自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞技術(shù)治療肝硬化

1、自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞技術(shù)治療肝硬化可行性研究報(bào)告一、醫(yī)療機(jī)構(gòu)名稱、級(jí)別、類別，相應(yīng)診療科目登記情況，相應(yīng)科室設(shè)置情況二、技術(shù)開(kāi)展的目的、意義和實(shí)施方案1開(kāi)展該項(xiàng)醫(yī)療技術(shù)的目的隨著人類疾病譜的變化，傳染病的逐漸減少，而由于自身細(xì)胞、組織或器官壞死而導(dǎo)致的疾病越來(lái)越多。這些疾病僅通過(guò)手術(shù)和藥物是不能解決的。正是從這個(gè)意義上說(shuō)，20世紀(jì)是藥物治療的時(shí)代，21世紀(jì)是細(xì)胞治療的時(shí)代，這是繼藥物治療、手術(shù)治療之后的又一場(chǎng)醫(yī)療革命。干細(xì)胞移植治療是一種新興的治療方式，為目前難以醫(yī)治的多種疾病帶來(lái)全新的治療方式，是最有可能在不遠(yuǎn)的將來(lái)替代現(xiàn)有某些醫(yī)療技術(shù)的治療方式。間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal ste

2、m cells，MSCs)是骨髓中除造血干細(xì)胞以外的另一種成體干細(xì)胞，廣泛分布于動(dòng)物體內(nèi)骨髓、肝臟、脂肪等多種組織中。MSCs具有強(qiáng)大的自我更新能力和多向分化潛能，是移植領(lǐng)域應(yīng)用前景廣闊的再生來(lái)源細(xì)胞；同時(shí)，MSCs是一種重要的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞，MSCs在炎癥細(xì)胞因子刺激后對(duì)免疫系統(tǒng)表現(xiàn)出很強(qiáng)的抑制作用，所以MSCs有望應(yīng)用于減少免疫排斥，延長(zhǎng)移植物存活時(shí)間，治療相關(guān)免疫失調(diào)癥，如自身免疫疾病等方面。骨髓來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞由于來(lái)源自體，安全性已被證實(shí)，已在許多臨床試驗(yàn)中應(yīng)用。肝病是嚴(yán)重危害人類健康的一類疾病，是醫(yī)學(xué)研究面臨的巨大挑戰(zhàn)之一。我國(guó)是一個(gè)乙型肝炎大國(guó)，人群乙型肝炎病毒攜帶率高達(dá)10%，每年

3、因肝炎相關(guān)性肝硬化引發(fā)終末期肝病新增病例數(shù)超過(guò)500萬(wàn)。另外，由于環(huán)境因素、生活習(xí)慣等改變，由脂肪性肝病、藥物性肝病及免疫性肝病等引起的終末期肝病也在逐年增加，每年新增病例數(shù)約為100萬(wàn)。肝硬化、慢性重癥肝炎等終末期肝病是一個(gè)高發(fā)病率、高死亡率的嚴(yán)重危害人類健康的公共衛(wèi)生問(wèn)題。由于進(jìn)行肝臟移植曾經(jīng)是治療終末期肝臟疾病的唯一選擇，但是治療費(fèi)用數(shù)額巨大、而且供體的短缺、配型的艱難、術(shù)后需長(zhǎng)期使用免疫抑制劑、圍手術(shù)期風(fēng)險(xiǎn)大、以及術(shù)后移植肝并發(fā)肝炎、腫瘤等問(wèn)題，許多患者最終放棄治療。間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療重癥肝病給患者帶來(lái)新的希望。2開(kāi)展該項(xiàng)醫(yī)療技術(shù)的意義干細(xì)胞技術(shù)為人類部分再生（產(chǎn)生新的功能細(xì)胞、組織

4、和器官）從而為治療疾病、提高生存年限和生活質(zhì)量提供了重要基礎(chǔ)，勢(shì)必引起疾病治療和醫(yī)療模式的深刻變革。從而基于干細(xì)胞的藥物研究和開(kāi)發(fā)，也許會(huì)引起整個(gè)醫(yī)藥行業(yè)的革命。干細(xì)胞技術(shù)（比如自體干細(xì)胞移植治療）也將是未來(lái)個(gè)體醫(yī)學(xué)的重要組成部分。屬于生物技術(shù)，有相應(yīng)的廢物處理措施，對(duì)環(huán)境影響小。醫(yī)院探尋并開(kāi)展新型的醫(yī)療技術(shù)服務(wù)廣大患者是醫(yī)院的職責(zé)之一。21世紀(jì)是生物醫(yī)學(xué)世紀(jì)。干細(xì)胞治療一種新興的、先進(jìn)的治療技術(shù)。我科提供的具有代表性的細(xì)胞治療技術(shù)為醫(yī)院搭建了生物細(xì)胞治療的平臺(tái)（技術(shù)、人員、管理、設(shè)備、硬件、品牌、學(xué)術(shù)），樹(shù)立了醫(yī)院的品牌和聲譽(yù)，這些因素都會(huì)間接的為醫(yī)院提高了就診量，增加了整體收入，創(chuàng)造更多的

5、經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。能夠在較短的時(shí)間內(nèi)建立和開(kāi)展，生物細(xì)胞GMP實(shí)驗(yàn)室可服務(wù)于全院的臨床與科研。這對(duì)于提高醫(yī)院的整體技術(shù)理論水平、學(xué)科交叉融合特色、開(kāi)展國(guó)內(nèi)外科研合作與學(xué)術(shù)交流、發(fā)表高水平臨床與科研學(xué)術(shù)論文具有重要意義。目前，隨著干細(xì)胞分離培養(yǎng)技術(shù)的逐漸成熟，干細(xì)胞研究的重點(diǎn)已經(jīng)開(kāi)始逐漸從基礎(chǔ)研究轉(zhuǎn)向臨床研究，建立完整的干細(xì)胞移植治療技術(shù)體系，非常有助于提高技術(shù)科研水平，培育新的利潤(rùn)增長(zhǎng)點(diǎn)，提高醫(yī)院經(jīng)營(yíng)管理效益，同時(shí)可以及時(shí)地?fù)屨紘?guó)內(nèi)干細(xì)胞研究的制高點(diǎn)并與國(guó)際研究水平保持同步，可以大幅度提高醫(yī)院的科研水平和醫(yī)療工作的科技含量，豐富疾病治療手段，提高醫(yī)療水平，提高醫(yī)院知名度。同時(shí)，本項(xiàng)目的開(kāi)展，

6、非常有助于提高科研水平、培育新的利潤(rùn)增長(zhǎng)點(diǎn)，并能使患者獲得及時(shí)的治療，改善患者癥狀，提高生活質(zhì)量，減少社會(huì)負(fù)擔(dān)，社會(huì)效益十分顯著。軍事方面，干細(xì)胞治療在救治戰(zhàn)時(shí)傷病員方面也可發(fā)揮重要作用，如輻射損傷等等。3開(kāi)展該項(xiàng)醫(yī)療技術(shù)的實(shí)施方案治療前需檢查肝功能、血常規(guī)、凝血功能等進(jìn)行評(píng)估?；緱l件符合者，經(jīng)簽署知情同意書(shū)后可進(jìn)行干細(xì)胞治療。1）首先由醫(yī)生在滅菌環(huán)境采集骨髓，大約50120毫升；2）而后將采集到的細(xì)胞在超潔凈實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行培養(yǎng)、擴(kuò)增及質(zhì)檢等過(guò)程；3）于培養(yǎng)的第10、17、24、31天左右分四次回輸干細(xì)胞；4）觀察治療反應(yīng)及療效；間隔36個(gè)月可進(jìn)行下一療程的治療；5）進(jìn)行間充質(zhì)干細(xì)胞移植后進(jìn)行至

7、少1年隨訪。三、技術(shù)基本情況1國(guó)內(nèi)外開(kāi)展情況近年來(lái)，隨著干細(xì)胞研究領(lǐng)域的巨大進(jìn)展，干細(xì)胞移植為終末期肝病的治療帶來(lái)了新的契機(jī)。經(jīng)過(guò)大量的體外實(shí)驗(yàn)研究和動(dòng)物試驗(yàn)研究，間充質(zhì)干細(xì)胞技術(shù)已逐步應(yīng)用于臨床。間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療終末期肝病已經(jīng)在國(guó)內(nèi)外得到較廣泛應(yīng)用，其安全性和有效性也得到了高度的認(rèn)可。一些國(guó)內(nèi)外學(xué)者業(yè)已開(kāi)始進(jìn)行相關(guān)小規(guī)模前瞻性試驗(yàn)，應(yīng)用結(jié)果表明此方法安全、有效，患者耐受情況良好。研究發(fā)現(xiàn), 將肝硬化患者自身來(lái)源的MSCs，經(jīng)介入技術(shù)再注入患者體內(nèi)，其肝功能的各項(xiàng)指標(biāo)、Child分級(jí)、生活質(zhì)量都有明顯好轉(zhuǎn)。Terai等報(bào)道了9名接受從周圍靜脈輸注自體骨髓細(xì)胞治療的肝硬化患者，在移植24周后

8、，血清白蛋白、總蛋白水平明顯改善(P <0.05)，顯著改善Child-Pugh分級(jí)(P <0.05)，并未觀察到任何副作用。2007年，Mohamadnejad等選取了4位失代償期肝硬化患者為臨床研究對(duì)象。從患者自身提取的MSCs經(jīng)過(guò)一系列處理后，制備成細(xì)胞混懸液，以(1-1.5)×106個(gè)/mL細(xì)胞懸液的細(xì)胞濃度向患者自身回輸20 mL，在隨后的1年里定期隨訪，發(fā)現(xiàn)患者的血漿白蛋白(albumin, ALB)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanine transaminase, ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspartate aminotransferase, AST)、直接膽紅素(di

9、rect bilirubin)、凝血酶原時(shí)間(prothrombin time, PT)等指標(biāo)均有一定程度好轉(zhuǎn)，且隨訪期間無(wú)明顯不良反應(yīng)，并發(fā)癥也得到控制，甚至連原已萎縮的肝臟還有所增大，生活質(zhì)量和精神狀況均得到明顯改善。2008年, 國(guó)內(nèi)學(xué)者王迪等通過(guò)40例經(jīng)肝動(dòng)脈移植骨髓干細(xì)胞病例作類似的研究(移植方案: 提取自身來(lái)源的骨髓干細(xì)胞, 并制成10 mL細(xì)胞懸液, 其CD34+干細(xì)胞數(shù)為1×106-1×109/mL，再將上述10 mL細(xì)胞懸液移植到肝臟)，所得結(jié)果與Mohamadnejad等很相似。還有結(jié)果報(bào)道：移植12周后，谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）逐漸降低，由平均186.34

10、IU/L降至68.96IU/L；總膽紅素（TBIL），由平均161.34mol/L降至78.93mol/L；白蛋白（ALB）逐漸升高，由平均24.39 g/L升至31.96 g/L，表明間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療后，患者肝功能明顯改善。在干細(xì)胞移植后凝血酶原活動(dòng)度(PTA)逐漸上升，由術(shù)前平均26.33%上升至術(shù)后8周的53.48%，表明間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療后患者凝血機(jī)制明顯改善。問(wèn)卷評(píng)分發(fā)現(xiàn)調(diào)查移植后大多數(shù)患者身體狀況有明顯的改善：移植后8周（51.6%）；食欲改善的45例（75%）；體力好轉(zhuǎn)32例（53.3%）；腹脹減輕28例（46.6%）；在60例移植患者中未發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重并發(fā)癥。MSCs治療肝病的

11、具體機(jī)制尚不清楚，MSCs對(duì)肝纖維化肝硬化的治療原理可能主要包括：MSCs分化形成正常肝細(xì)胞, 補(bǔ)充肝細(xì)胞數(shù)量, 改善肝功能：維持人體正常肝臟功能約需2.5×1010個(gè)肝細(xì)胞。MSCs通過(guò)體外誘導(dǎo)然后輸注體內(nèi), 可隨循環(huán)植入肝臟增殖分化成肝細(xì)胞。MSCs分泌細(xì)胞因子/生長(zhǎng)因子、抑制炎癥反應(yīng)：MSCs可分泌多種因子，如HGF、ILs、SCF、SDF-1、TGF-、TNF-等。其中HGF不但具有誘導(dǎo)MSCs自身向肝細(xì)胞分化功能, 還抑制TGF-1產(chǎn)生, 阻止肝臟纖維化和抗肝細(xì)胞凋亡的活性, 從而提高存活率。IL-10能破壞TNF的纖維化信號(hào)傳導(dǎo)通路, 減少纖維化。MSCs激活卵原細(xì)胞,

12、促進(jìn)肝細(xì)胞再生：卵圓細(xì)胞被認(rèn)為是肝細(xì)胞的前體細(xì)胞. 當(dāng)肝臟輕微損傷時(shí)肝臟可通過(guò)自身的肝細(xì)胞增殖修復(fù), 嚴(yán)重時(shí)則通過(guò)卵圓細(xì)胞修復(fù)再生。而MSCs在分泌上述細(xì)胞因子時(shí)起到激活卵圓細(xì)胞、促進(jìn)肝細(xì)胞再生作用。MSCs抑制肝星形細(xì)胞(hepaticstellate cells, HSCs)活化、阻止細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix, ECM)的生成：HSCs是正常肝和纖維化時(shí)合成細(xì)胞外基質(zhì)的主要細(xì)胞。MSCs可能通過(guò)HGF阻斷細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶的磷酸化作用, 抑制-SMA陽(yáng)性細(xì)胞的增殖, 使門(mén)脈區(qū)成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制、凋亡增加, 從而緩解肝纖維化進(jìn)展。MSCs降解肝內(nèi)過(guò)量的ECM：基

13、質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)具有較強(qiáng)的降解ECM作用。MSCs是MMP-2和MTMMP-2等酶的主要來(lái)源, 并且其表達(dá)水平與肝纖維化密切相關(guān)，這是由于它們對(duì)肝纖維化的逆轉(zhuǎn)起重要作用。通過(guò)他們及其他學(xué)者的研究結(jié)論推斷, MSCs移植是一種行之有效的、能夠控制并緩解肝硬化的治療手段, 在治療經(jīng)費(fèi)、來(lái)源缺乏、排異反應(yīng)等方面都優(yōu)于肝移植?？梢?jiàn)間充質(zhì)干細(xì)胞移植可以作為肝纖維化肝硬化的一種新的治療方法。世界各國(guó)有超過(guò)10項(xiàng)間充質(zhì)干細(xì)胞治療肝硬化臨床試驗(yàn)項(xiàng)目在FDA或ClinicalTrials注冊(cè)，入選患者超過(guò)300例，但仍然處于I期或II期的臨床試驗(yàn)階段，其中很多項(xiàng)目都是用異體來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞。我國(guó)已開(kāi)始

14、用間充質(zhì)干細(xì)胞治療，根據(jù)初步的臨床報(bào)告，間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)肝硬化的治療都取得了較好的療效。近5年來(lái)，先后已有武漢協(xié)和醫(yī)院、哈醫(yī)大附一院、天津市人民醫(yī)院、中山大學(xué)附屬醫(yī)院、遼寧省人民醫(yī)院、北京協(xié)和醫(yī)院、北京人民醫(yī)院、解放軍總醫(yī)院（301）、解放軍第304醫(yī)院、解放軍455醫(yī)院等多家單位開(kāi)展了間充質(zhì)干細(xì)胞的研究和治療工作。2適應(yīng)證肝硬化病例選擇的標(biāo)準(zhǔn)：1）年齡1870歲，男女不限；2）根據(jù)患者的病史、癥狀、體征、實(shí)驗(yàn)室及器械檢查結(jié)果，結(jié)合近幾年的病情進(jìn)展情況，診斷為肝硬化失代償期，且伴有大量腹水。3）在既往的一年內(nèi)，雖經(jīng)內(nèi)科積極治療，病情仍反復(fù)加重。4）需間斷補(bǔ)充血漿白蛋白及口服利尿劑治療。5）血漿白

15、蛋白大于25g/L，總膽紅素小于170umol/L，凝血酶原活動(dòng)度大于30%（凝血酶原時(shí)間小于20秒），大量腹水控制到中等以下，自發(fā)性腹膜炎及肝性腦病已治愈，CTP評(píng)分大于等于7分；6）血紅蛋白大于7.0g/L，血小板大于3萬(wàn)，紅細(xì)胞比容大于0.25；7）近一個(gè)月內(nèi)無(wú)消化道出血病史；8）自愿簽署知情同意書(shū)。 3禁忌證1) 不符合納入標(biāo)準(zhǔn)；2) 有門(mén)靜脈血栓，或合并有嚴(yán)重慢性消耗性疾病以及嚴(yán)重心血管、腦血管、肺、內(nèi)分泌系統(tǒng)、腎臟及造血系統(tǒng)等原發(fā)性疾??；3) 同時(shí)合并原發(fā)性肝癌，或患有任何其他腫瘤；4) 有肝臟切除或門(mén)靜脈高壓分流和（或斷流）手術(shù)史、已行或近期擬行肝移植者；5) 試驗(yàn)前2周內(nèi)曾服用

16、影響本項(xiàng)目的藥物（如非選擇性受體阻斷劑、生長(zhǎng)抑素制劑、血管活性藥物和中藥等）；6) 靜脈曲張破裂出血、重創(chuàng)傷、手術(shù)、出血、自發(fā)性細(xì)菌性腹膜炎、急性感染發(fā)作期及伴有休克的患者；7) 妊娠和哺乳期婦女；8) 度過(guò)敏體質(zhì)或者有嚴(yán)重過(guò)敏史者；9) 患有精神疾病者、酗酒、有藥癮或有其它不宜進(jìn)行臨床試驗(yàn)者。4不良反應(yīng)治療比較安全，至今未見(jiàn)重大不良反應(yīng)，有很小部分病例在細(xì)胞回輸后出現(xiàn)體溫升高（37.038.5），絕大部分病人在26小時(shí)內(nèi)恢復(fù)正常體溫。極少數(shù)體溫較高超過(guò)39的患者，在使用解熱藥后就可以完全緩解。在我們的臨床應(yīng)用觀察中，迄今為止，干細(xì)胞移植治療尚未導(dǎo)致重大的副作用或不良反應(yīng)；僅有個(gè)別病人在介入治

17、療后產(chǎn)生穿刺部位疼痛，輕微頭昏、頭痛及低度發(fā)熱等。5技術(shù)路線A、骨髓采集：髂前和髂后上棘多個(gè)部位抽取骨髓約50120毫升。B、密度梯度離心法分離，貼壁法純化。C、細(xì)胞擴(kuò)增：細(xì)胞長(zhǎng)到80匯合時(shí)1：3-5傳代。D、細(xì)胞質(zhì)檢、質(zhì)控。E、細(xì)胞凍存、復(fù)蘇及運(yùn)輸。F、細(xì)胞回輸：靜脈注射和/或蛛網(wǎng)膜下腔注射治療。6質(zhì)量控制措施1) 母體組織標(biāo)本的遺傳缺陷調(diào)查和病原微生物檢測(cè)：術(shù)前用ELISA方法常規(guī)進(jìn)行母體標(biāo)本的病原微生物檢測(cè)，包括艾滋病病毒HIV Ab /Ag、乙肝病毒HBs Ag、丙肝病毒HCV Ab /Ag、TP 等病原微生物。2 ) 細(xì)胞制劑微生物檢查：干細(xì)胞制劑制備完成后，用全自動(dòng)細(xì)菌培養(yǎng)儀和配套

18、標(biāo)準(zhǔn)的血培養(yǎng)瓶進(jìn)行真菌和細(xì)菌檢測(cè)及熱源檢測(cè)。3) 干細(xì)胞生物學(xué)功能檢測(cè)：細(xì)胞存活率檢測(cè)；使用臺(tái)盼藍(lán)染色法計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)目；使用血常規(guī)計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)單個(gè)核細(xì)胞總數(shù)；使用流式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志，CD29、CD44、CD73、CD90和CD105陽(yáng)性，陽(yáng)性率不低于95； CD34、CD45、CD31和HLA-DR陰性，陽(yáng)性率不高于2；體外誘導(dǎo)多向分化特性檢測(cè)。7療效判定標(biāo)準(zhǔn)肝硬化及其它終末期肝病主要療效判定標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)終末期肝病的診斷分期標(biāo)準(zhǔn)與肝功能Child-Pugh分級(jí)改變情況評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)歸。顯效：癥狀明顯減輕，B超檢查腹水消失或少量，肝功能達(dá)A級(jí)以上；或評(píng)分前進(jìn)一個(gè)數(shù)量級(jí)為顯效(如從C級(jí)到B級(jí), 或

19、者B到A 級(jí))；有效：癥狀減緩，B超檢查腹水中量或少量，肝功能達(dá)B級(jí)以上而未達(dá)A級(jí)者；或評(píng)分減少但不夠一個(gè)數(shù)量級(jí)為有效；無(wú)效：癥狀改善不明顯，腹水黃疸加重，肝功能C級(jí)者；或肝功能僅有一項(xiàng)改善或無(wú)明顯改善則為無(wú)效。8評(píng)估方法術(shù)后觀察患者食欲、體力、腹腔積液、面容等癥狀、體征及不良反應(yīng)的發(fā)生，術(shù)后第2、4、8、12周復(fù)查谷丙轉(zhuǎn)氨酶ALT、AST、膽紅素TBil、白蛋白Alb、凝血酶PT等實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)。將對(duì)所有病例嚴(yán)密隨訪至少1年，隨訪主要觀察和記錄內(nèi)容包括：腹水再發(fā)時(shí)間、肝硬化并發(fā)癥出現(xiàn)狀況、病程中應(yīng)用白蛋白的情況、肝功能（白蛋白、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、膽紅素、相關(guān)的凝血酶等）、Child-Pugh積分及AF

20、P等化驗(yàn)指標(biāo)，評(píng)估患者生活質(zhì)量，并隨時(shí)進(jìn)行必要的檢查和治療。主要療效判別指標(biāo)：a) 肝臟儲(chǔ)備功能：由于目前尚缺少客觀、準(zhǔn)確和統(tǒng)一的臨床評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，肝臟儲(chǔ)備功能是反映肝臟功能最重要的指標(biāo)，因此，我們將能反映肝臟合成功能的指標(biāo)作為臨床療效的主要判別指標(biāo)。主要包括：白蛋白（ALB），膽固醇（CHO），膽堿酯酶(CHE)以及凝血系列。這些指標(biāo)在治療2周后呈現(xiàn)明顯好轉(zhuǎn)趨勢(shì)。b) 終末期肝病的評(píng)分：Child-Pugh評(píng)分是反映終末期肝病肝臟儲(chǔ)備功能較為客觀的綜合性指標(biāo)，因此比較治療前后Child-Pugh評(píng)分的改善情況是判斷治療效果較為準(zhǔn)確的手段。根據(jù)Child-Pugh 評(píng)分標(biāo)準(zhǔn): 57分為A級(jí)，810

21、分為B級(jí)；1115分為C級(jí)。根據(jù)Child-Pugh評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，分別于治療后1、2、3、4周及2、3、4-12個(gè)月觀察患者肝臟儲(chǔ)備功能情況。次要療效判別指標(biāo)：a) 肝臟酶學(xué)：部分病人的肝臟酶學(xué)改變可呈現(xiàn)好轉(zhuǎn)，主要包括：谷丙轉(zhuǎn)移酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)移酶(AST)；總膽紅素(TBIL)。b) 門(mén)脈高壓相關(guān)并發(fā)癥：患者術(shù)后肝硬化相關(guān)的并發(fā)癥發(fā)生頻率明顯減少甚至消失，主要包括：消化道出血、腹水、自發(fā)性細(xì)菌性腹膜炎以及肝性腦病等。 c) 影像學(xué)：B超、CT檢查和胃鏡檢查可幫助輔助診斷肝硬化的程度和肝硬化的并發(fā)癥。9與其它醫(yī)療技術(shù)的比較（風(fēng)險(xiǎn)、療效、費(fèi)用及療程）眾所周知，對(duì)于各種肝臟疾病所致的肝臟功能衰竭，

22、臨床對(duì)之尚無(wú)行之有效的治療手段。目前有希望的治療方式有原位肝移植、生物人工肝及基因治療等.然而，這些治療方式都面臨肝源短缺、免疫毒性及高額的治療費(fèi)用等問(wèn)題.目前終末期肝病的臨床治療手段主要包括：內(nèi)科常規(guī)治療、人工肝支持系統(tǒng)和原位肝移植等。（1）內(nèi)科常規(guī)治療常規(guī)的內(nèi)科常規(guī)治療主要以補(bǔ)充血漿、白蛋白、保肝、利尿等為主。這些治療措施雖能暫時(shí)改善臨床癥狀，卻不能逆轉(zhuǎn)肝細(xì)胞數(shù)量日益減少導(dǎo)致的肝功能逐漸減退。（2）人工肝支持系統(tǒng)人工肝支持系統(tǒng)已有50余年的發(fā)展歷史。盡管隨著材料學(xué)、細(xì)胞工程學(xué)及臨床醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展，人工肝支持治療已成為急性肝功能衰竭治療的有效方法之一，為自身肝臟的再生及等待肝源爭(zhēng)取了時(shí)間。然

23、而，對(duì)于終末期肝病慢性肝功能衰竭患者療效不盡人意。（3）原位肝移植原位肝移植是目前治療終末期肝病的唯一有效手段。但是肝移植供體缺乏成為原位肝移植治療的瓶頸。美國(guó)2005年的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，17000等待肝移植的患者，由于供肝缺乏，每年僅有7000患者可以接受原位肝移植治療。加之原位肝移植治療費(fèi)用昂貴、術(shù)后需長(zhǎng)期使用免疫抑制劑、圍手術(shù)期風(fēng)險(xiǎn)大、以及術(shù)后移植肝并發(fā)肝炎、腫瘤等問(wèn)題，極大限制了原位肝移植的廣泛應(yīng)用。（4）雖然成熟的肝細(xì)胞移植最接近于臨床應(yīng)用，但也有一定的局限性，即無(wú)法大量的增殖和急需時(shí)使用.干細(xì)胞增殖能力強(qiáng)，在體內(nèi)外均有極強(qiáng)的向肝系細(xì)胞分化的能力，從而干細(xì)胞移植倍受重視。相比骨髓干細(xì)胞

24、移植治療終末期肝病，外周血干細(xì)胞移植更為簡(jiǎn)單易行，不僅可以減少病人抽取大量骨髓的痛苦及手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)，還可避免體外分離骨髓單個(gè)核細(xì)胞造成的污染及骨髓有形成分的丟失。間充質(zhì)干細(xì)胞技術(shù)能較好地且長(zhǎng)時(shí)間地改善終末期肝患者的，降低患者住院的頻率和醫(yī)療開(kāi)支，同時(shí)也為部分患者等待肝移植治療贏取了時(shí)間。自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞注射治療，是近幾年國(guó)內(nèi)外開(kāi)展的新技術(shù)，該方法可以產(chǎn)生新的肝臟細(xì)胞和改善肝臟血液循環(huán)，從根本上減緩或阻斷肝硬化向前發(fā)展，效果好、費(fèi)用低、安全性大，眾多科學(xué)研究顯示，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是一種多潛能干細(xì)胞，在相應(yīng)的組織環(huán)境下具有分化為心肌細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、肝臟細(xì)胞、胰腺細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞等組織

25、細(xì)胞的潛能。自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療就是把患者的骨髓抽取一部分，在實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過(guò)不斷的分離、分化、提純，提取出自體干細(xì)胞，然后通過(guò)動(dòng)脈導(dǎo)管介入注射到患病的器官，促進(jìn)器官的細(xì)胞修復(fù)和再生，恢復(fù)器官的功能和血液供應(yīng)，達(dá)到臨床治療的目的。對(duì)于肝硬化患者，自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療恰恰在藥物治療和肝臟移植中間顯示出了巨大的治療優(yōu)勢(shì)。通過(guò)把患者的自體骨髓干細(xì)胞經(jīng)動(dòng)脈插管由肝動(dòng)脈注射到肝臟，使干細(xì)胞在肝臟廣泛植入。因?yàn)楣撬栝g充質(zhì)干細(xì)胞具有“因地分化”的特性，就是在什么樣的環(huán)境條件導(dǎo)引下分化成什么樣的細(xì)胞，所以骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞被移植到肝臟組織后，就像種入肝臟的種子，在肝臟微環(huán)境的調(diào)節(jié)下成長(zhǎng)發(fā)育成骨髓來(lái)源的肝臟干細(xì)

26、胞，再通過(guò)不斷增殖分化長(zhǎng)成新的肝臟細(xì)胞、膽管細(xì)胞和毛細(xì)細(xì)胞，從而修復(fù)舊的肝組織和改善血液循環(huán)通路，阻斷肝硬化的發(fā)展過(guò)程，起到恢復(fù)功能和降低門(mén)靜脈高壓的作用，促使病肝重獲生機(jī)，最終起到延長(zhǎng)病人生命和恢復(fù)健康的目的。與肝臟移植相比，雖然不能直接換一顆成形的肝臟，但能在患病的肝臟組織內(nèi)長(zhǎng)出新的干細(xì)胞組織，具有殊途同歸，異曲同工之道。四、我院生物技術(shù)診斷與治療中心在間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)方面已具備的條件1.人員（執(zhí)業(yè)注冊(cè)情況、資歷、相關(guān)履歷）科研主要成員均為傳染病、消化科、血液學(xué)或免疫學(xué)等相關(guān)專業(yè)，且主要從事細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)研究及臨床工作，細(xì)胞培養(yǎng)室工作人員均多年從事細(xì)胞培養(yǎng)工作，有豐富的細(xì)胞分離培養(yǎng)

27、工作經(jīng)驗(yàn)。其它見(jiàn)附件。2.設(shè)施設(shè)備試驗(yàn)場(chǎng)所：我試驗(yàn)室為GMP標(biāo)準(zhǔn)的試驗(yàn)室，具備千級(jí)層流實(shí)驗(yàn)室和百級(jí)超潔凈工作臺(tái)。儀器設(shè)備：血細(xì)胞分離機(jī)、CO2培養(yǎng)箱，臺(tái)式冷凍離心機(jī)，大容量落地低溫離心機(jī)，生物安全柜，顯微鏡，倒置顯微鏡、大容量培養(yǎng)瓶、冰箱(4/-20/-800C)，液氮罐(儲(chǔ)存箱)，程序降溫儀，流式細(xì)胞儀，酶標(biāo)儀，PCR儀等；其它見(jiàn)附件。3.輔助條件試劑：各種進(jìn)口培養(yǎng)基和無(wú)血清培養(yǎng)基、細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子、單抗等等。耗材： 培養(yǎng)瓶，離心管，電動(dòng)移液器，血清移液管，凍存管，多孔板，臍血凍存袋，過(guò)濾器，移液槍，槍頭，細(xì)胞刮刀等。干細(xì)胞制劑體外分離純化的標(biāo)準(zhǔn)化作業(yè)程序( SOP)，包括從臨床干細(xì)胞治療

28、體外分離的申請(qǐng)到干細(xì)胞移植后不良反應(yīng)回報(bào)的整個(gè)治療過(guò)程。制定了質(zhì)量手冊(cè)、程序文件、管理文件以及各種記錄表格。與軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院干細(xì)胞研究機(jī)構(gòu)等單位有合作關(guān)系等。4.風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估及應(yīng)急預(yù)案由于在干細(xì)胞移植的整個(gè)過(guò)程中，涉及到很多的臨床醫(yī)療技術(shù)的操作，每一個(gè)過(guò)程都有一定的風(fēng)險(xiǎn)，在整個(gè)過(guò)程中，其中可能的風(fēng)險(xiǎn)包括：麻醉意外及其并發(fā)癥，重危者可危及生命；治療中血管損傷，致出血不止、大出血休克，危及生命等情況，嚴(yán)重時(shí)需輸血或另行止血處理；移植后發(fā)熱反應(yīng)；局部或全身各種感染及血液制品引起的疾?。ㄈ纾翰《拘愿窝住滩?、梅毒、瘧疾、巨細(xì)胞病毒）；治療后效果不明顯，臨床癥狀和體征的改善與您的期望存在偏差，甚至治療無(wú)效

29、；治療后癥狀加重，或臨床有效時(shí)間較短，原有病情繼續(xù)進(jìn)展，癥狀及體征加重；干細(xì)胞動(dòng)員期間，可能出現(xiàn)“白細(xì)胞瘀滯癥”，可發(fā)生呼吸困難、頭暈、言語(yǔ)不清等臨床表現(xiàn)，或其他心腦血管意外；其他難以預(yù)料的危及生命、致殘的意外情況等等。其中常見(jiàn)的發(fā)熱、頭疼、腰背部及雙下肢酸痛、嘔吐，其他風(fēng)險(xiǎn)存在但是發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)非常低，目前為止沒(méi)有發(fā)生一例。應(yīng)急處理可與相關(guān)科室聯(lián)系也可提前預(yù)設(shè)方案，如輸注前給予地塞米松靜脈注射。輸注干細(xì)胞時(shí)可另建一靜脈通路輸注魚(yú)精蛋白中和肝素。準(zhǔn)備肌注非那根等藥，護(hù)理人員床旁監(jiān)護(hù)及相應(yīng)的對(duì)癥處理。如骨髓動(dòng)員過(guò)程出現(xiàn)發(fā)熱時(shí)及時(shí)對(duì)癥處理；采集時(shí)患者出現(xiàn)麻醉意外時(shí)采集室配備相關(guān)的急救措施；介入時(shí)意外時(shí)

30、出血、疼痛、繼發(fā)感染，給予相應(yīng)處理。心理護(hù)理：解釋干細(xì)胞移植的必要性、要求、程序、可能出現(xiàn)的并發(fā)癥以及預(yù)防并發(fā)癥的措施，減少病人緊張、孤獨(dú)感。移植后恢復(fù)期護(hù)理：做好生活護(hù)理，鼓勵(lì)進(jìn)食高蛋白、高熱量、高維生素、易消化的飲食，協(xié)助進(jìn)行適當(dāng)活動(dòng)，增強(qiáng)機(jī)體抵抗力。五、醫(yī)學(xué)倫理審查報(bào)告我國(guó)在干細(xì)胞領(lǐng)域與西方國(guó)家的差距較其他領(lǐng)域小，受宗教影響也較小，公眾接受程度較高。隨著信息時(shí)代的發(fā)展，患者從廣播、電視、報(bào)紙、網(wǎng)絡(luò)了解到細(xì)胞治療的知識(shí)，越來(lái)越多的患者主動(dòng)尋求細(xì)胞治療。從政府到基層，該項(xiàng)目的社會(huì)倫理適應(yīng)性方面都被認(rèn)可。不論是骨髓來(lái)源還是臍帶來(lái)源，間充質(zhì)干細(xì)胞屬于成體干細(xì)胞，與胚胎干細(xì)胞相比，其倫理學(xué)爭(zhēng)論問(wèn)題

31、不突出，已為社會(huì)各方面人士接受。干細(xì)胞治療技術(shù)安全性和有效性已被大量臨床實(shí)踐所驗(yàn)證。異體細(xì)胞的移植可以與輸血相比，至于自體細(xì)胞回輸則不存在倫理學(xué)問(wèn)題。醫(yī)學(xué)界稱干細(xì)胞為“萬(wàn)能細(xì)胞”，也有人通俗而形象地稱其為“干什么都行的細(xì)胞”，盡管在臨床安全性方面尚未出現(xiàn)大問(wèn)題，我們?nèi)匀粦?yīng)該注意其安全性，不要引起醫(yī)療爭(zhēng)端；同時(shí)要保護(hù)患者及捐獻(xiàn)者的隱私，注意不得泄露間充質(zhì)干細(xì)胞捐獻(xiàn)者及受者資料。六、其它主要參考文獻(xiàn)：1. Schuppan D, Afdhal NH. Liver cirrhosis. Lancet. 2008;371(9615):838-51.2. Kashani A, Landaverde C,

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