山東地方標(biāo)準(zhǔn)醫(yī)療污染物排放標(biāo)準(zhǔn)

1、醫(yī)療污染物排放標(biāo)準(zhǔn)Discharge standard of medical pollutants（山東省地方標(biāo)準(zhǔn)DB37/ 5962006）醫(yī)療污染物排放標(biāo)準(zhǔn)Discharge standard of medical pollutants（山東省地方標(biāo)準(zhǔn)DB37/ 5962006）2006-01-04發(fā)布                        &#

2、160;                            2006-01-10實(shí)施                   &#

3、160;                                                山東省環(huán)境保護(hù)局 

4、0;                                                 

5、0;            山東省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布前    言本標(biāo)準(zhǔn)的全部技術(shù)內(nèi)容為強(qiáng)制性。為了貫徹中華人民共和國環(huán)境保護(hù)法、中華人民共和國水污染防治法中華人民共和國海洋環(huán)境保護(hù)法、中華人民共和國大氣污染防治法、中華人民共和國固體廢物污染環(huán)境防治法、中華人民共和國傳染病防治法以及醫(yī)療廢物管理?xiàng)l例，促進(jìn)醫(yī)療廢物處置系統(tǒng)的建設(shè)和管理，加強(qiáng)醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)廢物的排放控制，保障人民身體健康，維護(hù)良好的生態(tài)環(huán)境。特制定本地方標(biāo)準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A、附錄B、附錄C、附錄D

6、為規(guī)范性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省環(huán)境保護(hù)局提出。本標(biāo)準(zhǔn)委托濟(jì)南市環(huán)境工程設(shè)計院、濟(jì)南市環(huán)保局直屬分局起草。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：張成志、高旭光、遲智香、張建國、周蓬、徐志浩本標(biāo)準(zhǔn)于2006年1月4日首次發(fā)布。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省環(huán)境保護(hù)局負(fù)責(zé)解釋。醫(yī)療污染物排放標(biāo)準(zhǔn)1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了山東省醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)醫(yī)療污水排放和醫(yī)療廢物處置（控制）的污染物限值。本標(biāo)準(zhǔn)適用于山東省醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)醫(yī)療污水排放和醫(yī)療廢物處置（控制）的管理，也適用于獸醫(yī)院的污水和醫(yī)療廢物的排放管理。2規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)

7、準(zhǔn)，然而，鼓勵根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB 3097  海水水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)GB 3838  地表水環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)GB 5085.3  危險廢物鑒別標(biāo)準(zhǔn) 浸出毒性鑒別GB 15981  消毒與滅菌效果的評價方法與標(biāo)準(zhǔn)GB 15982  醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB 18466  醫(yī)療機(jī)構(gòu)水污染物排放標(biāo)準(zhǔn)GB 18484  危險廢物焚燒污染控制標(biāo)準(zhǔn)GB 18598  危險廢物填埋污染控制標(biāo)準(zhǔn)GB 18918  城鎮(zhèn)污水處理廠污染物排放標(biāo)準(zhǔn)GB

8、19218  醫(yī)療廢物焚燒爐技術(shù)要求(試行)HJ/T 91  地表水和污水監(jiān)測技術(shù)規(guī)范醫(yī)療廢物集中處置技術(shù)規(guī)范（試行）（環(huán)發(fā)2003206號）3  術(shù)語及定義下列術(shù)語及定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。3.1醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)從事與醫(yī)療、預(yù)防、保健以及其他相關(guān)活動的，由各級衛(wèi)生行政主管部門負(fù)責(zé)管理或監(jiān)管的單位。3.2醫(yī)療污水 醫(yī)療機(jī)構(gòu)門診、病房、手術(shù)室、各類檢驗(yàn)室、病理解剖室、放射室、洗衣房、太平間等處排出的診療、生活及糞便污水。當(dāng)醫(yī)療機(jī)構(gòu)其他污水與上述污水混合排出時一律視為醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水。3.3醫(yī)療廢物醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)在醫(yī)療、預(yù)防、保健以及其他相關(guān)活動中產(chǎn)生的具有直接或者間接感染

9、性、毒性以及其他危害性的廢物。具體分類名錄依照國家危險廢物名錄和國務(wù)院衛(wèi)生行政主管部門和環(huán)境保護(hù)行政主管部門共同制定的醫(yī)療廢物分類目錄執(zhí)行。3.4醫(yī)療廢物集中處置中心具有環(huán)境保護(hù)行政主管部門頒發(fā)的醫(yī)療廢物處置資格的區(qū)域性醫(yī)療廢物集中處置單位。4  技術(shù)內(nèi)容4.1 水污染物排放標(biāo)準(zhǔn)  處理要求.1  醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)應(yīng)將傳染病房的污水與其他污水分別收集。傳染病醫(yī)院(包括設(shè)傳染病房的綜合性醫(yī)院)應(yīng)設(shè)專用化糞池，進(jìn)行預(yù)消毒處理。.2  醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)的各種特殊排水，如含重金屬廢水、含油廢水、洗印廢水等應(yīng)單獨(dú)收集，分別采取不同的預(yù)處理措施后排入醫(yī)療污水處理系統(tǒng)。.3&

10、#160; 同位素治療和診斷產(chǎn)生的放射性廢水，必須單獨(dú)收集處理。.4  醫(yī)療污水不得排入GB 3838中的、類水域和類水域的集中式生活飲用水地表水源地二級保護(hù)區(qū)、游泳區(qū)以及GB 3097中的一、二類海域。  排放要求.1  根據(jù)水污染物的來源及性質(zhì)，將水污染物控制項(xiàng)目分為必測項(xiàng)目和選測項(xiàng)目兩類。必測項(xiàng)目為環(huán)境保護(hù)行政主管部門為了保護(hù)水環(huán)境，在日常監(jiān)測過程中必須監(jiān)測的水污染物控制項(xiàng)目，主要包括影響水環(huán)境和污水處理系統(tǒng)一般處理工藝可以去除的基本控制項(xiàng)目及部分一類污染物，共15項(xiàng)。選測項(xiàng)目為地方環(huán)境保護(hù)行政主管部門根據(jù)當(dāng)?shù)蒯t(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)的污染狀況及水環(huán)境保護(hù)狀況對污水排放

11、可以選擇監(jiān)測的控制項(xiàng)目，共計4項(xiàng)。.2  必測項(xiàng)目必須執(zhí)行。選測項(xiàng)目由縣級及其以上人民政府環(huán)境保護(hù)行政主管部門根據(jù)當(dāng)?shù)蒯t(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)的具體情況和水環(huán)境質(zhì)量要求選擇控制。  標(biāo)準(zhǔn)分級根據(jù)醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)排入地表水域環(huán)境功能和保護(hù)目標(biāo)，將必測項(xiàng)目的常規(guī)污染物標(biāo)準(zhǔn)值分為一級標(biāo)準(zhǔn)、二級標(biāo)準(zhǔn)、三級標(biāo)準(zhǔn)、四級標(biāo)準(zhǔn)。一類重金屬污染物和選測項(xiàng)目不分級。.1  排入GB3838類水域中除集中式生活飲用水地表水源地二級保護(hù)區(qū)及游泳區(qū)之外的區(qū)域，執(zhí)行一級標(biāo)準(zhǔn)。.2  排入GB3838、類水域或排入GB3097中三類海域以及排入未設(shè)置城鎮(zhèn)污水處理廠的城鎮(zhèn)污水排放系統(tǒng)的醫(yī)療污水，執(zhí)行二

12、級標(biāo)準(zhǔn)。.3  排入設(shè)置城鎮(zhèn)污水處理廠的城鎮(zhèn)污水排放系統(tǒng)的醫(yī)療污水，執(zhí)行三級標(biāo)準(zhǔn)。.4  床位小于20床以及不設(shè)床位的醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)產(chǎn)生的醫(yī)療污水，應(yīng)當(dāng)設(shè)消毒處理設(shè)施，執(zhí)行四級標(biāo)準(zhǔn)。.5  傳染病爆發(fā)期間，應(yīng)當(dāng)根據(jù)環(huán)境保護(hù)行政主管部門和醫(yī)療衛(wèi)生行政主管部門的要求執(zhí)行應(yīng)急處置措施要求。  標(biāo)準(zhǔn)值.1  醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)水污染物排放，必測項(xiàng)目執(zhí)行表1和表2的規(guī)定。.2  選測項(xiàng)目按表3的規(guī)定執(zhí)行。 表1 一類污染物最高允許排放濃度（日均值）         

13、;  單位為毫克每升 序  號 污    染    物 最高允許排放濃度 1 總汞 0.05 2 總砷 0.5          表2 基本控制項(xiàng)目最高允許排放濃度（日均值）          單位為毫克每升 序號基本控制項(xiàng)目 一級標(biāo)準(zhǔn)二級標(biāo)準(zhǔn)三級標(biāo)準(zhǔn)四級標(biāo)準(zhǔn)1 糞大腸菌群數(shù)（MPN/L） 50 100 500 5000 2 腸道致病菌

14、不得檢出不得檢出 3 腸道病毒 不得檢出不得檢出 4 結(jié)核桿菌 不得檢出 不得檢出 5 化學(xué)需氧量（CODCr） 40 60 120 6 生化需氧量（BOD5）10 20 30 7 懸浮物（SS）a 10(5) 20 60 8 動植物油 1.0 5 15 9 揮發(fā)酚 0.1 0.5 0.5 10氨氮b 5(8)15(20) 25(30) 11 磷酸鹽(以P計) 0.5 0.5 1.0 12 余氯c 0.5 0.5 8 13pH 69 a  括號內(nèi)為用于沖洗地面及洗車用水水質(zhì)指標(biāo)。 b  括號外數(shù)值為水溫12時的控制指標(biāo)，括號內(nèi)數(shù)值為水溫12時的控制指標(biāo)。 c  消

15、毒接觸池接觸時間1h，接觸池出口總余氯3mg/l10mg/l。    表3 選測項(xiàng)目最高允許排放濃度（日均值）               單位為毫克每升 序  號 污    染    物 最高允許排放濃度 1 氟化物 10 2 氯化物 250 3 甲醛類1.0 4 總有機(jī)碳(TOC) 30 .3  污水處理過程中產(chǎn)生的廢氣按照GB18466執(zhí)行  

16、;取樣與監(jiān)測.1  水質(zhì)取樣在污水處理站處理工藝末端排放口。其中一類污染物的取樣按照HJ/T 91執(zhí)行。.2  檢測取樣頻率為至少每2h 一次，取24h 混合樣，以日均值計。 .3  監(jiān)測分析方法按表4 或國家環(huán)境保護(hù)總局認(rèn)定的替代方法、等效方法執(zhí)行。 表4 水污染物監(jiān)測分析方法 序號控制項(xiàng)目測定方法 測定下限(mg/l) 方法來源 1 總汞 冷原子吸收分光光度法 0.0001 GB7468 雙硫腙分光光度法 0.002 GB74692 總砷 二乙基二硫代氨基甲酸銀分光光度法 0.007 GB7485 3 糞大腸菌群數(shù)多管發(fā)酵法 - 附錄A 4 沙門氏菌 - -

17、附錄B 5 志賀氏菌 - - 附錄C 6 結(jié)核桿菌 - - 附錄D 7化學(xué)需氧量（CODCr） 重鉻酸鹽法 30 GB11914 8 BOD5 稀釋與接種法 2 GB7488 微生物傳感器快速測定法 1 HJ/T86 9 懸浮物（SS）重量法 - GB11901 10 動植物油 紅外分光光度法 0.1 GB/T1648811 揮發(fā)酚 4-氨基安替比林分光光度法 0.002 GB7490 12 總氮 （以N 計）堿性過硫酸鉀-消解紫外分光光度法 0.05 GB11894 13 磷酸鹽(以P 計) 鉬酸銨分光光度法 0.01 GB11893 14 pH 玻璃電極法 - GB6920 15 F- 離

18、子選擇電極法 0.05 GB7484 茜素磺酸鋯目視比色法 - GB7482 氟試劑分光光度法 - GB7483 16 氯化物 硝酸銀滴定法 - GB11896 17 甲醛乙酰丙酮分光光度法0.05 GB13197 18 TOC 非紅外吸收法 0.5 GB13183 19余氯N,N-二乙基-1,4-苯二胺滴定法 - GB11897 N,N-二乙基-1,4-苯二胺分光光度法 - GB11898 4.2  醫(yī)療廢物控制標(biāo)準(zhǔn)醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)不得將醫(yī)療廢物隨意棄置。  醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)應(yīng)將醫(yī)療廢物與生活垃圾分開收集；醫(yī)療廢物應(yīng)進(jìn)行無害化集中處置，生活垃圾按城市生活垃圾處理原則進(jìn)行處理。 &

19、#160;醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)應(yīng)對醫(yī)療廢物進(jìn)行分類，并采用醫(yī)療廢物集中處置技術(shù)規(guī)范（試行）中要求的容器、轉(zhuǎn)運(yùn)器械進(jìn)行包裝、轉(zhuǎn)運(yùn)，包裝、轉(zhuǎn)運(yùn)期間應(yīng)注意防護(hù)措施。 醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)應(yīng)設(shè)置醫(yī)療廢物的暫存場所。具有100張床位以上的醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)應(yīng)建立專門的醫(yī)療廢物暫存庫房，暫存庫房必須滿足醫(yī)療廢物集中處置技術(shù)規(guī)范（試行）中關(guān)于暫存庫房的設(shè)計要求；具有100張床位以下的醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)及門診、部、所應(yīng)設(shè)立專門的醫(yī)療廢物暫存場所，并滿足醫(yī)療廢物集中處置技術(shù)規(guī)范（試行）中暫存場所的要求。  醫(yī)療廢物可以根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r采用表5的處置方法進(jìn)行處置。 表5 醫(yī)療廢物處置方法 序號醫(yī)療廢物種類 醫(yī)療廢物處置方法 備注 1

20、病理性廢物（包括人體組織、死胎、器官、肢體和動物尸體、血液、體液） 火化或焚燒 按國家有關(guān)法律法規(guī)處置 2 感染性廢物（包括傳染病人手術(shù)或尸解后的廢棄物，如污染的材料和儀器；來自傳染病房的廢棄物，如排泄物、手術(shù)或感染傷口的敷料、嚴(yán)重污染的衣物；傳染病人血透析中產(chǎn)生的廢棄物；實(shí)驗(yàn)室感染的動物；傳染病人或動物接觸過的任何其他設(shè)備和材料；實(shí)驗(yàn)室所用的菌落及病原株培養(yǎng)基和保菌液；使用過的一次性注射器、輸液器、輸血器等廢棄物） 焚燒或消毒 3 鋒利物（銳器）（包括針頭、手術(shù)刀、解剖刀、針管、手術(shù)鋸、玻璃制品等易對人體造成損傷的廢物） 焚燒 4 藥物性廢物（包括過期、被淘汰、壓碎或污染的藥品、疫苗、血清）

21、 焚燒 5 遺傳病毒性廢棄物（包括已明確的抑制細(xì)胞的藥物，化學(xué)或放射治療病人的嘔吐物、尿或糞便。如苯、環(huán)孢霉素、環(huán)磷酰胺等）焚燒 對環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺、硫酸長春新堿等可采用化學(xué)降解法或封存或使之自動失效6 化學(xué)性廢棄物（包括在診斷、試驗(yàn)、清潔、管理、消毒過程中產(chǎn)生的，具有毒性、腐蝕性、易燃性、反應(yīng)性或遺傳毒性的物質(zhì)。如甲醛、攝影用劑、有機(jī)化合物等） 焚燒或化學(xué)處理 對于一般的化學(xué)廢棄物，如糖、氨基酸和特定的鹽類可按城市生活垃圾進(jìn)行處置或排入下水道。 7 低放射性廢物（包括診斷或治療用的棉簽、注射器、輸液器等）焚燒 8 污水處理過程中產(chǎn)生的污泥 焚燒   醫(yī)療廢物進(jìn)行無害化處置的技術(shù)

22、要求.1  采用高溫?zé)崽幚砑夹g(shù)要求按GB19218執(zhí)行。.2  高溫蒸汽滅菌按GB15982執(zhí)行.3  其他處理技術(shù)采用微波處理法、化學(xué)消毒法、電熱去活技術(shù)（EDT）等其它經(jīng)環(huán)境保護(hù)行政主管部門及衛(wèi)生行政主管部門認(rèn)可的醫(yī)療廢物處理技術(shù)時，污染物的排放應(yīng)當(dāng)達(dá)到環(huán)境保護(hù)行政主管部門及衛(wèi)生行政主管部門的要求。 無害化處置后的醫(yī)療廢物應(yīng)達(dá)到的排放標(biāo)準(zhǔn).1  采用焚燒法處置醫(yī)療廢物，其焚燒爐排放氣體的排放限值不應(yīng)高于GB18484規(guī)定的限值。檢測方法按GB18484執(zhí)行。.2  采用焚燒法處置醫(yī)療廢物，其焚燒殘留物中的含菌量應(yīng)為零。.3

23、0; 醫(yī)療廢物焚燒過程中除塵設(shè)備收集到的飛灰必須密閉收集貯存，并按照GB18598固化填埋處理；焚燒產(chǎn)生的爐渣可以送生活垃圾填埋場填埋處理；其他煙氣凈化裝置產(chǎn)生的固體廢物按GB 5085.3進(jìn)行鑒別，并確定是否屬于危險廢物，如屬于危險廢物，按危險廢物處置，否則可以送生活垃圾填埋場填埋處理，無法進(jìn)行鑒別實(shí)驗(yàn)的，按危險廢物處置。.4  采用高溫蒸汽滅菌法處置醫(yī)療廢物產(chǎn)生的固體廢物將其粉碎后按城市生活垃圾進(jìn)行處置。.5  采用高溫蒸汽滅菌法處置醫(yī)療廢物，生物指示劑應(yīng)選擇耐熱的嗜熱性脂肪桿菌芽孢(Bacillus stearothermophilus spores)，檢測方法按GB

24、 15981執(zhí)行。.6  每批醫(yī)療廢物進(jìn)行高溫蒸汽滅菌處置需用化學(xué)檢測方法對滅菌效果進(jìn)行檢測，可采用化學(xué)指示管（卡）檢測方法或化學(xué)指示膠帶檢測法，檢測需將化學(xué)指示管（卡）放入滅菌室內(nèi)滅菌效果最難保證的空間位置，或?qū)⒒瘜W(xué)指示膠帶粘貼于每一待滅菌物品包外，經(jīng)一個滅菌周期后，觀察所放置的指示管(卡)或膠帶的性狀或顏色，如果均變至規(guī)定的條件，判為滅菌合格；若未達(dá)到規(guī)定的條件，則滅菌過程不合格。5  標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)施與監(jiān)督本標(biāo)準(zhǔn)由縣級以上人民政府環(huán)境保護(hù)行政主管部門負(fù)責(zé)監(jiān)督實(shí)施。 附錄A（規(guī)范性附錄）醫(yī)療污水中糞大腸菌群的檢驗(yàn)方法A.1儀器和設(shè)備A.1.1高壓蒸汽滅菌器A.1.2

25、干燥滅菌箱A.1.3培養(yǎng)箱：37A.1.4恒溫水浴箱A.1.5電爐A.1.6天平A.1.7滅菌平皿A.1.8滅菌刻度吸管A.1.9酒精燈A.2培養(yǎng)基和試劑A.2.1乳糖膽鹽培養(yǎng)液A.2.1.1成分蛋白胨                       20g豬膽鹽（或牛、羊膽鹽）       5g乳糖  

26、;                       5g0.4溴甲酚紫水溶液          2.5mL蒸餾水               &

27、#160;       1000mLA.2.1.2制法將蛋白胨、豬膽鹽及乳糖溶解于1000mL 蒸餾水中，調(diào)整pH 到7.4，加入指示劑，充分混勻，分裝于內(nèi)有倒管的試管中。115下滅菌20min。貯存于冷暗處備用。A.2.2三倍濃度乳糖膽鹽培養(yǎng)液A.2.2.1成分蛋白胨                       60

28、g豬膽鹽（或牛、羊膽鹽）       15g乳糖                         15g0.4溴甲酚紫水溶液          7.5mL蒸餾水    &

29、#160;                  1000mLA.2.2.2制法制法同附錄A.2.1.2。A.2.3伊紅美蘭培養(yǎng)基（EMB 培養(yǎng)基）A.2.3.1成分蛋白胨                      

30、;  10g乳糖                          10g磷酸氫二鉀                    2g瓊脂 

31、60;                        20g2伊紅水溶液                 20mL0.5美藍(lán)水溶液      

32、0;        13mL蒸餾水                         1000mLA.2.3.2制法將瓊脂加到900mL 蒸餾水中，加熱溶解，然后加入磷酸氫二鉀和蛋白胨，混勻使溶解，再加入蒸餾水補(bǔ)足至1000mL，調(diào)整pH 至7.27.4。趁熱用脫脂棉和砂布過濾，再加入乳糖，

33、混勻，定量分裝于燒瓶內(nèi)，115滅菌20min。作為儲備培養(yǎng)基貯存于冷暗處備用。臨用時，加熱融化儲備培養(yǎng)基，待冷至60左右，根據(jù)燒瓶內(nèi)培養(yǎng)基的容量，加入一定量的已滅菌的2伊紅水溶液和0.5美藍(lán)水溶液，充分搖勻（防止產(chǎn)生氣泡）。傾注平皿備用。A.2.4乳糖蛋白胨培養(yǎng)液A.2.4.1成分蛋白胨                          10g牛肉

34、膏                          3g乳糖                        

35、    5g氯化鈉                          5g1.6溴甲酚紫乙醇溶液           1mL蒸餾水       

36、60;                  1000mLA.2.4.2制法將蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化鈉加熱溶解于1000mL 蒸餾水中，調(diào)整pH 到7.27.4，加入1.6溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混勻，分裝于內(nèi)有倒管的試管中。115下滅菌20min。貯存于冷暗處備用。A.2.5革蘭氏染色液A.2.5.1結(jié)晶紫染色液結(jié)晶紫        

37、0;                 1g95乙醇溶液                    20mL1草酸銨水溶液           &

38、#160;     1000mL將結(jié)晶紫溶于乙醇中，然后與草酸銨水溶液混合。A.2.5.2革蘭氏碘液碘                              1g碘化鉀        &

39、#160;                 2g蒸餾水                          300mL將碘與碘化鉀混合，加入蒸餾水少許，充分搖勻，待完全溶解，再加入蒸餾水至30

40、0mL。A.2.5.3脫色液95乙醇A.2.5.4沙黃復(fù)染液 沙黃                            1g95乙醇                &#

41、160;       2g蒸餾水                          90mL將沙黃溶于95乙醇中，然后用蒸餾水稀釋。A.2.6染色法染色的基本步驟為：a)  涂片：在載玻片上滴加一滴生理鹽水，用滅菌的接種環(huán)取菌落少許，與生理鹽水混勻，涂布成薄膜；b） 干燥：在室溫

42、中使自然干燥；c） 固定：將涂片迅速通過火焰23 次，以載玻片反面接觸皮膚，熱而不燙為度；d） 染色：滴加結(jié)晶紫染色液，染色1min，水洗；e） 媒染：滴加革蘭氏碘液，作用1min，水洗；f） 脫色：滴加95乙醇脫色，約30s，水洗；g） 復(fù)染：滴加復(fù)染液，復(fù)染1min，水洗。革蘭氏陽性菌染色后呈紫色，革蘭氏陰性菌染色后呈紅色。亦可用1：10 稀釋的石炭酸復(fù)紅染色液作復(fù)染劑，復(fù)染時間為10s。A.3檢驗(yàn)程序檢驗(yàn)程序見圖A.1。A.4操作步驟A.4.1樣品準(zhǔn)備污水樣品應(yīng)至少取200mL，使用前應(yīng)充分混勻。若樣品為經(jīng)過氯消毒的污水，應(yīng)在采樣后立即用5硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯。根據(jù)預(yù)計的污水樣品中

43、糞大腸菌群數(shù)確定污水樣品接種量。糞大腸菌群數(shù)量相對較少的接種量一般為10mL、1mL、0.1mL。糞大腸菌群數(shù)較多時接種量為1mL、0.1mL、0.01mL 或0.1mL、0.01mL、0.001mL 等。接種量少于1mL 時，水樣應(yīng)制成稀釋樣品后供發(fā)酵試驗(yàn)使用。接種量為0.1mL、0.01mL時，取稀釋比分別為1:10、1:100。其它接種量的稀釋比依此類推。1:10 稀釋樣品的制作方法為：吸取1mL 水樣，注入到盛有9mL 滅菌水的試管中，混勻，制成1:10 稀釋樣品。因此，取1mL1:10 稀釋樣品，等于取0.1mL 污水樣品。其它稀釋比的稀釋樣品同法制作。A.4.2發(fā)酵試驗(yàn)將樣品接種于

44、裝有乳糖膽鹽培養(yǎng)液的試管（內(nèi)有小倒管）中，44培養(yǎng)24h。樣品接種體積以及管內(nèi)乳糖膽鹽培養(yǎng)液的濃度與體積根據(jù)以下條件確定：取三個接種量、每個接種量的樣品分別接種于5 個試管內(nèi)，共需15 個試管。試管內(nèi)乳糖膽鹽培養(yǎng)液的濃度與體積應(yīng)根據(jù)接種量確定。若接種量為10mL，吸取10mL樣品接種于裝有5mL 三倍濃度乳糖膽鹽培養(yǎng)液的試管內(nèi)；若接種量為1mL 時，吸取1mL 樣品接種于裝有10mL 普通濃度乳糖膽鹽培養(yǎng)液的試管內(nèi)；若接種量少于1mL 時，吸取1mL 稀釋樣品接種于裝有10mL 普通濃度乳糖膽鹽培養(yǎng)液的試管內(nèi)。A.4.3平板分離大腸桿菌分解乳糖產(chǎn)酸時培養(yǎng)液變色、產(chǎn)氣時小倒管內(nèi)出現(xiàn)氣泡。經(jīng)24h

45、 培養(yǎng)后，將產(chǎn)酸的試管內(nèi)培養(yǎng)液分別劃線接種于EMB 培養(yǎng)基上。置于37培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)18h24h。A.4.4鑒定挑選可疑糞大腸菌群菌落，進(jìn)行革蘭氏染色和鏡檢?？梢删溆校篴） 深紫黑色，具有金屬光澤的菌落；b） 紫黑色，不帶或略帶金屑光澤的菌落；c） 淡紫紅色，中心色較深的菌落。上述涂片鏡檢的菌落如為革蘭氏陰性無芽孢桿菌，則挑取上述典型菌落13個接種于盛有5mL 乳糖蛋白胨培養(yǎng)液倒管和倒管的試管內(nèi)，置于44培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。產(chǎn)酸產(chǎn)氣試管為糞大腸菌群陽性管。A.5計數(shù)根據(jù)證實(shí)有糞大腸菌群存在的陽性管數(shù)，查表A.1可得100mL 污水中糞大腸菌群MPN 值。由于表A.1是按一定的三個10 倍濃度

46、差接種量設(shè)計的（接種量為10mL、1mL和0.1mL），當(dāng)采用其他三個10 倍濃度差接種量時，需要修正表內(nèi)MPN 值，具體方法如下：表內(nèi)所列污水最大接種量增加10 倍時表內(nèi)MPN 值相應(yīng)降低10 倍；污水最大接種量減少10 倍時表內(nèi)MPN 值相應(yīng)增加10 倍。如污水接種量改為1mL、0.1mL 和0.01mL時，表A內(nèi)MPN 值相應(yīng)增加10 倍。其它的三個10 倍濃度差接種量的MPN 值相應(yīng)類推。由于表A.1內(nèi)MPN 值的單位為每100mL 污水樣品中MPN 值，而污水以1L 為報告單位，因此需將查表A.1得到的MPN 值乘上10，換算成1L 污水樣品中的MPN 值。表A.1  污水

47、中糞大腸菌群最可能數(shù)（MPN）檢索表 （污水樣品接種量為5份10ml水樣，5份1ml水樣和0.1ml水樣） 陽性管數(shù) 每 陽性管數(shù) 每 陽性管數(shù) 每 接種100ml水樣 接種10ml水樣 接種0.1ml水樣 100ml 水樣中MPN 接種100ml水樣 接種10ml水樣 接種0.1ml水樣 100ml 水樣中MPN 接種100ml水樣 接種10ml水樣 接種0.1ml水樣 100ml 水樣中MPN 0 0 0 0 2 0 0 5 4 0 0 13 0 0 1 2 2 0 1 7 4 0 1 17 0 0 2 4 2 0 2 9 4 0 2 21 0 0 3 5 2 0 3 12 4 0 3 2

48、5 0 0 4 7 2 0 4 14 4 0 4 30 0 0 5 9 2 0 5 16 4 0 5 36 0 1 0 2 2 1 0 7 4 1 0 17 0 1 1 4 2 1 1 9 4 1 1 21 0 1 2 5 2 1 2 12 4 1 2 26 表A.1（續(xù)） 陽性管數(shù) 每 陽性管數(shù) 每 陽性管數(shù) 每 接種100ml水樣 接種10ml水樣 接種0.1ml水樣 100ml 水樣中MPN 接種100ml水樣 接種10ml水樣 接種0.1ml水樣 100ml 水樣中MPN 接種100ml水樣 接種10ml水樣 接種0.1ml水樣 100ml 水樣中MPN 0 1 3 7 2 1 3 1

49、4 4 1 3 31 0 1 4 9 2 1 4 17 4 1 4 36 0 1 5 11 2 1 5 19 4 1 5 42 0 2 0 4 2 2 0 9 4 2 0 22 0 2 1 6 2 2 1 12 4 2 1 26 0 2 2 7 2 2 2 14 4 2 2 32 0 2 3 9 2 2 3 17 4 2 3 38 0 2 4 11 2 2 4 19 4 2 4 44 0 2 5 13 2 2 5 22 4 2 5 50 0 3 0 6 2 3 0 12 4 3 0 27 0 3 1 7 2 3 1 14 4 3 1 33 0 3 2 9 2 3 2 17 4 3 2 39 0

50、 3 3 11 2 3 3 20 4 3 3 45 0 3 4 13 2 3 4 22 4 3 4 52 0 3 5 15 2 3 5 25 4 3 5 59 0 4 0 8 2 4 0 15 4 4 0 34 0 4 1 9 2 4 1 17 4 4 1 40 0 4 2 11 2 4 2 20 4 4 2 47 0 4 3 13 2 4 3 23 4 4 3 54 0 4 4 15 2 4 4 25 4 4 4 62 0 4 5 17 2 4 5 28 4 4 5 69 0 5 0 9 2 5 0 17 4 5 0 41 0 5 1 11 2 5 1 20 4 5 1 48 0 5 2 1

51、3 2 5 2 23 4 5 2 56 0 5 3 15 2 5 3 26 4 5 3 64 0 5 4 17 2 5 4 29 4 5 4 72 0 5 5 19 2 5 5 32 4 5 5 81 1 0 0 2 3 0 0 8 5 0 0 23 1 0 1 4 3 0 1 11 5 0 1 31 1 0 2 6 3 0 2 13 5 0 2 43 1 0 3 8 3 0 3 16 5 0 3 58 1 0 4 10 3 0 4 20 5 0 4 76 1 0 5 12 3 0 5 23 5 0 5 95 1 1 0 4 3 1 0 11 5 1 0 33 1 1 1 6 3 1 1 14

52、 5 1 1 46 1 1 2 8 3 1 2 17 5 1 2 63 1 1 3 10 3 1 3 20 5 1 3 84 表A.1（續(xù)） 陽性管數(shù) 每 陽性管數(shù) 每 陽性管數(shù) 每 接種100ml水樣 接種10ml水樣 接種0.1ml水樣 100ml 水樣中MPN 接種100ml水樣 接種10ml水樣 接種0.1ml水樣 100ml 水樣中MPN 接種100ml水樣 接種10ml水樣 接種0.1ml水樣 100ml 水樣中MPN 1 1 4 12 3 1 4 23 5 1 4 110 1 1 5 14 3 1 5 27 5 1 5 130 1 2 0 6 3 2 0 14 5 2 0 49

53、1 2 1 8 3 2 1 17 5 2 1 70 1 2 2 10 3 2 2 20 5 2 2 94 1 2 3 12 3 2 3 24 5 2 3 120 1 2 4 15 3 2 4 27 5 2 4 150 1 2 5 17 3 2 5 31 5 2 5 180 1 3 0 8 3 3 0 17 5 3 0 79 1 3 1 10 3 3 1 21 5 3 1 110 1 3 2 12 3 3 2 24 5 3 2 140 1 3 3 15 3 3 3 28 5 3 3 180 1 3 4 17 3 3 4 32 5 3 4 210 1 3 5 19 3 3 5 36 5 3 5 2

54、50 1 4 0 11 3 4 0 21 5 4 0 130 1 4 1 13 3 4 1 24 5 4 1 170 1 4 2 15 3 4 2 28 5 4 2 220 1 4 3 17 3 4 3 32 5 4 3 280 1 4 4 19 3 4 4 36 5 4 4 350 1 4 5 22 3 4 5 40 5 4 5 430 1 5 0 13 3 5 0 25 5 5 0 240 1 5 1 15 3 5 1 29 5 5 1 350 1 5 2 17 3 5 2 32 5 5 2 540 1 5 3 19 3 5 3 37 5 5 3 920 1 5 4 22 3 5 4 41

55、 5 5 4 1600 1 5 5 24 3 5 5 45 5 5 5 >1600附錄B (規(guī)范性附錄) 醫(yī)療污水中沙門氏菌的檢驗(yàn)B.1儀器和設(shè)備B.1.1高壓蒸汽滅菌器B.1.2干燥滅菌箱B.1.3培養(yǎng)箱B.1.4恒溫水浴箱B.1.5電爐B.1.6天平B.1.7滅菌平皿B.1.8滅菌刻度吸管B.1.9酒精燈B.2培養(yǎng)基和試劑B.2.1亞硒酸鹽增菌液(SF 增菌液)B.2.1.1成分胰蛋白胨(或多價胨)              

56、           10g磷酸氫二鈉(Na2HPO3)                        16g磷酸二氫鈉(NaH2PO3)           

57、             2.5g乳 糖                                    

58、0; 4g亞硒酸氫鈉                                 4g蒸餾水               &#

59、160;                     1000mLB.2.1.2制法除亞硒酸氫鈉外，將以上各成分放入蒸餾水中，加熱溶化。再加入亞硒酸氫鈉，待完全溶解后，調(diào)整pH 到7.07.1，分裝于三角燒杯內(nèi)。121下滅菌15min 備用。B.2.2二倍濃度亞硒酸鹽增菌液(二倍濃度SF 增菌液)B.2.2.1成分除蒸餾水改為500mL 外，其它成分同附錄B.2.1.1。B.2.2.2制法制法同附錄B

60、.2.1.2。B.2.3SS 培養(yǎng)基B.2.3.1基礎(chǔ)培養(yǎng)基B.2.3.1.1成分牛肉膏                                      5g示胨     

61、;                                   5g三號膽鹽              

62、0;                     3.5g瓊脂                            

63、60;           17g蒸餾水                                      1000mLB

64、.2.3.1.2制法將牛肉膏、示胨和膽鹽溶解于400mL 蒸餾水中。將瓊脂加到600mL 蒸餾水中，煮沸使其溶解。再將二者混合，121下滅菌15min，保存?zhèn)溆?。B.2.3.2完成培養(yǎng)基B.2.3.2.1成分基礎(chǔ)培養(yǎng)基                           1000mL乳糖    &#

65、160;                            10g檸檬酸鈉                     

66、        8.5g硫代硫酸鈉                           8.5g10%檸檬酸鐵溶液             

67、         10mL1%中性紅溶液                         2.5mL0.1%煌綠溶液             

68、0;           0.33mLB.2.3.2.2制法加熱溶化基礎(chǔ)培養(yǎng)基，按比例加入除中性紅和煌綠溶液以外的各成分，充分混合均勻，調(diào)整pH 到7.0，加入中性紅和煌綠溶液，傾注平板。制好的培養(yǎng)基宜當(dāng)日使用，或保存于冰箱內(nèi)于18h 內(nèi)使用?；途G溶液配好后應(yīng)在10天以內(nèi)使用。B.2.4亞硫酸鉍瓊脂培養(yǎng)基（BS 培養(yǎng)基）B.2.4.1基礎(chǔ)培養(yǎng)基B.2.4.1.1成分蛋白胨          

69、60;                     10g牛肉膏                            &#

70、160;   5g氯化鈉                                5g瓊脂              

71、60;                   20g蒸餾水                              &#

72、160; 1000mLB.2.4.1.2制法加熱溶解各成分，按每份100mL 的量分裝于250mL 三角瓶中，121下滅菌20min 備用。B.2.4.2亞硫酸鉍貯備液B.2.4.2.1成分檸檬酸鉍銨                            2g亞硫酸鈉     &

73、#160;                        20g磷酸氯二鈉                        

74、0;   10g葡萄糖                                10g蒸餾水              &#

75、160;                 200mLB.2.4.2.2制法將檸檬酸鉍銨溶解于50mL 沸水中，同時將壓硫酸鈉溶解于100mL 沸水中，混合兩液并煮沸3min，趁熱加入磷酸氯二鈉攪拌至溶解。冷卻后，加入剩余的50mL 葡萄糖水溶液，貯存于冰箱中。B.2.4.3檸檬酸鐵煌綠貯備液B.2.4.3.1成分檸檬酸鐵          

76、;                    2g煌綠（1水溶液）                     25mL蒸餾水       

77、0;                        200mLB.2.4.3.2制法將上述成分溶解于水中，盛于已滅菌的玻璃瓶內(nèi)，貯存于冰箱。B.2.4.4完成培養(yǎng)基B.2.4.4.1成分基礎(chǔ)培養(yǎng)基              

78、60;             100mL亞硫酸鉍貯備液                        20mL檸檬酸鐵煌綠貯備液          

79、          4.5mLB.2.4.4.2制法加熱融化基礎(chǔ)培養(yǎng)基并冷卻至50，同時分別加熱亞硫酸鉍貯備液和檸檬酸鐵煌綠貯備液至50。在無菌操作下將后者加入到前者去，充分混合，無菌傾入已滅菌的培養(yǎng)皿中。B.2.5三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基（TSI 培養(yǎng)基）B.2.5.1成分蛋白胨                   

80、0;            20g牛肉膏                                5g乳糖     

81、0;                            10g蔗糖                     

82、0;            10g葡萄糖                                1g氯化鈉     

83、60;                          5g硫酸亞鐵銨                       &

84、#160;    0.2g硫代硫酸鈉                            0.2g瓊脂                &#

85、160;                 12g酚紅                                &#

86、160; 0.025g蒸餾水                                1000mLB.2.5.2制法將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸餾水中，調(diào)pH 到7.4。加入瓊脂，加熱煮沸，再加入0.2%酚紅水溶液12.5mL，搖勻。分裝試管，裝量宜多些，以便得到較高的底層。1

87、21下滅菌15min。放置高層斜面?zhèn)溆?。B.2.6沙門氏菌診斷血清B.3檢驗(yàn)程序檢驗(yàn)程序見圖B.1。 B.4操作步驟B.4.1樣品處理和增菌取200mL 污水，用滅菌濾膜進(jìn)行抽濾。用100mL 二倍濃度SF 增菌液把濾膜上截留的雜質(zhì)洗脫到滅菌三角燒瓶內(nèi)，充公搖勻，置于37恒溫培養(yǎng)箱，增菌培養(yǎng)1224h。若樣品為經(jīng)過氯消毒的污水，應(yīng)在采樣后立即用5硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯。B.4.2平板分離取上述增菌培養(yǎng)液，分別接種于SS 培養(yǎng)基平板和BS 培養(yǎng)基平板，置于37培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)24 h48h。觀察各平板上生長的菌落形態(tài)。挑取在SS 培養(yǎng)基平板上呈無色透明或中間有黑心，直徑12mm 的菌落；挑取在BS 培養(yǎng)基平板上呈黑色的菌落或灰綠色的可疑腸道病原菌菌落。每個平板最少挑取5 個菌落，接種于TSI 培養(yǎng)基中，置于37培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)18h24h。B.4.3鑒定B.4.3.1血清學(xué)試驗(yàn)在TSI 培養(yǎng)基中，如不發(fā)酵乳糖，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣或只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，一般產(chǎn)生硫化氫，有動力者，先與沙門氏A-F 群O多價血清作玻璃片凝集，凡與多價O血清凝集者，再與O因子血清凝集，以確定所屬群別，然后用H 因子血清，確定血清型。雙向菌株應(yīng)證實(shí)兩相的H 抗原，有Vi 抗原的菌型(傷寒和丙型副傷寒沙門氏