有機(jī)污染物分析與生物毒性實(shí)驗(yàn)的水樣采集與前處理

1、1.儀器與試劑試劑二氯甲烷（Dichloromethane）:農(nóng)殘級(jí)（美國(guó)FisherScientific公司）；甲醇（Methanol）：HPL儂（美國(guó)FisherScientific公司）；正己烷（n-Hexane）：農(nóng)殘級(jí)（美國(guó)FisherScientific公司）。硅膠（60200目）：超純（美國(guó)ACROSORGANICS中性氧化鋁（50200目）：（美國(guó)ACROSORGANICS無(wú)水硫酸鈉：優(yōu)級(jí)純。藥匙（硅膠柱凈化所用）：以二氯甲烷超聲清洗15min兩次、正己烷超聲清洗15min-次。硅膠在180±2C、氧化鋁在250±2C分別活化12h（activate）;待冷

2、卻至室溫時(shí)，稱(chēng)重后裝入大口錐形瓶（250或500ml）,加入其重量3%的蒸儲(chǔ)水去活性（deactivate）,添加過(guò)程中應(yīng)用滴管逐滴加入，邊加邊用力振搖以防止結(jié)塊，并超聲振蕩30min;放置過(guò)夜，平衡后加入正己烷浸沒(méi)其表面?zhèn)溆茫ㄒ话阋残璺胖眠^(guò)夜）。無(wú)水硫酸鈉經(jīng)450c焙燒12h后置于密封廣口瓶中保存?zhèn)溆?。儀器與耗材APFF玻璃纖維濾膜（6142mm,孔徑mMillipore）:預(yù)先在450c烘烤3h,稱(chēng)重記錄（較臟水樣35張為一組，干凈水樣每張皆需稱(chēng)量，為懸浮物收集所需），蒸儲(chǔ)水浸沒(méi)保存；相應(yīng)的濾膜支架與蠕動(dòng)泵（Millipore）;固相萃取裝置：SupelcoVisiprepTMDL十二管防

3、交叉污染固相萃取裝置；固相萃取柱：WatersOASIS?HLB固相萃取柱（6cc、200mg）;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：BiCHIRotavaporR-200（瑞士）；無(wú)水真空氣泵：美國(guó)進(jìn)口，型號(hào)：DOA-P104-BN;高純氮?dú)饧跋鄳?yīng)氮吹儀。所用玻璃儀器均以10%的稀硝酸浸泡過(guò)夜，再以重銘酸鉀洗液潤(rùn)洗浸泡20min以上，分別用自來(lái)水、蒸儲(chǔ)水沖洗干凈，在烘箱中110c烘干；所用塑料器皿均以10%的稀硝酸浸泡過(guò)夜，再分別用自來(lái)水、蒸儲(chǔ)水沖洗干凈，倒置晾干。2.樣品的采集與過(guò)濾水樣采集采樣瓶采用10l容量的棕色帶塞細(xì)口玻璃瓶，樣品并S經(jīng)重銘酸鉀洗液潤(rùn)洗浸泡20min以上，以自來(lái)水、蒸儲(chǔ)水洗凈后倒置晾干，待用

4、。污水、地表水每個(gè)樣品采集30l,飲用水每個(gè)樣品采集45l。樣品運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室后如不立即處理需4c下保存；在存放樣品時(shí)，應(yīng)盡量注意存放在沒(méi)有有機(jī)氣體干擾的區(qū)域，以免交叉污染。所采集樣品應(yīng)在2日內(nèi)過(guò)濾完畢，7日內(nèi)富集完畢。揮發(fā)性有機(jī)物采集采樣瓶選用40mL帶有聚四氟乙烯密封墊的螺口玻璃瓶，洗凈烘干。采樣時(shí)先用預(yù)采集的水樣蕩洗兩三次，再向樣品瓶中充樣至溢流，以水樣充滿，頂部不留任何空間，封瓶時(shí)水樣中不能有氣泡，瓶壁有氣泡時(shí)應(yīng)輕搖瓶壁將氣泡趕出；4c下保存。水樣過(guò)濾過(guò)濾裝置：直徑為142mml勺Millipore微濾系統(tǒng)；濾膜：APFF玻璃纖維濾膜；將20l（污水、地表水）或40l（飲用水）濾過(guò)水樣收集

5、于已洗凈的帶塞棕色玻璃瓶保存，加入5%。體積的甲醇，以抑制微生物的生長(zhǎng)，待富集；剩余5l濾過(guò)水樣用于常規(guī)水質(zhì)分析（250ml,注意pH值、溫度需立即測(cè)量）、金屬分析（250ml,加入1ml硝酸酸化）、氮磷分析（500ml）,均收集于其余備用；懸浮物的收集：將濾過(guò)水樣的濾膜用鋁箔包好，4c保存。3 .樣品的富集富集采用500mg的HLB固相萃取柱用于水樣的富集。先安裝好真空抽濾裝置及固相萃取裝置，HLB柱在使用前依次用二氯甲烷、甲醇、蒸儲(chǔ)水各5ml清洗，加液后保持5min,開(kāi)真空泵抽取液體，處理完后小柱處于活化狀態(tài)。調(diào)節(jié)好真空度，使水樣過(guò)柱的流速恒定在5ml/min。洗脫富集完畢后，將水抽干。首

6、先以5ml甲醇/水（甲醇=5%為清洗劑，浸泡5min后，抽干30min以上；然后以10ml甲醇/二氯甲烷（1:9,v/v）為淋洗劑分三次（4ml、3ml、3ml）進(jìn)行第一級(jí)洗脫，洗脫組分為中等極性至非極性組分；再以5ml正己烷/二氯甲烷（2:1,v/v）為淋洗劑進(jìn)行第二級(jí)洗脫，洗脫組分為非極性組分。洗脫液均收集于K-D濃縮器中。將同一樣品的第一級(jí)洗脫液集中于一個(gè)250ml燒瓶中，添加3藥匙無(wú)水硫酸鈉，放置過(guò)夜；轉(zhuǎn)移出清液后旋蒸濃縮，過(guò)無(wú)水硫酸鈉小柱（裝柱見(jiàn)凈化部分），用15ml二氯甲烷淋洗脫水，用柔和高純氮?dú)猓ㄗ⒁獾獨(dú)饬髁恳?，表面剛好產(chǎn)生漩渦即可，以免組分損失）吹蒸并置換溶劑為正己烷。第二級(jí)

7、洗脫液集中于另一個(gè)150ml燒瓶中，旋蒸濃縮并置換溶劑為正己烷。將兩級(jí)組分合并吹氮濃縮，轉(zhuǎn)移至大容量樣品管，定容至6ml。懸浮物提取50ml二氯甲烷超聲提取三次（30min、30min、30min）,合并提取液，收集于250ml燒瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至1ml左右，留待凈化。4 .樣品的凈化與濃縮正己烷濕法裝柱在干7的50cm長(zhǎng)內(nèi)彳仝為10mm的層析管上用記號(hào)筆在12cm和18cm處做上記號(hào)，取一個(gè)干凈漏斗置于層析管頂端。先用10ml正己烷淋洗層析管，從下端排出至液面剛好浸沒(méi)石英砂層，此淋洗液廢棄。關(guān)上開(kāi)關(guān)后，再加入20ml正己烷，用濕法裝柱，用藥匙依次將12cm硅膠、6cm氧化鋁從頂端漏斗加入（

8、硅膠、氧化鋁層的上界面分別在12cm18cm的記號(hào)線位置）。注意在裝柱過(guò)程中，要不斷地加入正己烷以免其黏附在管壁上，并保持正己烷以適當(dāng)?shù)牧魉俨粩嗟亓鞒?，且保證正己烷液面始終高于柱界面（即柱子不能斷裂）；同時(shí)不斷地用吸耳球輕輕敲打滴定管，使硅膠層或氧化鋁層緊密。最后以同樣方法再在氧化鋁層上裝入1cm的無(wú)水硫酸鈉，用于樣品脫水。調(diào)節(jié)正己烷液面，使其正好處于無(wú)水硫酸鈉層面之上，關(guān)閉開(kāi)關(guān)備用（注意此時(shí)管壁上不得粘有固體顆粒，否則需用正己烷沖洗干凈再調(diào)節(jié)液面）。整個(gè)裝柱過(guò)程中，正己烷可回收循環(huán)使用。Florisil凈化柱同樣方法裝入19cm的Florisil和1cm的無(wú)水硫酸鈉。無(wú)水硫酸鈉小柱則選用30

9、cm層析柱，僅裝入570cm無(wú)水硫酸鈉即可。OCPs&PAHs羊品的凈化與洗脫將1ml待凈化的二氯甲烷富集樣品用滴管從K-D濃縮器移入凈化柱中，浸泡5min以上,保證樣品與凈化柱充分接觸交換。第一級(jí)洗脫：以15ml正己烷分三次洗滌盛有二氯甲烷樣品的K-D濃縮器，均用滴管移入凈化柱中，然后以60滴/min左右的流速流出，直到液面剛好處于無(wú)水硫酸鈉層面之上，關(guān)閉開(kāi)關(guān)。洗脫液用K-D濃縮器收集，此為非極性的烷燒組分。第二級(jí)洗脫：進(jìn)一步以70ml正己烷/二氯甲烷（7:3,v/v）混合液淋洗凈化柱，控制流速為90滴/min左右，即成滴而不連續(xù)流。洗脫液用100mL雞心瓶收集，此為中等極性至非極性

10、的芳煌組分。第三級(jí)洗脫：進(jìn)一步以30ml甲醇淋洗凈化柱，洗脫?用50或100ml雞心瓶收集，此為凈化樣品的濃縮15ml正己烷洗脫液直接用柔和高純氮?dú)鉂饪s定容至1ml;70ml正己烷/二氯甲烷（7:3）混合溶劑洗脫液首先用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至1ml左右；再用10ml正己烷分三次洗滌雞心瓶，轉(zhuǎn)移至K-D濃縮器；然后再用柔和高純氮?dú)鉂饪s定容至1ml;30ml甲醇洗脫液與混合溶劑洗脫液濃縮方法相同，也定容至1ml;首先進(jìn)行化學(xué)分析，剩余樣品吹干置換生物實(shí)驗(yàn)溶劑。有機(jī)磷與取代苯（按照氯苯、硝基苯）的凈化方法正己烷濕法裝柱，10gFlorisil+1-2cm無(wú)水硫酸鈉。預(yù)先用10ml正己烷洗柱，放出舍棄，使液

11、面恰好浸沒(méi)無(wú)水硫酸鈉層；再將2ml溶于正己烷的樣品加載，并用1-2ml正己烷沖洗樣品瓶，同樣加入凈化柱。依次用以下四種混合洗脫劑洗脫：對(duì)有機(jī)磷的各級(jí)洗脫回收率見(jiàn)表1。FractionI.50ml6%乙醛in正己烷；FractionIII.50ml50%乙醛in正己烷;FractionIV.50ml100%乙醛。表1.對(duì)有機(jī)磷的各級(jí)洗脫回收率名稱(chēng)各級(jí)洗脫回收率1234內(nèi)吸磷100乙拌磷100二嗪農(nóng)100馬拉硫磷595乙基對(duì)硫磷100中基對(duì)硫磷100谷硫磷（保棉磷）2080乙硫磷NDNDNDND酚Phenols的凈化方法正己烷濕法裝柱，4g硅膠+2g無(wú)水硫酸鈉。預(yù)先用10ml正己烷洗柱，放出舍棄，使液面恰好浸沒(méi)無(wú)水硫酸鈉層；再將2ml溶于正己烷的樣品加載，然后再以10ml正己烷洗柱，放出舍棄。依次用以下四種混合洗脫劑洗脫：各級(jí)洗脫回收率見(jiàn)表1。FractionI.ml15%甲苯in正己烷；FractionII.ml40%甲苯in正己烷；FractionIII.ml75%甲苯in正己烷；表1.各級(jí)洗脫回收率名稱(chēng)各級(jí)洗脫回收率%12342-氯酚9012-硝基苯酚990苯酚90102,4-一甲基苯酚9572,4-二氯酚9512,4,6-三氯酚50