晰度。濾光片有紫、

5、青、藍、綠、黃、橙、紅等顏色。根據(jù)標本顏色，在聚光器下加相應的濾光片。（三）顯微鏡操作注意事項  1 搬運顯微鏡（實驗圖-4）顯微鏡是精密儀器,因此搬運時要小心。猛烈沖撞和野蠻操作都會造成儀器損壞。震動物鏡,會降低成像的精確度。·搬運顯微鏡時,用雙手握住顯微鏡彎臂。·不要抓住調焦于輪、目鏡筒或載物臺。這些部件容易脫開或移位，可能導致故障。    2調焦手輪（實驗圖-5）當載物臺已經(jīng)到達移動的極限位置之后，請不要繼續(xù)旋轉粗調焦手輪。這些操作都會導致聚焦機構的損壞。 3 浸油觀察只需使用少量的浸油。如果浸油太

6、多，多余的油就會流到載物臺和聚光器上，導致性能降低。 (四)顯微鏡的操作方法1置顯微鏡于固定的桌上，插上電源，打開主機電源開關2調節(jié)瞳距，使左右眼視場重疊合一（實驗圖-6）實驗圖-6  視場3低倍鏡對焦(1)   轉動目鏡屈光度調節(jié)環(huán)，調節(jié)環(huán)底邊與刻度線對齊(2)   取一塊切片放置在載物臺上，使其蓋玻片朝上，使觀察的目的物置于圓孔的正中央。(3)   將10×物鏡移入光路，用調焦手輪調焦。將粗調節(jié)器向下旋轉(或載物臺向上旋轉)，眼睛注視物鏡，以防物鏡和載玻片相碰。當物鏡的尖端距載玻片約0.5cm處時停止

7、旋轉。(4)   左眼向目鏡里觀察，將粗調節(jié)器向上旋轉，如果見到目的物，但不十分清楚，可用細調節(jié)器調節(jié)，至目的物清晰為止。(5)   如果粗調節(jié)器旋得太快，使超過焦點，必須從第(3)步重調，不應正視目鏡情況下調粗調節(jié)器，以防沒把握的旋轉使物鏡與載玻片相碰撞壞。(6)    觀察時兩眼同時睜開(雙眼不感疲勞)。單筒顯微鏡應習慣用左眼觀察，以便于繪圖。4.高倍鏡的操作(1)   使用高倍鏡前，先用低倍鏡觀察，發(fā)現(xiàn)目的物后將它移至視野正中處。(2)    旋動轉換器換高倍鏡，如果高

8、倍鏡觸及載玻片立即停止旋動，說明原來低倍鏡就沒有調準焦距，目的物并沒有找到，要用低倍鏡重調。如果調對了，換高倍鏡時基本可以看到目的物。若有點模糊，用細調節(jié)器調就清晰可見。5.油鏡的操作       (1)如果用高倍鏡目的物未能看清，可用油鏡。先用低倍鏡和高倍鏡檢查標本片，將目的物移到視野正中。(3)   在載玻片上滴一滴香柏油(或液體石蠟)，將油鏡移至正中使油鏡頭浸沒在油中，剛好貼近載玻片。用細調節(jié)器微微向上調(切記不用粗調節(jié)器)即可。(4)   油鏡觀察完畢，用擦鏡紙將鏡頭上的油揩凈，另用擦鏡紙蘸少許二甲苯揩拭鏡

9、頭，再用擦鏡紙揩干。三、顯微鏡的保養(yǎng)： 顯微鏡保養(yǎng)和使用中的注意事項1不準擅自拆卸顯微鏡的任何部件，以免損壞；2鏡面只能用擦鏡紙擦，不能用手指或粗布擦，以保證鏡面的光潔度；3觀察標本時，必須依次使用低倍鏡、中倍鏡、高倍鏡，最后用油鏡。當目視目鏡時，特別在使用油鏡時，切不可用粗調節(jié)器升高載物臺，以免物鏡碰到玻片損傷鏡面或壓碎玻片；4觀察時，兩眼睜開，養(yǎng)成兩眼能夠輪換觀察的習慣，以免眼睛疲勞，并且能夠左眼觀察時，右眼注視繪畫；5顯微鏡應存放在陰涼干燥處，以免鏡片生霉菌而腐蝕鏡片；6不能隨意拆卸顯微鏡，尤其物鏡、目鏡，鏡筒不能隨意拆卸，因拆卸后空氣中的灰塵落入里面容易引起生霉菌；7每使用一次，所有的目鏡和物鏡都得用擦鏡紙擦干凈。四、細菌個體形態(tài)觀察(一)儀器和材料1顯微鏡，香柏油，二甲苯，擦鏡紙，吸水紙2細菌三種基本形態(tài)的染色標本，四疊球菌染色標本，八疊球菌染色標本，蘇云金桿菌染色標本。(二)