子宮內(nèi)膜樣腺癌中PTEN與CyclinE的表達(dá)及相互關(guān)系

1、子宮內(nèi)膜樣腺癌中PTEN與CyclinE的表達(dá)及相互關(guān)系【摘要】 目的 探討子宮內(nèi)膜樣腺癌及癌前病變組織中PTEN、CyclinE的蛋白表達(dá)及其與子宮內(nèi)膜樣腺癌臨床病理特征的關(guān)系。方法 采用免疫組化SP法檢測(cè)正常子宮內(nèi)膜、內(nèi)膜增生、內(nèi)膜不典型性增生和子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中PTEN和CyclinE蛋白的表達(dá)。結(jié)果 PTEN和CyclinE蛋白在內(nèi)膜不典型性增生組中陽性表達(dá)率分別為50.00%、60.00%；在子宮內(nèi)膜樣腺癌組中陽性表達(dá)率分別為45.45%和65.50%。兩組中PTEN陽性表達(dá)均低于正常子宮內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜增生組（P<0.01），而CyclinE陽性表達(dá)均高于正常子宮內(nèi)膜

2、和子宮內(nèi)膜增生組（P<0.01）。PTEN和CyclinE蛋白的表達(dá)在內(nèi)膜不典型性增生和子宮內(nèi)膜樣腺癌組中的表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)（r=-0.61、P<0.05，r=-0.49、P<0.01）。癌組中PTEN陽性表達(dá)的缺失與組織學(xué)分級(jí)、肌層浸潤(rùn)深度或伴有轉(zhuǎn)移及臨床分期有關(guān)（P<0.01或P<0.05）。CyclinE的陽性表達(dá)率與組織學(xué)分級(jí)有關(guān)（P<0.01）。癌組中腫瘤的復(fù)發(fā)與PTEN的表達(dá)缺失和CyclinE的過度表達(dá)均有關(guān)（P<0.01）。結(jié)論 PTEN表達(dá)缺失和CyclinE的過度表達(dá)涉及了子宮內(nèi)

3、膜樣腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程并與腫瘤的復(fù)發(fā)密切相關(guān)，二者的聯(lián)合檢測(cè)可作為子宮內(nèi)膜樣腺癌的早期診斷、判斷腫瘤生物學(xué)行為的參考指標(biāo)。 【關(guān)鍵詞】 癌，子宮內(nèi)膜樣；生物學(xué)標(biāo)記；PTEN；CyclinEAbstract: Objective To investigate the PTEN and CyclinE protein expression in endometrioid adenocarcinoma and precancerous tissues and their relationships to clinical pathological features of endometrioid

4、adenocarcinoma. Methods An S-P immunohistochemistry technique was used to measure PTEN and CyclinE protein in normal endometrium, endometrial hyperplasia, atypical hyperplasia and endometrioid adenocarcinoma. Results PTEN- and CyclinE-positive in atypical hyperplasia group was 50.00% and 60.00%, res

5、pectively; and PTEN- and CyclinE-positive in endometrioid adenocarcinoma group was 45.45% and 65.50%, respectively. Both positive PTEN in these two groups were lower significantly than those in normal endometrium and endometrial hyperplasia groups(P<0.01), and positive CyclinE was also higher

6、 than those in in normal endometrium and endometrial hyperplasia groups(P<0.01).The expression of PTEN protein was inversely correlated with CyclinE protein expression in atypical hyperplasia and endometrioid adenocarcinoma groups (r=-0.61, P<0.05,r=-0.49, P<0.01). In endometrio

7、id adenocarcinoma, the expression loss of PTEN protein was positively associated with histological grade, muscles invasion or lymph node metastasis and clinical stage (P<0.05 or P<0.01). The expression of CyclinE protein was positively correlated with histological stage (P<0.01)

8、. The recurrence in endometrioid adenocarcinoma group was associated with PTEN expression loss and overexpression of CyclinE(P<0.01). Conclusion The results suggest that the loss expression of PTEN and overexpression of CyclinE protein are closely related to the genesis, development and recur

9、rence of endometrioid adenocarcinoma. Combination detection of PTEN and CyclinE protein might be useful marker on early diagnosis, predicting the biological behavior and prognosis of endometrioid adenocarcinoma. Key words: carcinoma, endometrioid; biological markers; PTEN; CyclinE腫瘤的本質(zhì)在于細(xì)胞周期調(diào)節(jié)機(jī)制失控，導(dǎo)

10、致細(xì)胞異常增殖所致，PTEN作為編碼具有磷酸酶活性產(chǎn)物的抑癌基因?qū)?xì)胞周期G1期的負(fù)調(diào)控起著關(guān)鍵的作用，而CyclinE是細(xì)胞周期G1/S期轉(zhuǎn)換中的正性調(diào)控因子。我們采用免疫組化技術(shù)檢測(cè)子宮內(nèi)膜樣腺癌及癌前病變組織中PTEN和CyclinE蛋白，旨在探討PTEN和CyclinE二者表達(dá)異常在子宮內(nèi)膜樣腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用及其與臨床病理特征之間的相互關(guān)系，為臨床早期診斷、治療和評(píng)價(jià)預(yù)后提供依據(jù)。1 資料與方法1.1 病例來源 選自廣西柳州市婦幼保健院病理科1996年6月2002年6月的子宮內(nèi)膜病變標(biāo)本，全部病例均經(jīng)病理診斷證實(shí)。病理診斷、分類參照WHO的分類標(biāo)準(zhǔn)1，其中子宮內(nèi)膜增生組30例（1

11、8例為單純性、12例為復(fù)雜性），子宮內(nèi)膜不典型性增生組20例，子宮內(nèi)膜樣腺癌組55例，癌組平均年齡50.3歲。另取30例正常子宮內(nèi)膜標(biāo)本為對(duì)照組。選擇的對(duì)象均無術(shù)前激素替代治療及放、化療史。癌組術(shù)后組織學(xué)分級(jí)、分期按FIGO（1988）標(biāo)準(zhǔn)2。其中級(jí)27例，級(jí)20例，級(jí)8例。55例子宮內(nèi)膜樣腺癌中隨訪45例，至2007年6月，其中13例（28.89%）腫瘤復(fù)發(fā)。1.2 方法 免疫組化染色采用SP法。PTEN為多單克隆抗體，稀釋度為150。CyclinE為單克隆抗體（即用型）。操作按說明書進(jìn)行，切片均經(jīng)EDTA（pH 9.0）作微波抗原修復(fù)，以PBS取替一抗作陰性對(duì)照，分別用已知正常子宮內(nèi)膜PT

12、EN陽性和乳腺癌CyclinE陽性組織切片作陽性對(duì)照。1.3 結(jié)果判斷 每張切片隨機(jī)選取10個(gè)高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)瘤細(xì)胞。PTEN正常陽性表達(dá)定位于胞質(zhì)，10%以上瘤細(xì)胞胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性標(biāo)記；<10%或無著色者為陰性。CyclinE正常陽性表達(dá)定位于胞核，5%以上瘤細(xì)胞胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性標(biāo)記；<5%或無著色者為陰性。1.4 統(tǒng)計(jì)方法 計(jì)數(shù)資料采用2檢驗(yàn)，用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行處理。2 結(jié)果2.1 PTEN和CyclinE蛋白在各組中的表達(dá) PTEN和CyclinE蛋白在各組中的表達(dá)情況見表1。結(jié)果顯示：PTEN蛋白在正常子宮內(nèi)膜組

13、織中均為陽性表達(dá)而CyclinE蛋白均呈陰性表達(dá)，從正常子宮內(nèi)膜子宮內(nèi)膜增生不典型性增生子宮內(nèi)膜樣腺癌，PTEN的陽性表達(dá)率呈逐漸下降的趨勢(shì)而CyclinE的陽性表達(dá)率則逐漸升高。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，不典型性增生組和子宮內(nèi)膜樣腺癌組PTEN蛋白的表達(dá)均低于正常組和子宮內(nèi)膜增生組，差異有高度顯著性（P均<0.01）。不典型性增生組和子宮內(nèi)膜樣腺癌組CyclinE蛋白的表達(dá)均高于正常組和子宮內(nèi)膜增生組，差異有高度顯著性（P均<0.01）。不典型性增生組和子宮內(nèi)膜樣腺癌組之間PTEN、CyclinE蛋白的表達(dá)差異無顯著性（P均>0.05）。表1 PTEN和Cycl

14、inE蛋白在各組中的表達(dá)情況（略）與正常子宮內(nèi)膜組和子宮內(nèi)膜增生組比較，P均<0.012.2 不典型性增生和子宮內(nèi)膜樣腺癌中PTEN和CyclinE表達(dá)的相互關(guān)系 在20例不典型性增生組和55例子宮內(nèi)膜樣腺癌組中，PTEN陽性/CyclinE陰性和PTEN陰性/CyclinE陽性分別為16例、41例，而PTEN陰性/CyclinE陰性和PTEN陽性/CyclinE陽性分別為4例、14例。PTEN和CyclinE蛋白在不典型性增生和子宮內(nèi)膜樣腺癌中的表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)關(guān)系（r=-0.61，P<0.05；r=-0.49，P<0.01）。2.3 PTEN和Cyc

15、linE的表達(dá)與子宮內(nèi)膜樣腺癌臨床病理特征的關(guān)系 PTEN的表達(dá)隨著子宮內(nèi)膜樣癌組織學(xué)從高分化向低分化進(jìn)展，其陽性表達(dá)率逐漸下降，而CyclinE的表達(dá)則逐漸上升，PTEN的陽性表達(dá)缺失與組織學(xué)分級(jí)、子宮肌層浸潤(rùn)程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P<0.01或P<0.05），在臨床分期中，期與、期相比差異具有顯著性（P<0.01）。而CyclinE陽性表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)有關(guān)（P<0.01），與子宮肌層浸潤(rùn)程度和轉(zhuǎn)移及臨床分期無關(guān)（P>0.05）。在45例癌組隨訪病例中，腫瘤復(fù)發(fā)者均與PTEN蛋白的表達(dá)缺失和CyclinE蛋白的過表達(dá)密切相

16、關(guān)，見表2。表2 癌組中臨床病理參數(shù)與PTEN、CyclinE表達(dá)的關(guān)系（略）3 討論3.1 PTEN和CyclinE在細(xì)胞增殖中的作用機(jī)制 在細(xì)胞增殖信號(hào)傳導(dǎo)中，活化的PI3K可將PIP2磷酸化成PIP3（磷脂酰肌醇3,4,5- 三磷酸），PIP3促使PKB/Akt磷酸化。PIP3本身或進(jìn)一步激活整合素相連激酶（ILK），促使PKB/Akt磷酸化。PTEN作為磷脂酰肌醇（PI）三磷酸酶， 通過拮抗PI3K信號(hào)導(dǎo)致PIP3的肌醇環(huán)中D3位點(diǎn)的去磷酸化并由此滅活下游信號(hào)，從而抑制PIP3/Akt（PKB）信號(hào)傳導(dǎo)途徑。而在細(xì)胞粘連依賴信號(hào)中，PTEN通過其脂質(zhì)磷酸酶活性調(diào)節(jié)FAK和Shc的磷酸化

17、而影響細(xì)胞的粘連和遷移，抑制腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。目前認(rèn)為在腫瘤細(xì)胞形成的6項(xiàng)基本要素：逃逸凋亡、足夠的自生生長(zhǎng)信號(hào)、對(duì)抗生長(zhǎng)信號(hào)不敏感、促進(jìn)血管生長(zhǎng)、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移和持續(xù)復(fù)制電位中，PIP3信號(hào)至少涉及此6項(xiàng)中前5種信號(hào)的調(diào)節(jié)3。CyclinE是G1中期的細(xì)胞增殖信號(hào)因子，其過度表達(dá)可導(dǎo)致細(xì)胞增殖失控癌變發(fā)生。P27是負(fù)調(diào)節(jié)因子，有研究表明，從正常、增生、不典型性增生到子宮內(nèi)膜樣腺癌，P27與CyclinE蛋白二者之間的表達(dá)顯示一個(gè)反向表達(dá)的過程4。PTEN可促使P27與CyclinE-CDK2復(fù)合物結(jié)合，從而顯著抑制CDK2的活性并下調(diào)RB蛋白磷酸化水平而介導(dǎo)G1期負(fù)調(diào)控細(xì)胞增殖5,6。此調(diào)節(jié)

18、機(jī)制表明PTEN表達(dá)缺失或下降、CyclinE的過度表達(dá)，則與細(xì)胞異常增殖、癌變的發(fā)生和腫瘤的轉(zhuǎn)移和浸潤(rùn)密切相關(guān)。3.2 PTEN在良惡性細(xì)胞組織中的表達(dá) 本組研究結(jié)果證實(shí)，隨著正常、內(nèi)膜增生、不典型性增生到子宮內(nèi)膜樣腺癌病變演變過程的進(jìn)展，PTEN蛋白的陽性表達(dá)率逐漸下降，差異有顯著性（P<0.01），與劉琴等7的研究結(jié)果相符。在癌前病變不典型性增生組中PTEN的陽性表達(dá)均低于正常組和增生組（P<0.01），這與增生內(nèi)膜內(nèi)膜不典型性增生子宮內(nèi)膜樣腺癌，即與從良性進(jìn)展到癌前病變進(jìn)而發(fā)展到惡性這樣一個(gè)疾病的自然進(jìn)展演變過程相一致，這種表達(dá)模式提示PTEN 的正常表達(dá)是

19、內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞正常分化調(diào)控中的關(guān)鍵調(diào)控因子之一，在子宮內(nèi)膜樣腺癌發(fā)生過程中PTEN蛋白表達(dá)的缺失是一個(gè)早期的事件并可在癌前病變中被檢測(cè)出。癌組中PTEN蛋白的表達(dá)水平與組織學(xué)分級(jí)及浸潤(rùn)程度、轉(zhuǎn)移和臨床分期密切相關(guān)，提示PTEN的表達(dá)下降使得PTEN功能的喪失將促使內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞向腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化，PTEN對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的負(fù)調(diào)控及對(duì)細(xì)胞凋亡、黏附和移動(dòng)的控制減弱，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞癌變的發(fā)生和腫瘤組織具有的侵襲和轉(zhuǎn)移的能力8,9。3.3 Cyclin在良惡性細(xì)胞組織中的表達(dá) 與PTEN的表達(dá)相反，隨著正常到內(nèi)膜增生到內(nèi)膜非典型性增生到子宮內(nèi)膜樣腺癌病變演變過程的進(jìn)展，CyclinE蛋白的陽性表達(dá)率逐漸上升（P

20、<0.01）。這種表達(dá)模式提示CyclinE的正常表達(dá)是子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞正常分化調(diào)控中的關(guān)鍵調(diào)控因子之一，在子宮內(nèi)膜樣腺癌中的發(fā)生過程中CyclinE蛋白的過度表達(dá)是一個(gè)早期的事件并可在癌前病變中被檢測(cè)出。同時(shí)隨著組織學(xué)分級(jí)從高分化向低分化的進(jìn)展，CyclinE蛋白的表達(dá)水平亦呈逐漸升高（P<0.01），表明CyclinE的過度表達(dá)與子宮內(nèi)膜樣腺癌分化程度有關(guān)。3.4 癌變中PTEN和CyclinE表達(dá)的相關(guān)關(guān)系 腫瘤的發(fā)生涉及多基因突變和協(xié)同作用，從正常到內(nèi)膜增生到內(nèi)膜不典型性增生到子宮內(nèi)膜樣腺癌，PTEN與CyclinE蛋白二者之間的表達(dá)顯示一個(gè)反向表達(dá)的過程

21、，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示在不典型性增生組和子宮內(nèi)膜樣腺癌組中，二者的陽性表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)，這一現(xiàn)象表明在子宮內(nèi)膜樣腺癌和癌前發(fā)生階段既存在著PTEN表達(dá)的缺失，也存在CyclinE蛋白的異常高表達(dá)。此外，PTEN蛋白的表達(dá)缺失和CyclinE蛋白的過表達(dá)與腫瘤的復(fù)發(fā)密切相關(guān)，我們認(rèn)為，二者表達(dá)的負(fù)相關(guān)模式涉及了子宮內(nèi)膜樣腺癌的啟動(dòng)和發(fā)展過程。鑒于目前研究已證實(shí)PTEN是子宮內(nèi)膜樣腺癌中突變率最高的基因且在高雌激素水平的狀態(tài)下， PTEN具有抑制子宮內(nèi)膜上皮過度增生進(jìn)而抑制癌變發(fā)生的作用，在子宮內(nèi)膜癌前病變和子宮內(nèi)膜樣腺癌中聯(lián)合檢測(cè)PTEN和CyclinE蛋白，可作為臨床早期判斷子宮內(nèi)膜不典型性增生病變的

22、發(fā)展趨勢(shì)，評(píng)價(jià)腫瘤預(yù)后的免疫學(xué)指標(biāo)，并為今后臨床開展PTEN靶向免疫、基因治療提供幫助?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】 1 曹澤毅.中華婦產(chǎn)科學(xué)M.北京:人民衛(wèi)生出版社,2004:2121-2124.2 顧美皎.臨床婦產(chǎn)科學(xué)M.北京:人民衛(wèi)生出版社,2001:911.3 Leslie NR, Downess CP. PTEN function：how normal cells control it and tumour cells lose it J. Biochem J,2004,38（2）：1-11.4 佘遠(yuǎn)萍，史玉霞，呂忠士.p27kipl和cyclinEd在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及其意義J.腫瘤防治研究，2002，29(3):170-172.5 Cheney IW, Neutboom ST, Vaillancourt MT, et al. Adeno