第十章青島科技大學(xué)

1、第十章第十章甾體激素類藥物甾體激素類藥物的分析的分析返回主目錄2008北京奧運興奮劑檢查數(shù)量北京奧運興奮劑檢查數(shù)量4500例，陽性例，陽性9例例 基基 本本 要要 求求1 1掌握本類藥物常用的鑒別試驗和特殊雜質(zhì)掌握本類藥物常用的鑒別試驗和特殊雜質(zhì)的檢查方法。的檢查方法。2 2掌握高效液相色譜法、紫外分光光度法、掌握高效液相色譜法、紫外分光光度法、四氮唑比色法、異煙肼比色法、四氮唑比色法、異煙肼比色法、KoberKober反應(yīng)比反應(yīng)比色法色法等含量測定方法。等含量測定方法。3 3熟悉本類藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)、特征官能團與熟悉本類藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)、特征官能團與分析方法的關(guān)系。分析方法的關(guān)系。返 回基本結(jié)構(gòu)

2、：環(huán)戊烷駢多氫菲基本結(jié)構(gòu)：環(huán)戊烷駢多氫菲C20C21ABCD12345678910111213141516171819 概述概述分類：分類：甾體激素甾體激素腎上腺皮質(zhì)激素腎上腺皮質(zhì)激素性激素性激素雄性激素及蛋雄性激素及蛋白同化激素白同化激素孕激素孕激素雌激素雌激素OHOOHOCH2OHHHH 腎上腺皮質(zhì)激素腎上腺皮質(zhì)激素氫化可的松氫化可的松4 433酮酮基基C C1717醇酮基醇酮基OHOOHOHFHOCH3OHCH3腎上腺皮質(zhì)激素腎上腺皮質(zhì)激素醋酸地塞米松醋酸地塞米松OHOHCH3HHHHOFCH3OOPONaOONaOH腎上腺皮質(zhì)激素腎上腺皮質(zhì)激素地塞米松磷酸鈉地塞米松磷酸鈉雄性激素雄性激

3、素OCH3HHCH3OHHCH3甲睪酮甲睪酮OOHHHHOCH3雄性激素雄性激素丙酸睪酮丙酸睪酮OOHHHHO蛋白同化激素蛋白同化激素苯丙酸諾龍苯丙酸諾龍孕激素孕激素黃體酮黃體酮OCH3HHHCH3OHCH3C C1717- -甲酮基甲酮基OCH3HHCH3OOHCH3OCH3CH3孕激素孕激素醋酸甲地孕酮醋酸甲地孕酮雌性激素雌性激素炔雌醇炔雌醇OHCH3HHHCCHHO雌性激素雌性激素OHCH3HHHHHO雌二醇雌二醇OHOHHHCH3HCCH炔諾酮炔諾酮此外此外OHOHHHH3CHCCH炔諾孕酮炔諾孕酮返 回一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 1. 1. 腎上腺皮質(zhì)激素腎上腺皮質(zhì)激素主要活性基團

4、主要活性基團性性 質(zhì)質(zhì)4 433酮酮UVUV、與羰基試、與羰基試劑反應(yīng)劑反應(yīng) C C1717醇酮基醇酮基還還 原原 性性2. 2. 雄性激素及蛋白同化激素雄性激素及蛋白同化激素主要活性基團主要活性基團性性 質(zhì)質(zhì)4 433酮酮UVUV、與羰基試、與羰基試劑反應(yīng)劑反應(yīng) C C1717羥基羥基可成酯可成酯3. 3. 孕激素孕激素主要活性基團主要活性基團性性 質(zhì)質(zhì)4 433酮酮UVUV、與羰基試、與羰基試劑反應(yīng)劑反應(yīng)C C1717甲酮基甲酮基與亞硝基鐵氰與亞硝基鐵氰化鈉反應(yīng)化鈉反應(yīng)4. 4. 雌性激素雌性激素主要活性基團主要活性基團性性 質(zhì)質(zhì)A A環(huán)為環(huán)為33OH OH 苯環(huán)苯環(huán)UVUV、與重氮苯磺、

5、與重氮苯磺酸鹽反應(yīng)酸鹽反應(yīng)C C17 17 乙炔基乙炔基與與AgNOAgNO3 3反應(yīng)反應(yīng)C C1717羥基羥基可成酯可成酯返 回二、鑒別試驗二、鑒別試驗1、物理常數(shù)測定、物理常數(shù)測定按照按照Ch.PCh.P的熔點測定法進行的熔點測定法進行 第一法：用于測定易粉碎的固體藥物第一法：用于測定易粉碎的固體藥物 第二法：用于測定不易粉碎的固體藥品第二法：用于測定不易粉碎的固體藥品 第三法：用于測定凡士林及其類似物第三法：用于測定凡士林及其類似物比旋度：比旋度：不對稱物質(zhì)具有旋光性，當(dāng)偏振光不對稱物質(zhì)具有旋光性，當(dāng)偏振光透過透過1 dm，樣品濃度為，樣品濃度為1 g/ml的溶液，在一定的溶液，在一定波

6、長和溫度下測得的旋光度稱為比旋度。波長和溫度下測得的旋光度稱為比旋度。吸收系數(shù)：吸收系數(shù)：在給定的波長、溶劑和溫度在給定的波長、溶劑和溫度等條件下，吸光物質(zhì)在單位濃度、單位等條件下，吸光物質(zhì)在單位濃度、單位液層厚度時的吸光度。液層厚度時的吸光度。反映了藥物的紫外反映了藥物的紫外吸收特征吸收特征20100a Dlc2、化學(xué)鑒別法、化學(xué)鑒別法（一）與強酸的呈色反應(yīng)（母核）（一）與強酸的呈色反應(yīng)（母核）甾體激素甾體激素類藥物類藥物呈色呈色H H2 2SOSO4 4 H H3 3POPO4 4 HClOHClO4 4 HClHCl與硫酸顯色反應(yīng)與硫酸顯色反應(yīng) 顯顯 色色 熒光熒光 加水稀釋加水稀釋潑尼

7、松龍潑尼松龍 深紅深紅 絮狀絮狀灰灰潑尼松潑尼松 橙橙 黃黃藍(lán)綠藍(lán)綠炔雌醚炔雌醚 橙紅橙紅 黃綠黃綠 紅色紅色 炔雌醇炔雌醇 橙紅橙紅 黃綠黃綠 絮狀絮狀玫紅玫紅醋酸可的松醋酸可的松 黃或微黃或微 褪色并澄褪色并澄 帶橙帶橙 清清( (二二) )官能團的反應(yīng)官能團的反應(yīng)腎上腺腎上腺皮質(zhì)激皮質(zhì)激素藥物素藥物呈色呈色四氮唑鹽四氮唑鹽OH1、C17 醇酮基醇酮基還原性還原性呈色反應(yīng)呈色反應(yīng)此外還有斐林試此外還有斐林試液、多倫試液液、多倫試液四氮唑比色法四氮唑比色法甾酮類甾酮類激素藥激素藥物物腙腙（黃色）（黃色）羰基試劑羰基試劑2.C2.C3 3酮基和酮基和C C2020酮基酮基常用的羰基試劑：常用的

8、羰基試劑：2,4-2,4-二硝基苯肼、異煙肼、硫酸苯肼二硝基苯肼、異煙肼、硫酸苯肼具有甲酮具有甲酮基或活潑基或活潑亞甲基的亞甲基的甾體激素甾體激素類藥物類藥物藍(lán)紫藍(lán)紫色色亞硝基鐵氰化鈉亞硝基鐵氰化鈉間二硝基酚間二硝基酚芳香醛芳香醛3.3.甲酮基甲酮基黃體酮黃體酮藍(lán)紫色藍(lán)紫色亞硝基鐵亞硝基鐵 氰化鈉氰化鈉其他甾體其他甾體淡橙色或淡橙色或不顯色不顯色有機氟有機氟F有機破壞有機破壞有機氯有機氯Cl4.4.有機鹵素有機鹵素茜素氟藍(lán)茜素氟藍(lán) 硝酸亞鈰硝酸亞鈰硝酸硝酸硝酸銀硝酸銀AgCl 呈藍(lán)紫色呈藍(lán)紫色 雌激素雌激素類藥物類藥物紅色偶紅色偶 氮染料氮染料重氮苯磺酸重氮苯磺酸5. 酚羥基酚羥基含炔基含炔基

9、的甾體的甾體激素激素銀鹽沉淀銀鹽沉淀硝酸銀硝酸銀6. 乙炔基的沉淀反應(yīng)乙炔基的沉淀反應(yīng)RCCHAgNO3RCCAg ( (三三) )制備衍生物測定制備衍生物測定m.p.苯丙酸諾龍苯丙酸諾龍縮氨基脲衍生物縮氨基脲衍生物1. 縮氨基脲的生成縮氨基脲的生成m.p.約約182（分解）（分解）2. 酯的水解酯的水解丙酸睪酮丙酸睪酮堿性條件堿性條件睪酮睪酮m.p.為為150150 156-3-3-酮酮、苯環(huán)苯環(huán)、其他共軛結(jié)構(gòu)、其他共軛結(jié)構(gòu)（四）（四）UVUV法法1. 結(jié)構(gòu)依據(jù)結(jié)構(gòu)依據(jù)240nm240nm左右左右280nm左右左右結(jié)構(gòu)特征：酚羥基結(jié)構(gòu)特征：酚羥基、C C17 17 OHOH C C17 17

10、 乙炔基乙炔基炔雌醇炔雌醇OHCCHHO（五）（五）IRIR法法1505cm-1OH 3505cm-13300cm-1CH CC 1590cm-13610cm-1OH 酚羥基酚羥基醇羥基醇羥基1615cm-1苯環(huán)的骨苯環(huán)的骨架振動架振動黃體酮黃體酮COHHHCH3O結(jié)構(gòu)特征：結(jié)構(gòu)特征：-3-3-酮、酮、C C1717- -酮基酮基1700cm-1 C=O20位酮基位酮基1665cm-13位酮基位酮基1615cm-1870cm-1 C-H雙鍵雙鍵（六）（六）TLCTLC法法 主要用于甾體激素類藥物主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別制劑的鑒別 方法：對照品法方法：對照品法 要求供試品溶液所顯主斑點要

11、求供試品溶液所顯主斑點的的顏色顏色和和位置位置與對照品溶液的主與對照品溶液的主斑點相同。斑點相同。（七七） HPLCHPLC法法 主要用于甾體激素類藥物制主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別（如：醋酸曲安奈德軟劑的鑒別（如：醋酸曲安奈德軟膏、醋酸氟輕松軟膏）膏、醋酸氟輕松軟膏） 方法：對照品法方法：對照品法 要求在含量測定項下記錄要求在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品峰的的色譜圖中，供試品峰的t tR R與與對照品峰的對照品峰的t tR R一致。一致。返 回三、三、 特殊雜質(zhì)檢查特殊雜質(zhì)檢查（一）其他甾體的檢查（一）其他甾體的檢查檢查方法（具有一定分離能力）檢查方法（具有一定分離能力） TLCT

12、LC法（高低濃度對比法）法（高低濃度對比法） HPLCHPLC法（類似高低濃度對比法）法（類似高低濃度對比法）（1 1）TLCTLC法（高低濃度對比法）法（高低濃度對比法） 判定方法：判定方法：v 規(guī)定雜質(zhì)斑點數(shù)目規(guī)定雜質(zhì)斑點數(shù)目v 規(guī)定雜質(zhì)斑點顏色規(guī)定雜質(zhì)斑點顏色例：氫化可的松中其他甾體的檢查例：氫化可的松中其他甾體的檢查供試液：供試液：本品本品+ +氯仿氯仿- -甲醇（甲醇（9 9：1 1） 濃度：濃度：3.0mg/ml3.0mg/ml對照液：對照液：供試液（供試液（3.0mg/ml3.0mg/ml）+ +氯仿氯仿- -甲醇（甲醇（9 9：1 1） 60g/ml 60g/ml 層析：層析：

13、供試液供試液 點樣、展開、斑點檢出。點樣、展開、斑點檢出。 對照液對照液判斷：判斷：供試液如顯雜質(zhì)斑點，不得多于供試液如顯雜質(zhì)斑點，不得多于3 3個，其顏個，其顏 色與對照液的主斑點比較，不得更深。色與對照液的主斑點比較，不得更深。（2 2）HPLCHPLC法（主成分自身對照法）法（主成分自身對照法） 判定方法：判定方法：v 規(guī)定雜質(zhì)峰數(shù)目規(guī)定雜質(zhì)峰數(shù)目v規(guī)定雜質(zhì)峰面積規(guī)定雜質(zhì)峰面積硒的檢查硒的檢查（二）（二）來源來源 合成中用二氧化硒合成中用二氧化硒(SeO(SeO2 2) )脫氫脫氫有毒有毒方法方法藥物藥物氧瓶燃燒氧瓶燃燒二氨基萘比色法測定二氨基萘比色法測定0.0050.01Se的檢查n原

14、理有機藥物 氧瓶燃燒 SeO3 硝酸吸收 H2SeO4羥胺還原 Se4+ 二氨基萘試劑，pH2 4，5苯并苯硒二唑n378 nm 測吸光度n注：1.硒標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制2.溶液的酸堿度3.有機酸的安全破壞（三）有機溶劑殘留量的檢查（三）有機溶劑殘留量的檢查甲醇甲醇 0.30.3丙酮丙酮 5.0%5.0% 內(nèi)標(biāo)法內(nèi)標(biāo)法 + + 校正因子校正因子以地塞米松磷酸鈉為例以地塞米松磷酸鈉為例 GCGC法法（四）游離磷酸鹽的檢查（四）游離磷酸鹽的檢查地塞米松磷酸鈉地塞米松磷酸鈉對照品比色法對照品比色法（一）（一）HPLCHPLC法法USPUSP、BPBP、JPJP均采用均采用RPRPHPLCHPLC（大多內(nèi)標(biāo)

15、法）（大多內(nèi)標(biāo)法）（甾體激素類藥物常含有結(jié)構(gòu)相似的其（甾體激素類藥物常含有結(jié)構(gòu)相似的其他甾體雜質(zhì)，對利用結(jié)構(gòu)特征設(shè)計的比他甾體雜質(zhì)，對利用結(jié)構(gòu)特征設(shè)計的比色法有干擾）色法有干擾）四、含量測定四、含量測定（二二）UV法法-3-酮酮 240nm（）腎上腺皮質(zhì)激素腎上腺皮質(zhì)激素雄性激素和蛋白同化激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素孕激素苯環(huán)苯環(huán) 280nm（）雌激素雌激素腎上腺皮質(zhì)激素、腎上腺皮質(zhì)激素、 雄性激素和蛋白同雄性激素和蛋白同化激素、孕激素化激素、孕激素C3酮基酮基（1） 原理原理異煙腙（黃）異煙腙（黃）酮基酮基異煙肼異煙肼 3 3CHCl（縮合）（縮合）1. 異煙肼比色法異煙肼比色法（三）比

16、色法（三）比色法420 nmCONHNOHN異煙腙（黃色）異煙腙（黃色）（2 2）討論）討論反應(yīng)速度（反應(yīng)專屬性）反應(yīng)速度（反應(yīng)專屬性）A.C3=OC17= O 、C20= O C11= O 不反應(yīng)不反應(yīng)反應(yīng)專屬性反應(yīng)專屬性 C C3 3酮基酮基B. 溶劑的選擇溶劑的選擇異煙肼鹽酸鹽異煙肼鹽酸鹽受溶解度的影響受溶解度的影響無水甲醇無水甲醇無水乙醇無水乙醇對試劑的穩(wěn)定性對試劑的穩(wěn)定性好、呈色強度較好、呈色強度較無水乙醇中高、無水乙醇中高、但對植物油的溶但對植物油的溶解度小解度小C.C.水分、溫度、水分、溫度、O O2 2與光線的影響與光線的影響 含水量含水量腙水解腙水解A%O O2 2與光線對反

17、應(yīng)的影響不大與光線對反應(yīng)的影響不大t D. 酸的種類和濃度及異煙肼的濃度酸的種類和濃度及異煙肼的濃度酸：異煙肼酸：異煙肼=2：1 腎上腺皮質(zhì)激素類腎上腺皮質(zhì)激素類C C1717-醇酮基醇酮基強還原性強還原性（1 1）原理）原理2. 四氮唑比色法四氮唑比色法有色甲瓚有色甲瓚四氮唑鹽四氮唑鹽醇酮基醇酮基 a a 1717COH - 還原還原 CNNNNH三苯甲瓚三苯甲瓚深紅深紅CNNNN+Cl-氯化三苯四氮唑氯化三苯四氮唑（TTC）紅四氮唑（紅四氮唑（RT）nmmax490480 e2 HCl-+CNNNNOCH3+-ClCNNNNOCH3藍(lán)四氮唑（藍(lán)四氮唑（BT）525 nm（2 2）討論）討論

18、A. 基團對反應(yīng)速度的影響基團對反應(yīng)速度的影響C11= O C11OHC21OH C21-酯酯B. 溶劑、水分的影響溶劑、水分的影響 以無醛乙醇為溶劑，水含量大時，呈以無醛乙醇為溶劑，水含量大時，呈色減慢，不超過色減慢，不超過5對結(jié)果沒有影響對結(jié)果沒有影響C. OC. O2 2與光線的影響與光線的影響避光避光隔絕空氣、快速、充隔絕空氣、快速、充N N2 2D. D. 堿的種類及加入順序堿的種類及加入順序以以氫氧化四甲基銨氫氧化四甲基銨的結(jié)果最佳的結(jié)果最佳加入順序：加入順序：堿試液堿試液四氮唑鹽四氮唑鹽皮質(zhì)激素溶液皮質(zhì)激素溶液E. E. 溫度與時間溫度與時間室溫（室溫（2525）反應(yīng)）反應(yīng)404

19、045 min45 min（1 1）原理）原理max=465max=515雌激素雌激素3. Kober反應(yīng)比色法反應(yīng)比色法桃紅桃紅黃色黃色雌激素雌激素2 2OH乙醇乙醇 4 42 2SOHOHCH3O雌二醇雌二醇-3-甲醚甲醚CH3CH3OCH3CH3Omax=465max=5154 42 2SOH4 42 2SOHOH2 2鐵酚試劑鐵酚試劑(NH4)2Fe(SO4)2 + H2SO4 + H2O2 + 苯酚苯酚* 鐵鹽的作用鐵鹽的作用 加快黃色產(chǎn)物的形成、轉(zhuǎn)化加快黃色產(chǎn)物的形成、轉(zhuǎn)化 加強紅色產(chǎn)物的穩(wěn)定性加強紅色產(chǎn)物的穩(wěn)定性* 酚的作用酚的作用 加快紅色產(chǎn)物的形成加快紅色產(chǎn)物的形成 消除反應(yīng)產(chǎn)生的熒光消除反應(yīng)產(chǎn)生的熒光Iron-phenol Reagent返 回五、生物樣本中甾體激素的分析五、生物樣本中甾體激素的分析GC-MS:尿樣尿樣SPE萃取萃取衍生化衍生化GC/MS分析分析HPLC-MS:血清血清 HPLC/MS分析分析練習(xí)與思考練習(xí)與思考AA型題型題 1. 1. 醋酸地塞米松的鑒別方法是醋酸地塞米松的鑒別方法是A.A.三氯化鐵反應(yīng)三氯化鐵反應(yīng) B. B. 水解反應(yīng)水解反應(yīng) C. C. 柯柏反應(yīng)柯柏反應(yīng) D.D.與堿性酒石酸銅試液反應(yīng)與堿性酒石酸銅試液反應(yīng) E. E. 雙縮脲反應(yīng)雙縮脲反應(yīng)2. 2. 丙酸睪酮丙酸