人和大鼠頸動脈生物力學(xué)特性的對比研究

1、人和大鼠頸動脈生物力學(xué)特性的對比研究         10-01-29 11:08:00     編輯：studa20                    作者：管玉龍，董培青，萬彩紅，楊璟，何美玲【摘要】  目的 測定不同種屬包括大鼠、人體主動脈血管的生物力學(xué)特性，從而探討心

2、臟外科心肌保護(hù)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)與臨床結(jié)果差異顯著的原因。 方法 分別制備新鮮Wistar大鼠和人體頸總動脈血管條，利用PowerLab 4腔器官室檢測裝置，分別檢測大鼠和人體血管對電機(jī)械耦聯(lián)收縮刺激劑68 mmol/L 的高鉀溶液對受體激動劑去甲腎上腺素的收縮反應(yīng)和舒張恢復(fù)反應(yīng)。結(jié)果 大鼠動脈血管對68 mmol/L 的高鉀溶液具有很好的收縮反應(yīng)，收縮反應(yīng)具有可重復(fù)性;而人體動脈血管對高鉀具有高反應(yīng)性; 大鼠和人體動脈血管對受體激動劑去甲腎上腺素均具有反應(yīng)性，對血管舒張劑硝普鈉具有相似的舒張反應(yīng)。結(jié)論 人體與大鼠具有相似的受體介導(dǎo)血管收縮機(jī)制; 人體與大鼠的電-機(jī)械耦聯(lián)血管收縮反應(yīng)明顯不同，提示人體與

3、大鼠具有不同的通道反應(yīng)特性。 【關(guān)鍵詞】  心肌保護(hù);電-機(jī)械耦聯(lián);鉀Abstract: OBJECTIVE Aortic vascular sensitivity was compared between different species to search for possible causes of significant discrepancy between basic experiments and clinical observations. METHODS Carotid arteries were harvested from anesthetized Wista

4、r rats and cadavers who died within 2 hours . The response to 68mmol/L KCL and noradrenalin was assessed for observation of vascular sensitivity to electromechanical coupling vasoconstrictor and receptor-mediated vasoconstrictor between rats and human. RESULTS (1) The arterial rings of rats possesse

5、d swift and repetitive response to 68 mmol/L KCL. The tension of rings restored to baseline when the rings were washed with fresh Krebs-Henseleit Solution. The arterial rings of cadavers had persistent vasoconstriction and the tension did not restored after the incubation solution was switched into

6、fresh Krebs-Henseleit Solution. (2) The arterial rings from rats and cadavers possessed similar response to noradrenalin and sodium nitroprusside.CONCLUSION Human and rats have similar receptor-mediated vasoconstriction mechanism. The response to electromechanical coupling vasoconstriction is differ

7、ent between human and rats, which indicats human and rats possess different channel characteristic. So those may be the primary cause of significant discrepancy between basic experiments and clinical observations.Key words： Cardioprotection;Electromechanical coupling;Potassium體外循環(huán)(cardiopulmonary by

8、pass,CPB)心臟直視手術(shù)的患者，在圍術(shù)期會受到不同程度的干擾和損傷。為減輕術(shù)后臟器功能不全的發(fā)生，學(xué)者們曾應(yīng)用不同實(shí)驗(yàn)動物進(jìn)行了大量的實(shí)驗(yàn)研究，但我們發(fā)現(xiàn)，有些在動物實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用的方法和技術(shù)在臨床應(yīng)用時(shí)結(jié)果不盡相同。本實(shí)驗(yàn)通過比較大鼠和人體動脈血管的生物力學(xué)特性，揭示不同種屬間組織結(jié)構(gòu)和功能方面的差異，從而為臨床應(yīng)用提供幫助。1 材料與方法1.1 實(shí)驗(yàn)材料 Wistar 大鼠(清潔級，購自中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心 );人頸總動脈血管條(取自腦死亡供體)。1.2 實(shí)驗(yàn)儀器 Powerlab 4 腔張力檢測儀;Sartorius Basicplus BP211D天平;JB-3型

9、磁力攪拌器。1.3 實(shí)驗(yàn)步驟1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，記錄兩組不同血管材料在不同刺激條件下張力隨時(shí)間的變化值。兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)，用±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2 結(jié) 果2.1 頸總動脈血管電-機(jī)械耦聯(lián)反應(yīng)結(jié)果 加入電-機(jī)械耦聯(lián)收縮刺激劑68 mmol/L K+溶液后，大鼠頸總動脈血管張力緩慢上升，并在1 h內(nèi)達(dá)峰值。以K-H液沖洗3次后，血管張力迅速下降，并在30 min內(nèi)恢復(fù)至原有基礎(chǔ)張力水平(1.52±0.03)g，與基礎(chǔ)張力(1.52±0.02)g相比，P>0.05。再次

10、加入68 mmol/L K+溶液，血管張力再次上升。電-機(jī)械耦聯(lián)反應(yīng)刺激具有可重復(fù)性，見圖1。而人頸總動脈血管張力緩慢上升，并在1 h內(nèi)達(dá)峰值。以K-H液沖洗3次后，血管張力無改變(7.51±0.19)g，與基礎(chǔ)張力(2.52±0.04)g相比，P< 0.01，見圖2。2.2 頸總動脈血管受體介導(dǎo)的血管收縮及非內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)結(jié)果 受到10-5 mol/L的去甲腎上腺素刺激后，大鼠頸總動脈血管張力急速上升，20 min內(nèi)即基本達(dá)峰值，之后緩慢上升，連續(xù)性觀測1 h血管張力無衰減。加入硝普鈉后，血管張力急速下降，在20 min左右即達(dá)基礎(chǔ)張力水平(1.43±

11、0.13) g，與基礎(chǔ)張力(1.53±0.05)g相比，P>0.05，見圖3。人頸總動脈在去甲腎上腺素作用下血管張力緩慢上升，30 min內(nèi)達(dá)峰值。加入硝普鈉后，血管張力緩慢下降，在30 min達(dá)基礎(chǔ)張力水平(3.21±0.28)g，與基礎(chǔ)張力(3.06±0.13)g相比，P>0.05，見圖4。     10-01-29 11:08:00     編輯：studa203 討 論在心臟直視手術(shù)中，CPB和心臟停搏為心臟和大血管手術(shù)提供了安全的保證。但在心臟停搏期間，心肌的缺血

12、缺氧導(dǎo)致再灌注損傷的產(chǎn)生，部分患者在體外循環(huán)后發(fā)生心功能低下、心律失常等，影響了手術(shù)的順利恢復(fù)。為此，學(xué)者們在心肌保護(hù)方面展開了大量的研究和探索，包括心臟停搏液的改良、灌注方式的改進(jìn)、心肌損傷機(jī)制的探索等1-6。但是文獻(xiàn)中有關(guān)心肌保護(hù)的研究結(jié)果并不一致。在動物實(shí)驗(yàn)中得到較好結(jié)果的一些心肌保護(hù)藥物(如腺苷等)，在臨床觀察中并沒有明顯增強(qiáng)心肌保護(hù)的效果7-8。動物實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)的缺血預(yù)處理技術(shù)，在動物實(shí)驗(yàn)中可以明顯改善之后心肌耐受缺血缺氧的能力，但在臨床實(shí)驗(yàn)中也是不能得到驗(yàn)證9。這種動物實(shí)驗(yàn)與臨床觀察結(jié)果之間的巨大差異越來越受到學(xué)者們的重視，但具體機(jī)制尚不明確10-11。本研究選擇大鼠和人類動脈血管作

13、為實(shí)驗(yàn)材料，從血管生物力學(xué)角度研究可能造成心肌保護(hù)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)與臨床觀察差異的可能原因。本組實(shí)驗(yàn)由于采用了Powerlab 4 腔張力檢測系統(tǒng)，壓力傳感器的設(shè)置較傳統(tǒng)電生理檢測裝置有很大改進(jìn)，采用了計(jì)算機(jī)模擬量到數(shù)字量轉(zhuǎn)換(A/D)系統(tǒng)，敏感度大大提高。血管平滑肌細(xì)胞受到刺激興奮后，通過肌細(xì)胞特有的興奮-收縮耦聯(lián)機(jī)制產(chǎn)生收縮反應(yīng)。在基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)中，一般采用高鉀作為電機(jī)械耦聯(lián)反應(yīng)的刺激劑，其濃度從30 100 mmol/L不等，68 mmol/L K+溶液是比較常用的一種。據(jù)報(bào)道，68 mmol/L K+溶液可以在不同動物的不同血管產(chǎn)生強(qiáng)烈的收縮效應(yīng)，并且沒有脫敏現(xiàn)象。去甲腎上腺素作用于腎上腺素能受體，

14、受體分布廣泛，因此是藥理機(jī)械耦聯(lián)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)中最常用的試劑之一，因此，選用這兩種試劑作為生物力學(xué)實(shí)驗(yàn)的刺激劑。加入硝普鈉觀察血管的非內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)。在電機(jī)械耦聯(lián)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，大鼠對高鉀有較強(qiáng)的耐受和調(diào)節(jié)能力，大鼠血管張力在去除刺激因素后迅速下降，說明細(xì)胞內(nèi)存在快速的鈣通道調(diào)節(jié)機(jī)制，從而降低細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度，引起血管張力下降。但其具體機(jī)制尚需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)證實(shí)。在藥理機(jī)械耦聯(lián)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)中，人體血管與大鼠具有相似的受體介導(dǎo)收縮反應(yīng)和非內(nèi)皮依賴性舒張曲線。但是人體血管上升(收縮)和下降(舒張)曲線更為平緩，說明收縮和舒張強(qiáng)度低于大鼠。這可能提示人體對藥物具有一定的抵抗和適應(yīng)能力。盡管動物實(shí)驗(yàn)中經(jīng)常采用高

15、鉀進(jìn)行反復(fù)刺激，進(jìn)行血管生物力學(xué)的檢測。但是檢測也顯示，暴露于20 mmol/L的高鉀溶液，冠狀動脈內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮的釋放并未受到影響，但是內(nèi)皮細(xì)胞衍生的超級化因子(EDHF)介導(dǎo)的舒張作用減弱12。本組實(shí)驗(yàn)則通過生物力學(xué)的角度直接證實(shí)了高鉀的這種不利影響。人頸總動脈受到68mmol/L K+溶液刺激后，血管張力持續(xù)增高，改變細(xì)胞外K+濃度并不能使張力降低。這說明高鉀對人體血管的不良影響較大鼠更為明顯，人與動物血管調(diào)節(jié)鉀代謝的機(jī)制存在明顯差異。這種現(xiàn)象在臨床上將會明顯影響心肌保護(hù)的效果，表現(xiàn)在： 高鉀引起心肌血管痙攣，影響心臟停搏液的均勻分布，使部分心肌代謝活動持續(xù)存在，加重心肌缺血。 鈣內(nèi)流

16、導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鈣超載。由于心肌收縮最終都是改變細(xì)胞內(nèi)Ca2+的濃度。高鉀刺激引起的血管張力持續(xù)增加說明，細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度較高，細(xì)胞會調(diào)動質(zhì)膜上的通道或通過耗能的Ca2+泵，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的鈣濃度。但這些過程大多數(shù)都是耗能過程，會加重細(xì)胞缺氧。 心肌血管的攣縮影響復(fù)灌后血液的復(fù)流。 影響復(fù)灌后正常電機(jī)械活動的恢復(fù)。由于細(xì)胞外高鉀本身對心肌電活動的產(chǎn)生和傳導(dǎo)有影響，如果復(fù)灌后血運(yùn)恢復(fù)不暢，也會間接導(dǎo)致心律失常的發(fā)生。因此，根據(jù)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，有必要在進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)中探索大鼠和人體血管電機(jī)械耦聯(lián)反應(yīng)差異的內(nèi)在因素，將對心臟停搏液的改良起到有益的指導(dǎo)作用。在選擇心肌保護(hù)的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ秃蛯?shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)，應(yīng)考慮不同種屬的

17、差異性?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1 黑飛龍,王壽世,曹煥軍, 等. 阜外極化停搏液大鼠離體心肌保護(hù)效果研究 J. 中國體外循環(huán)雜志, 2008, 6(3):183-186.2 盧向航，冉珂，徐軍美，等. 延遲相嗎啡預(yù)處理對兔心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用 J. 中國體外循環(huán)雜志, 2008, 6(3):180-182.3 Allen BS. Pediatric myocardial protection: a cardioplegic strategy is the "solution" J. Semin Thorac Cardiovasc Surg Pediatr Car

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