糞大腸菌群的測(cè)定

1、LPEMSZYA-43-2011生活飲用水中耐熱大腸菌群、總大腸菌群、大腸埃希氏菌的測(cè)定酶底物法一、 實(shí)驗(yàn)原理該革新的檢測(cè)技術(shù)利用分別由大腸菌群-半乳糖苷酶及大腸桿菌-葡萄糖醛酸酶代謝的兩種營(yíng)養(yǎng)劑指示劑：鄰硝基苯-D-半乳派喃糖（ONPG）及甲基香豆基葡糖醛酸苷（MUG），作為Colilert試劑的主要碳源。1、利用大腸菌群細(xì)菌能產(chǎn)生2 半乳糖苷酶分解ONPG 使培養(yǎng)液呈黃色，檢測(cè)大腸菌群；2、利用大腸埃希氏菌產(chǎn)生2 葡萄糖醛酸酶分解MUG 使培養(yǎng)液在波長(zhǎng)366nm 紫外光下產(chǎn)生藍(lán)色熒光，檢測(cè)大腸埃希氏菌；3、改變培養(yǎng)溫度，可檢測(cè)耐熱大腸菌群。因?yàn)榇蠖鄶?shù)非大腸桿菌屬菌類(lèi)沒(méi)有這些酶，所以無(wú)法在C

2、olilert試劑里生長(zhǎng)及干涉這些物質(zhì)。而有這些酶的少數(shù)非大腸桿菌屬菌類(lèi)會(huì)受到Colilert特殊配方的基質(zhì)選擇性的抑制作用（專(zhuān)利技術(shù)）。二、 儀器和試劑耗材1、檢測(cè)設(shè)備程控定量封口機(jī)Quanti-Tray Sealer Model 2X 美國(guó)IDEXX；2、可充電紫外燈，6W，220V，366nm；3、紫外線(xiàn)防護(hù)鏡；4、DST酶底物法24小時(shí)Colilert試劑 美 程控定量封口機(jī)國(guó)IDEXX；5、51孔定量盤(pán)（無(wú)菌）；97孔定量盤(pán)（無(wú)菌）6、陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)比色瓶，陽(yáng)性51孔標(biāo)準(zhǔn)比色盤(pán)；7、100mL含硫代硫酸鈉無(wú)菌取樣袋/瓶；  MUG試劑（科立得） 定量盤(pán)（51孔或者97孔） 取樣瓶

3、 8.記號(hào)筆；9.無(wú)菌剪刀；10.無(wú)菌夾子；11.一次性醫(yī)用無(wú)菌手套。四、實(shí)驗(yàn)步驟1.操作流程圖     酶底物法即可以作定性又可以作定量分析，同時(shí)檢測(cè)兩個(gè)指標(biāo)，總大腸菌群（total coli）和大腸埃希氏菌（Escherichia coli），方法簡(jiǎn)便，快速，結(jié)果準(zhǔn)確。2.操作說(shuō)明注意：如果不按照說(shuō)明使用機(jī)器，可能會(huì)有人員傷害、機(jī)器損害、其他財(cái)產(chǎn)損害以及出現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。（1） 操作前后或離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室必須用肥皂或消毒液洗手。（2） 打開(kāi)電源開(kāi)關(guān)，橙黃色指示燈應(yīng)當(dāng)亮起。（3） 程控定量封口機(jī)需要預(yù)熱直到綠色指示燈亮起（大約10分鐘）。只有當(dāng)兩

4、個(gè)燈都亮?xí)r，才說(shuō)明機(jī)器達(dá)到工作溫度。（4） 大腸菌群、大腸埃希氏菌：取100mL水樣加入酶底物試劑1支混勻，轉(zhuǎn)入51孔或97孔定量盤(pán)內(nèi)（注意：在取水樣和去定量盤(pán)時(shí)手不能觸碰到含有少量硫代硫酸鈉的無(wú)菌取樣瓶及定量盤(pán)封口處，以免影響檢測(cè)結(jié)果），封口后于36±1培養(yǎng)24h，觀(guān)察結(jié)果。耐熱大腸菌群：實(shí)驗(yàn)同上，但培養(yǎng)溫度變?yōu)?4.5±0.5（5） 把橡膠墊放到進(jìn)口托盤(pán)架上，有大矩形孔的一頭在外。（6） 把裝有樣品和DST Colilert試劑的定量托盤(pán)放入橡膠墊中，注意定量托盤(pán)的每個(gè)凹陷要對(duì)準(zhǔn)橡膠墊上對(duì)應(yīng)的空。（7） 向機(jī)器方向輕輕推動(dòng)橡膠墊，直到機(jī)器抓住橡膠墊，并帶動(dòng)其進(jìn)入機(jī)器。（

5、8） 大約15秒鐘，定量托盤(pán)封口完成，從機(jī)器后出來(lái)。請(qǐng)從機(jī)器后拿出橡膠墊和定量托盤(pán)。（9） 任何時(shí)候，如果需要使機(jī)器反轉(zhuǎn)，從前面退出橡膠墊（例如當(dāng)定量托盤(pán)沒(méi)放平就將橡膠墊放入機(jī)器），請(qǐng)按反轉(zhuǎn)鈕。但是，當(dāng)橡膠墊已經(jīng)完全進(jìn)入機(jī)器中，請(qǐng)不要按反轉(zhuǎn)開(kāi)關(guān)。如果有多個(gè)橡膠墊，可以連續(xù)放入機(jī)器。檢測(cè)結(jié)果說(shuō)明：現(xiàn)象結(jié)果比陽(yáng)性比色對(duì)照品的黃色淺總大腸菌群、大腸埃希氏菌為陰性與陽(yáng)性比色對(duì)照品的黃色相近或更深總大腸菌群為陽(yáng)性與陽(yáng)性比色對(duì)照品的黃色相近或更深，且在紫外燈下顯熒光總大腸菌群、大腸埃希氏菌為陽(yáng)性（10） 在暗室中，使用6瓦，366nm的紫外燈在距樣品15厘米左右的位置觀(guān)測(cè)是否顯熒光。（11） 結(jié)果應(yīng)在24

6、-28小時(shí)內(nèi)讀取。此外，總大腸菌群和大腸埃希氏菌培養(yǎng)時(shí)間小于24小時(shí)已經(jīng)為陽(yáng)性；或總大腸菌群和大腸埃希氏菌大于28小時(shí)依然為陰性，則結(jié)果也有效。注意：1.檢測(cè)試劑于230°避光儲(chǔ)存；2.a.使用過(guò)的取樣統(tǒng)一收集進(jìn)行滅菌處理；b.橡膠插墊可以放到高壓消毒鍋中進(jìn)行消毒，也可以用異丙醇或家用漂白劑清洗。清洗時(shí)應(yīng)注意這些清洗劑的危害。要經(jīng)常清洗橡膠插墊，確保橡膠插墊上不要有污垢。一般情況下可使用柔軟的干布清洗封口機(jī)外殼。也可以用異丙醇或家用漂白劑清洗，但要注意個(gè)人防護(hù)。只有專(zhuān)門(mén)指定的人員才可以打開(kāi)封口機(jī)的前擋蓋。請(qǐng)參照保養(yǎng)手冊(cè)，清洗封口機(jī)的內(nèi)部。清洗工作一定要有經(jīng)過(guò)培訓(xùn)的人員來(lái)完成。如果有樣品從機(jī)器中滴出，請(qǐng)不要打開(kāi)前擋蓋或使得封口機(jī)傾斜；3.拿出定量盤(pán)后應(yīng)盡快用無(wú)菌夾子夾住袋口，以免剩余定量盤(pán)被細(xì)菌感染；4.使用后關(guān)掉機(jī)器；5.技術(shù)參數(shù)重