食品中氯酸鹽和高氯酸鹽的測定

1、附件2食品中氯酸鹽和高氯酸鹽的測定BJS 2017061 范圍本方法規(guī)定了食品中氯酸鹽和高氯酸鹽含量的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。本方法適用于包裝飲用水、液體乳、大米、胡蘿卜、哈密瓜、豬肉、魚肉、茶葉、嬰幼兒配方乳粉（不包括特殊醫(yī)學(xué)用途的嬰幼兒配方乳粉）中氯酸鹽和高氯酸鹽的測定。2 原理試樣經(jīng)提取、離心后，上清液經(jīng)固相萃取柱凈化，用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定，內(nèi)標(biāo)法定量。3 試劑和材料3.1 試劑3.1.1 乙腈（CH3CN）：色譜純。3.1.2 甲醇（CH3OH）：色譜純。3.1.3 甲酸（HCOOH）：色譜純。3.1.4 甲酸銨（HCOONH4）：液質(zhì)聯(lián)用級。3.1.5 超純水（H2O）：電阻

2、率為18.2M·cm。注：以上試劑在使用前均應(yīng)做本底測試。3.2 試劑配制3.2.1 含0.1%甲酸的水溶液：量取1.0mL甲酸（）至1000mL容量瓶，用超純水（）稀釋至刻度，混勻。3.2.2 20mmol/L甲酸銨溶液：稱取0.63g甲酸銨（），用超純水（）溶解并稀釋至500mL，混勻。3.2.3 甲酸銨甲醇溶液：取100mL甲酸銨溶液（3.2.2），加入200mL甲醇（），混勻。3.3 標(biāo)準(zhǔn)品3.3.1 氯酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品：采用具有證書的標(biāo)準(zhǔn)品或高純試劑，純度99%。中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子量詳見表1。3.3.2 高氯鈉鹽標(biāo)準(zhǔn)品：采用具有證書的標(biāo)準(zhǔn)品或高純試

3、劑，純度99%。中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子量詳見表1。表1氯酸鹽和高氯酸鹽的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子量中文名稱英文名稱CAS登錄號分子式相對分子量氯酸鈉Sodiumchlorate7775-09-9NaClO3106.44高氯酸鈉Sodiumperchlorate7601-89-0NaClO4122.453.4 同位素內(nèi)標(biāo)3.4.1 氯酸鹽同位素內(nèi)標(biāo)：氯酸鹽-18O3（200g/mL，以氯酸根-18O3離子計，北京振祥提供，EURL-SRMLotNo:024），4保存。3.4.2 高氯酸鹽同位素內(nèi)標(biāo)：高氯酸鹽-18O4（100g/mL，以高氯酸

4、根-18O4離子計，美國劍橋提供，CILOLM-7310-1.2），4保存。3.5 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制3.5.1 氯酸鹽標(biāo)準(zhǔn)儲備液（1mg/mL，以氯酸根計）：精密稱取氯酸鈉0.128g（精確至0.0001g），置于100mL容量瓶中，用超純水（）溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為1mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲備液，4保存。3.5.2 高氯酸鹽標(biāo)準(zhǔn)儲備液（1mg/mL，以高氯酸根計）：精密稱取高氯酸鈉0.123g（精確至0.0001g），置于100mL容量瓶中，用超純水（）溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為1mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲備液，4保存。3.5.3 混合標(biāo)準(zhǔn)中間液：分別準(zhǔn)確量取0.2mL氯酸鹽標(biāo)準(zhǔn)儲備液（3.

5、5.1）、0.1mL高氯酸鹽標(biāo)準(zhǔn)儲備液（3.5.2），置于同一100mL容量瓶中，用超純水（）稀釋至刻度，搖勻，制成氯酸鹽、高氯酸鹽濃度分別為2.0µg/mL、1.0µg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液，4保存。3.5.4 混合同位素內(nèi)標(biāo)液：分別準(zhǔn)確量取75µL氯酸鹽同位素內(nèi)標(biāo)（3.4.1）、20µL高氯酸鹽同位素內(nèi)標(biāo)（3.4.2）置于同一10.0mL容量瓶中，用超純水（）稀釋至刻度，搖勻，制成氯酸鹽-18O3、高氯酸鹽-18O4濃度分別為1500ng/mL、200ng/mL的混合同位素內(nèi)標(biāo)液，4保存。3.5.5 混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別準(zhǔn)確量取混合標(biāo)準(zhǔn)中間液（）0

6、L、10L、25L、50L、75L、100L、250L、500L、750L、1000L，及混合同位素內(nèi)標(biāo)液（）100L，用甲酸銨甲醇溶液（）稀釋并定容至10mL，作為混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液S0、S1S9。氯酸鹽濃度依次為：0.00ng/mL、2.00ng/mL、5.00ng/mL、10.0ng/mL、15.0ng/mL、20.0ng/mL、50.0ng/mL、100ng/mL、150ng/mL、200ng/mL，高氯酸鹽濃度依次為：0.00ng/mL、1.00ng/mL、2.50ng/mL、5.00ng/mL、7.50ng/mL、10.0ng/mL、25.0ng/mL、50.0ng/mL、75.0n

7、g/mL、100ng/mL，混合標(biāo)準(zhǔn)工作液中氯酸鹽-18O3、高氯酸鹽-18O4濃度分別為15.0ng/mL、2.0ng/mL，或依需要配制適當(dāng)濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。臨用新制。4 儀器和設(shè)備4.1 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，配有電噴霧離子源（ESI源）。4.2 渦旋振蕩器。4.3 組織搗碎機。4.4 均質(zhì)器。4.5 離心機：轉(zhuǎn)速10000r/min。4.6 電子天平：感量分別為0.0001g和0.001g。4.7 超聲波恒溫水浴振蕩器。4.8 具塞離心管：50mL。4.9 PRiMEHLB固相萃取柱：3cc，150mm，或性能相當(dāng)者。注：4.8、4.9的耗材在使用前均應(yīng)做本底測試。5 試樣制備與保

8、存5.1 包裝飲用水充分混勻，直接取用。5.2 液體乳：充分搖勻，取適量有代表性的試樣，均分成兩份，作為試樣和留樣，分別裝入潔凈容器中，密封并標(biāo)記，于4避光保存。5.3 豬肉、魚肉：取適量有代表性的可食部分試樣，切成小塊，組織搗碎機搗碎，均分成兩份，作為試樣和留樣，分別裝入潔凈容器中，密封并標(biāo)記，于-18避光保存。5.4 胡蘿卜、哈密瓜：取適量有代表性的試樣，去皮去籽，切成小塊，組織搗碎機搗碎，均分成兩份，作為試樣和留樣，分別裝入潔凈容器中，密封并標(biāo)記，于-18避光保存。5.5 嬰兒配方乳粉：充分混勻，取適量有代表性的試樣，均分成兩份，作為試樣和留樣，分別裝入潔凈容器中，密封并標(biāo)記，于常溫避光

9、保存。5.6 大米、茶葉：取適量有代表性的試樣，粉碎機粉碎后過40目篩，均分成兩份，作為試樣和留樣，分別裝入潔凈容器中，密封并標(biāo)記，于常溫避光保存。6 測定步驟6.1 提取6.1.1 包裝飲用水：準(zhǔn)確移取1.0mL試樣，加入10.0µL混合同位素內(nèi)標(biāo)液（3.5.4），渦旋震蕩10s，經(jīng)0.22µm再生纖維素濾膜過濾后，取續(xù)濾液供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。6.1.2 胡蘿卜、哈密瓜、茶葉：準(zhǔn)確稱取1g（精確至0.001g）試樣置于50mL具塞離心管（4.8）中，加入200L混合同位素內(nèi)標(biāo)液（），準(zhǔn)確加入7.0mL超純水（），渦旋振蕩5min，再準(zhǔn)確加入13.0mL甲醇（），混

10、勻，振蕩超聲提取30min，10000r/min常溫離心10min，取上清液待凈化。6.1.3 大米：準(zhǔn)確稱取2g（精確至0.001g）試樣置于50mL具塞離心管（4.8）中，加入200L混合同位素內(nèi)標(biāo)液（3.5.4），準(zhǔn)確加入7.0mL超純水（），渦旋振蕩5min，再準(zhǔn)確加入13.0mL甲醇（），混勻，振蕩超聲提取30min，10000r/min常溫離心10min，取上清液待凈化。6.1.4 嬰兒配方乳粉：準(zhǔn)確稱取2g（精確至0.001g）試樣置于50mL具塞離心管（4.8）中，加入150L混合同位素內(nèi)標(biāo)液（3.5.4），準(zhǔn)確加入5.0mL0.1%甲酸水溶液（3.2.1），迅速混勻，置于45

11、水浴超聲20min，渦旋振蕩5min，再準(zhǔn)確加入10.0mL甲醇（），混勻，10000r/min常溫離心10min，取上清液待凈化。6.1.5 液體乳：準(zhǔn)確稱取5g（精確至0.001g）試樣置于50mL具塞離心管（4.8）中，加入150L混合同位素內(nèi)標(biāo)液（3.5.4），加入1.0mL0.1%甲酸水溶液（3.2.1），9.0mL甲醇（），渦旋振蕩5min，10000r/min常溫離心10min，取上清液待凈化。6.1.6 豬肉、魚肉：準(zhǔn)確稱取2g（精確至0.001g）試樣置于50mL具塞離心管（4.8）中，加入200L混合同位素內(nèi)標(biāo)液（3.5.4），準(zhǔn)確加入7.0mL超純水（），13.0mL甲醇

12、（），10000r/min均質(zhì)30s，10000r/min常溫離心10min，取上清液待凈化。6.2 凈化吸取約3.0mL上述上清液（6.1.26.1.6），按附錄A中的圖A.1方式過固相萃取柱（4.9）及0.22µm再生纖維素濾膜，棄去約1mL流出液，收集續(xù)濾液，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。6.3 色譜測定6.3.1 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測6.3.1.1 參考液相色譜條件a)色譜柱：AcclaimTRINITYP1復(fù)合離子交換柱（50mm×2.1mm，3m；100mm×2.1mm，3m），或性能相當(dāng)者。b)流動相：A為乙腈，B為20mmol/L甲酸銨溶液。梯度洗

13、脫程序見表2。c)樣品系列運行完后，按表3的色譜柱清洗梯度程序?qū)ιV柱進行清洗。d)流速：0.5mL/min。e)柱溫：35。f)進樣量：3L。表2梯度洗脫程序50mm×2.1mm，3m規(guī)格色譜柱100mm×2.1mm，3m規(guī)格色譜柱時間(min)流動相A(%)流動相B(%)時間(min)流動相A(%)流動相B(%)Initial3565Initial70300.535650.270304.065353.090105.090107.090107.090108.070308.0356510.07030表3色譜柱清洗梯度程序50mm×2.1mm，3m規(guī)格色譜柱100m

14、m×2.1mm，3m規(guī)格色譜柱時間(min)流速(mL/min)流動相A(%)流動相B(%)時間(min)流速(mL/min)流動相A(%)流動相B(%)Initial0.53565Initial0.5703010.00.15901015.00.159010100.00.159010150.00.159010注：色譜柱按該程序清洗后保存，有助于延長色譜柱壽命。6.3.1.2 參考質(zhì)譜條件a)離子源：電噴霧離子源（ESI源）。b)檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）。c)掃描方式：負離子模式掃描。d)毛細管電壓：200V。e)錐孔電壓：60V。f)脫溶劑溫度：500。g)脫溶劑氣流量：100

15、0L/h。h)錐孔氣流量：150L/h。i)采用多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式采集數(shù)據(jù)，質(zhì)譜參數(shù)見表4。表4氯酸鹽和高氯酸鹽定性、定量離子對和質(zhì)譜分析參數(shù)化合物母離子（m/z）子離子（m/z）錐孔電壓（V）碰撞能量（eV）氯酸根83.067.0*601585.069.06015高氯酸根99.083.0*6018101.085.06018氯酸根內(nèi)標(biāo)89.071.0*6016高氯酸根內(nèi)標(biāo)107.089.0*6018*定量離子對。注：的質(zhì)譜條件僅供參考，當(dāng)采用不同質(zhì)譜儀器時，儀器參數(shù)可能存在差異，測定前應(yīng)將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化到最佳。6.3.2 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線制作將混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（3.5.5）按儀器參考條件（6.

16、3.1）進行測定。以混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的濃度為橫坐標(biāo)，以內(nèi)標(biāo)校正后的響應(yīng)值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。6.3.3 定性測定在相同試驗條件下測定試樣和混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，記錄試樣和混合標(biāo)準(zhǔn)工作液中氯酸鹽、高氯酸鹽的色譜保留時間，以相對于最強離子豐度的百分比作為定性離子的相對離子豐度。若試樣中檢出與混合標(biāo)準(zhǔn)工作液（3.5.5）中氯酸鹽、高氯酸鹽保留時間一致的色譜峰，且其定性離子與濃度相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)溶液中相應(yīng)的定性離子的相對豐度相比，偏差不超過表5規(guī)定的范圍，則可以確定試樣中檢出相應(yīng)的氯酸鹽、高氯酸鹽。表5定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度（%）>50>2050>102010允

17、許的相對偏差（%）±20±25±30±506.3.4 定量測定若試樣檢出與混合標(biāo)準(zhǔn)工作液（3.5.5）一致的氯酸鹽、高氯酸鹽，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線按內(nèi)標(biāo)法以內(nèi)標(biāo)校正后的響應(yīng)值計算得到其含量?？瞻讟悠芳訕?biāo)試樣參考色譜圖見附錄B中的圖B.1、B.2。6.4 空白試驗除不加試樣外，均按試樣同法操作。7 結(jié)果計算結(jié)果按式（1）計算：X=c×V×fm.(1)式中：X試樣中各待測組分的含量，包裝飲用水單位為微克每升（µg/L)，其他樣品單位為微克每千克（µg/kg)；c從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線中讀出的供試品溶液中各待測組分的濃度，單位為納克

18、每毫升（ng/mL）；V試樣溶液最終定容體積，單位為毫升（mL）；f試樣制備過程中的稀釋倍數(shù)；m稱樣量，包裝飲用水單位為毫升（mL），其他樣品單位為克（g）。計算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。8 檢測方法的靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度8.1 靈敏度當(dāng)試樣量為1.0mL時，包裝飲用水中氯酸鹽的檢出限為0.6g/L、定量限為2.0g/L；高氯酸鹽的檢出限為0.4g/L、定量限為1.0g/L。當(dāng)試樣量為1g（精確至0.001g）、定容體積為20.0mL時，胡蘿卜、哈密瓜、茶葉中氯酸鹽的檢出限為12.0g/kg、定量限為40.0g/kg；高氯酸鹽的檢出限為8

19、.0g/kg、定量限為20.0g/kg。當(dāng)試樣量為2g（精確至0.001g）、定容體積為20.0mL時，豬肉、魚肉、大米中氯酸鹽的檢出限為6.0g/kg、定量限為20.0g/kg；高氯酸鹽的檢出限為4.0g/kg、定量限為10.0g/kg。當(dāng)試樣量為5g（精確至0.001g）、定容體積為15.0mL時，液體乳中氯酸鹽的檢出限為1.8g/kg、定量限為6.0g/kg；高氯酸鹽的檢出限為1.2g/kg、定量限為3.0g/kg。當(dāng)試樣量為2g（精確至0.001g）、定容體積為15.0mL時，嬰兒配方乳粉中氯酸鹽的檢出限為4.5g/kg、定量限為15.0g/kg；高氯酸鹽的檢出限為3.0g/kg、定量限為7.5g/kg。8.2 準(zhǔn)確度本方法在5800µg/kg添加濃度范圍內(nèi)，回收率為80%110%。8.3 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立