結(jié)直腸癌TK、PCNA表達(dá)的研究

1、    結(jié)直腸癌TK、PCNA表達(dá)的研究        摘要：目的通過對(duì)結(jié)直腸癌及腺瘤中TK和PCNA的表達(dá)，探討其對(duì)結(jié)直腸癌的治療、預(yù)后所起作用。方法采用免疫組織化學(xué)SABC法，檢測(cè)54例結(jié)直腸癌及20例結(jié)直腸腺瘤中TK及PCNA的表達(dá)。結(jié)果本研究結(jié)果表明結(jié)直腸癌中TK及PCNA的陽性表達(dá)率均比結(jié)直腸腺瘤高(P<0.05)，結(jié)直腸癌中TK陽性表達(dá)率(64.8%)雖略比PCNA(51.9%)高，但差異無顯性(P>0.05)。結(jié)論TK不僅同PCNA一樣，可作細(xì)胞增殖

2、的指標(biāo)，還因其參與DNA合成及細(xì)胞間“旁觀者效應(yīng)”等原因，從而給臨床提供治療及預(yù)后方面的有價(jià)值的參考。關(guān)鍵詞：結(jié)直腸癌；胸腺嘧啶核苷激酶；增殖細(xì)胞核抗原；免疫組織化學(xué)中分類號(hào)：R735.3+5；R735.3+7文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1000-8578(2000)05-0383-02 Expression of TK and PCNA in Colorectal CarcinomaWU Jian-ping(Pathology Department of Hubei Cancer Hospital,Wuhan 430079 China)YAN Yu-hu(Pathology Department

3、 of Hubei Cancer Hospital,Wuhan 430079 China)MAO Jun,et al(Pathology Department of Hubei Cancer Hospital,Wuhan 430079 China)Abstract:Objective Expressions of TK and PCNA in Colorectal carcinoma and adenoma were studied and their relationshop with chinical therapy and prognosis of colorectal carcinom

4、a.Methods Immunohistochemistry method was used to detect the expression of TK and PCNA in 54 cases of colorectal carcinoma and 20 cases of colorectal adenoma.Results Positive expression rates of TK(64.8%) and PCNA(51.9%) in colorectal carcinoma are higher than those of colorectal adenoma(P<0.05)，

5、and the positive expression rate of TK is slightly higher than PCNA,which has no significant difference.Conclusion TK like PCNA can be used as the index of cell proliferation,and also because it takes part in the synthesize of cell DNA and its“by stander effect”,it can provide valuable reference for

6、 clinical treatment and prognosis of colorectal carcinoma.Key words:Colorectal carcinoma;Thymidine Kinase;Proliferating cellNuclear antigen;Immunohistochemistry結(jié)直腸癌是消化系統(tǒng)常見惡性腫瘤之一。WHO資料顯示，結(jié)直腸癌在全部惡性腫瘤中，男性居第3位(15.7%)，女性居第4位(14.9%)。目前其發(fā)病率仍有逐年升高的趨勢(shì)。在我國(guó)，結(jié)直腸癌亦居惡性腫瘤的46位。結(jié)直腸由于其位置關(guān)系，通過內(nèi)窺鏡檢查，臨床上常能發(fā)現(xiàn)很小的大腸腺瘤和大腸癌，

7、故能得到合理的治療，如手術(shù)、放療及化療等。影響結(jié)直腸癌的因素很多，如病理分型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、細(xì)胞增殖等，其中尤以細(xì)胞增殖情況為近期研究重點(diǎn)。PCNA是反應(yīng)細(xì)胞增殖的一個(gè)常用指標(biāo)，TK(Thymidine kinase,胸腺嘧啶核苷激酶)則是近年來得以應(yīng)用的一個(gè)新的能反應(yīng)細(xì)胞周期狀況的指標(biāo)。本文研究了54例結(jié)直腸癌中此2種標(biāo)記物的表達(dá)情況。1材料和方法收集我院19951996年54例結(jié)直腸癌及20例結(jié)直腸腺瘤的石蠟包埋標(biāo)本，所有標(biāo)本經(jīng)H.E染色光鏡診斷。免疫組織化學(xué)方法采用SABC法，TK1抗體由Professor Qimin He(Karolinska institute,Sweden)提供

8、，PCNA抗體及SABC試劑盒購(gòu)自博士德生物工程公司。免疫組化步驟大致如下：(1)切片脫蠟至水。(2)蒸餾水新鮮配置3%H2O2室溫510min滅活內(nèi)源性酶。蒸餾水洗3次。(3)微波修復(fù)抗原：將切片浸入0.01M枸櫞酸鹽緩沖液，pH6.0，微波爐加熱至96°C100°C，持續(xù)2030min，冷卻后進(jìn)行下一步。(4)滴加抗原修復(fù)液，室溫10min。蒸餾水洗3次。(5)滴加正常血清封閉液，室溫20min。去掉多余液體，不洗。(6)滴加適當(dāng)稀釋的一抗(TK1及PCNA)，室溫120min。0.01MPBS洗2min共3次。(7)滴加生物素化山羊抗小鼠/兔IgG,20°C

9、20min，0.01MPBS洗2min共3次。(8)滴加試劑SABC，20°C20min，0.01MPBS洗5min共4次。(9)DAB顯色。(10)蘇木素輕度復(fù)雜。脫水、透明、封固。顯微鏡觀察。作TK1抗體的免疫組化時(shí)，則不再微波修復(fù)，而滴加復(fù)合消化液。結(jié)腸腺瘤分管狀腺瘤、絨毛狀腺瘤及混合性腺瘤，結(jié)直腸癌按WHO組織學(xué)分型：乳頭狀腺癌；管狀腺癌：高分化、中分化、低分化；印戒細(xì)胞癌；粘液腺癌；未分化癌。2結(jié)果2.1PCNA陽性染色結(jié)果顯示為細(xì)胞核著棕黃色，而TK陽性染色結(jié)果則顯示為胞漿著棕黃色。具體檢測(cè)結(jié)果見表1表1結(jié)直腸癌TK及PCNA檢測(cè)結(jié)果TKPCNA陽性陰性陽性陰性結(jié)直腸癌3

10、5192628結(jié)腸腺瘤416515結(jié)直腸癌與結(jié)腸腺瘤之間，兩種抗體表達(dá)的差異均有顯著性(P<0.05)，但兩種抗體表達(dá)之間則差異無顯著性(P>0.05)。2.2結(jié)直腸腺瘤TK和PCNA的具體表達(dá)情況見表2。 表2結(jié)直腸腺瘤TK及PCNA檢測(cè)結(jié)果TKPCNA陽性陰性陽性陰性管狀腺瘤1827絨毛狀腺瘤2534混合性腺瘤1313從表2看出，結(jié)直腸腺瘤的PCNA陽性表達(dá)率略比TK高，但差異并無顯著性(P>0.05)。2.3結(jié)直腸癌的TK和PCNA表達(dá)情況見表3。 表3結(jié)直腸癌TK及PCNA檢測(cè)結(jié)果TKPCNA陽性陰性陽性陰性管狀腺癌高分化6574中分化7456低分化7254乳頭狀腺癌

11、8466粘液腺癌5243印戒細(xì)胞癌1102未分化癌1111從表3看出，結(jié)直腸癌的TK陽性表達(dá)率略高于PCNA，但統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異無顯著性(P>0.05)。 3討論結(jié)直腸癌的預(yù)后隨著診療手段的不斷提高正逐步得到改善。傳統(tǒng)的細(xì)胞增殖的指標(biāo)如PCNA、Ki-67等雖然能反應(yīng)癌細(xì)胞的總體增殖情況，但由于抗體自身的局限，給臨床參考帶來一定限制。有研究認(rèn)為從結(jié)腸增生性息肉到結(jié)腸腺癌的過程中，PCNA呈逐漸增高的趨勢(shì)1；本研究結(jié)果也支持此觀點(diǎn)。并且在腺瘤中絨毛狀腺瘤PCNA表達(dá)高，說明其增生活躍，易于癌變。對(duì)于手術(shù)患者來說，結(jié)直腸癌的手術(shù)切緣PCNA指數(shù)的評(píng)價(jià)對(duì)預(yù)測(cè)患者是否有高轉(zhuǎn)移潛能和手術(shù)后易復(fù)發(fā)也有一

12、定價(jià)值，這種評(píng)價(jià)給計(jì)劃合理的輔助治療即使是早期癌也有幫助2。同時(shí)PCNA還能起到估計(jì)預(yù)后的作用，PCNA指數(shù)高的患者，其預(yù)后比PCNA指數(shù)低的患者差3。Yoshikawa等提出PCNA的免疫染色可能對(duì)篩選高危險(xiǎn)性的結(jié)直腸癌有用4，故很多學(xué)者將PCNA用于多種腫瘤的研究，以期找到一個(gè)對(duì)腫瘤的治療、估計(jì)預(yù)后有幫助的標(biāo)記物。近來發(fā)現(xiàn)了一種對(duì)細(xì)胞增殖更有特異性的抗體，就是TK的抗體(TK1)，TK是一種能催化胸腺嘧啶轉(zhuǎn)化為單磷酸脫氧胸腺嘧啶的酶，在DNA的合成中起著關(guān)鍵作用。生物化學(xué)研究表明TK1水平在G1/S期交界處開始增加，在S晚期時(shí)水平最高。TK的活性與TK1的水平有很好的相關(guān)性5。在癌細(xì)胞系及

13、人體血清中對(duì)TK1的研究比較深入，但在人體組織中的研究則不多。Thomas研究發(fā)現(xiàn)結(jié)腸腺瘤及有轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌病人中TK活性均比對(duì)照組高6。對(duì)結(jié)直腸癌的一種癌細(xì)胞系(該細(xì)胞系能穩(wěn)定地表達(dá)TK基因)研究表明，當(dāng)它們和TK陰性的細(xì)胞混合時(shí)，展示了一種“旁觀者效應(yīng)”；用Ganciclovir治療注射有該癌細(xì)胞系的動(dòng)物時(shí)，腫瘤體積顯著縮小，生存期延長(zhǎng)7。我們的研究結(jié)果表明結(jié)直腸癌的TK1陽性表達(dá)率高于結(jié)腸腺瘤，與PCNA的表達(dá)相似，均有顯著差異(P<0.05)。但TK1的表達(dá)率略高于PCNA(但差異無顯著性P>0.05)，與兩者在細(xì)胞周期中的表達(dá)相一致。因而TK1可作為評(píng)價(jià)腫瘤細(xì)胞增殖的新指

14、標(biāo)；TK1的旁觀者效應(yīng)還為結(jié)直腸癌的治療提供了一個(gè)新的方向。作者單位：吳建平（430079 武漢，湖北省腫瘤醫(yī)院病理科）毛軍（430079 武漢，湖北省腫瘤醫(yī)院病理科）閻玉虎（430079 武漢，湖北省腫瘤醫(yī)院病理科）劉俐敏（430079 武漢，湖北省腫瘤醫(yī)院病理科）吳傳京（武漢大學(xué)測(cè)試中心）HE Qi-min（Department of Medical Radiobiology Karolinska Institute,Sweden）Sven Skon（Department of Medical Radiobiology Karolinska Institute,Sweden）WANG Na

15、i-ning（Department of Medical Radiobiology Karolinska Institute,Sweden）Bernhard Tribukait（Department of Medical Radiobiology Karolinska Institute,Sweden）參考文獻(xiàn)：1Barletta A,Marzullo F,Pellecchia A,et al.DNA flow cytometry,P53 levels and proliferative cell nuclear antigen in human colon dysplastic,precan

16、cerous and cancerous tissuesJ.Anticancer Res,1998,18:1677-1682.2Choi HJ,Jung IK,Kim SS,et al.Proliferating cell nuclera antigen expression and its relationship to malignancy potential in invasive colorectal carcinomasJ.Dis Colon Rectum,1997,40:51-59.3Hiraga Y,Tanaka S,Haruma K,et al.Immunoreactive M

17、UCL expression at the deepest invasive portion correlates with prognosis of colorectal cancerJ.Oncology,1998,55:307-319.4Yoshikawa R,Utsunomiya J.Cell proliferation kinetics are abnormal in transitional mucosa adjacent to colorectal carcinomaJ.Br J Surg,1996,83:36-39.5Sherley,J.L.,Kelly,T.J.Regulation of human thymidine Kinase during the cell cycleJ.J Biol Chem,1988,263:8350-8358.6Thomas WM,Robertson JF,McKenna PG,et al.Se