去勢仔豬同時(shí)免疫豬瘟、口蹄疫、藍(lán)耳病疫苗的效果研究.docx

1、-'去勢仔豬同時(shí)免疫豬瘟、口蹄疫、王丈禮，楊利，賈元超，龍杰，黃麗，何永鋼（四川省梓潼縣畜牧獸醫(yī)局，四川梓波622150）中圖分類號(hào):S852.52文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B文章編號(hào)：1001-8964（2013）07-0027-03摘要：本試驗(yàn)隨機(jī)選擇30日齡健康仔豬30頭，去勢后分成3組：1組分別同時(shí)接種CSF、FMD疫苗，2組分別同時(shí)接種CSF、FMD、PRRS疫苗，對(duì)照組不免疫任何疫苗，觀察免疫副反應(yīng)。然后在免疫后30、60、90、120d時(shí)采血，用ELISA抗體試劑盒檢測杭體動(dòng)態(tài)效價(jià)。結(jié)果顯示：2組和1組的免疫副反應(yīng)較小可控；免疫后30120d,FMD和PRRS陽性抗體的合格率都超過70

2、%；免疫后30d,CSF陽性杭體合格率能達(dá)到70%,60d時(shí)CSF抗體合格率只有60%,90d及以后已無CSF陽枝杭體。關(guān)鍵詞：豬瘟；豬口蹄疫；豬繁殖與呼吸綜合征；抗體效價(jià).StudytheImmuneEffectofInjectingCSF,FMDandPRRSVaccinesattheSameTimeonCastratedPigletsWANGWen-1i,YANGLi,JIAYuan-chao,etal.(AnimalHusbandryandVeterinaryBureauofZitongCounty,SichuanZitong622150,China)Abstract:Thetests

3、elected30pigletsat30-days-old,whichwererandomlydividedintothreegroupsaftercastrating.ThefirstgroupwereimmunizedCSF,FMDvaccine?thesecondgroupwereimmunizedCSF,FMD»PRRSvaccineatthesametime,andthecontrolgroupwereimmunizednothing,observingtheimmunesidereactionsofthesegroups.After30,60,90,120days,the

4、serumantibodiesdynamictiterweredetectedbyELISAantibodytestkit.Theresultsasfollowing：comparingwiththecontrolgroup,boththefirstandsecondgroup'simmunesidereactionsweresmallandcontrollable,FMDandPRRSantibodies'positiveratesweremorethan70%atthe30120d,afterimmunization30d,CSFantibodies*positiverat

5、ereached70%,theCSFantibodies'positiveratewasonly60%after60d,therewasnotpositiveCSFantibodyafter90d.Keywords：CSF:FMD；PRRS；Antibodytiter1試驗(yàn)用疫苗和器材收荷日期：2血3-05-】廠.作者簡介：王文禮（1964-）,M,四川樺浚人.碩士研完生，主要從事動(dòng)物疫痛覆防工作。1.1豬瘟活疫苗（脾淋源）云南生物制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為20120710o豬口蹄疫0型合成肽疫苗（多肽2570+7309）上海申聯(lián)生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為20120604c1.2 高致

6、病性豬繁殖與呼吸蹤合征活疫苗（JXA1-R株）齊魯動(dòng)物保健品有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為1206010-2。1.4試驗(yàn)用若材免疫接種用器具,318mc型醯標(biāo)儀，移液器、TL-2000MM-1微振器,TDL80-2B離心機(jī),"93自動(dòng)雙重純水蒸餡器，SKP-電熱恒溫培養(yǎng)箱。2試驗(yàn)用抗體檢測試劑豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）病毒ELISA抗體檢測試拘盒武漢科前動(dòng)物生物制品有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號(hào)為121213。2.1 豬O型口蹄疫（FMD）病毒ELISA抗體檢測試劑盒武漢科前動(dòng)物生物制品有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號(hào)為121208o豬痕（CSF）病毒ELISA抗體檢洲試劑金武漢科前動(dòng)物生物制品有限責(zé)任公司

7、生產(chǎn)，批號(hào)為121216o3試驗(yàn)仔豬分組和檢測方法3.1試豬選擇在四川梓潼縣某養(yǎng)殖場隨機(jī)選擇已斷奶的300齡未免疫過任何疫苗的DLY仔豬30頭，由專人飼養(yǎng)和管理，飼喂相同品牌全價(jià)飼料，自由飲水。試驗(yàn)前對(duì)所選中的豬進(jìn)行全面健康檢查：體重在1012kg/頭,呼吸為15-18次/min,脈搏為65-78次/min,體溫在38.839.3T,食欲正常，精神狀態(tài)良好；經(jīng)耳靜脈采血檢測,CSF、FMD、PRRS病毒抗體均呈陰性。3.2試豬分姐將這30頭豬隨機(jī)分成3個(gè)試驗(yàn)組：對(duì)照組10頭，在豬去勢的同時(shí)在其左右側(cè)頸部和臀部分別肌注生理鹽水2mL；第1組10頭，在豬去勢的同時(shí)于其左右側(cè)頸部分別肌注CSF活疫苗

8、2mL和0型FMD合成肽疫苗2mL；第2組10頭，在豬去勢的同時(shí)于其左右側(cè)頸部和臀部分別肌注CSF活疫苗2mL、O型FMD合成肽疫苗2mL、PRRS活疫苗1頭份。3.3方法分別在免疫后30、60、9（）、120d采集每頭豬的耳靜脈血5.0mL,用ELISA抗體檢測試劑盒進(jìn)行CSF、FMD、PRRS抗體測定，具體操作方法依照試劑盒說明書進(jìn)行。4數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析使用酶標(biāo)儀（630nm波長處）測定各樣品反應(yīng)孔中的0D旬值，觀察各組免疫抗體的動(dòng)態(tài)變化，所得0D印值數(shù)據(jù)用SPSS10.0軟件的One-WayANVOA方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。5試驗(yàn)結(jié)果5.1臨床免疫副反應(yīng)接種疫苗后4h內(nèi)觀察臨床反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)第2組

9、有1頭豬出現(xiàn)嘔吐、輕微肌肉震顫、呼吸急促的現(xiàn)象。嘔吐物約50g,把這頭有輕微反應(yīng)的仔豬放進(jìn)保溫箱中（試驗(yàn)當(dāng)時(shí)是凍雨雪天），約1h后副反應(yīng)癥狀消失。其他豬無可見的副反應(yīng)癥狀。5.2 第2組和對(duì)照組血清PRRS病毒抗體的動(dòng)態(tài)變化根據(jù)豬PRRS抗體檢測試劑盒說明書提供的判定標(biāo)準(zhǔn)，在酶標(biāo)儀上讀各孔OD阪值，試驗(yàn)成立的條件是：陽性對(duì)照孔OD«,值均應(yīng)N0.7,陰性對(duì)照孔OD阪值均應(yīng)0.3。計(jì)算陽性對(duì)照孔的平均值和樣品KQ值，公式為KQ=100x樣品OD即值/陽性對(duì)照孔OD«）平均值。若KQ值N20,判為PRRS病毒抗體陽性；若KQ20,則判為抗體陰性。本試驗(yàn)陽性對(duì)照孔的OD即平均值為

10、1.895,陰性對(duì)照孔的OD«）平均值為0.061,證明本次抗體檢測試驗(yàn)成立。據(jù)此計(jì)算出本試驗(yàn)PRRS樣品的OD即值N0.379,判為PRRS抗體陽性。詳細(xì)數(shù)據(jù)見表IO«1免疫血清PRRS抗體EUSA檢測OD&,均值（*）30d60d90d!20d2組對(duì)黑組1.441*0.1360.147*0.0241.347±0.2260.185*0.0431.367±0.2430.135±0.0371.317*0.2370.165*0.0251、2組和對(duì)照姐FMD抗體的動(dòng)態(tài)變化根據(jù)豬0型FMD抗體檢測試劑盒說明書提供的判定標(biāo)準(zhǔn)，在酶標(biāo)儀上讀各孔OD

11、伽值，試驗(yàn)成立的條件是：陽性對(duì)照孔0腿值均應(yīng)N0.8,陰性對(duì)照孔OD頌值均應(yīng)0.3；樣品OD助值N0.4時(shí)判為陽性，樣品OD&P值0.4時(shí)判為陰性。本次抗體檢測試驗(yàn)陽性對(duì)照孔的平均OD即值為1.48,陰性對(duì)照孔的平均OD旬值為0.084,因此，該抗體檢測試驗(yàn)成立。數(shù)據(jù)見表2O表2免疫血清FMD抗體EUSA檢測ODg均值任打）30d60d90d120d2組J.187±O.O36l.36O±O.(M2l.397±O.O471.4150.0351組0.888±0.041l.269±0.0391.438*0.0331.456±O.O4

12、3對(duì)照組0.294±0.0320.25610.0210.211±0.045O.157±O.O365.3 1組和2組血清豬瘟病毒抗體的動(dòng)態(tài)變化根據(jù)豬CSF抗體檢測試劑盒說明書提供的判定標(biāo)準(zhǔn),在酶標(biāo)儀上讀各孔。6粉值，試驗(yàn)成立的條件是陽性對(duì)照孔0。阪值均應(yīng)0.6,陰性對(duì)照孔OD«o值均應(yīng)0.3；樣品OD旬值NO.35時(shí)判為陽性,樣品OD旬值0.35時(shí)判為陰性。本次檢測陽性對(duì)照孔的平均OD旬值為1.649,陰性對(duì)照孔的平均OD阪值為0.057,所以本次抗體檢測試驗(yàn)成立。詳細(xì)數(shù)據(jù)見表3。表3免疫血清CSF抗體EUSA檢測ODmo均值（公）30d60d90dI2O

13、<!2組0.403±0.051O.372±O.O42O.263±O.O280.157*0.0271蝴0.397±0.043O.369M).O34、0.258±0.0230.154±0.028O.I89±O.O230.161±0.034Q.146±0.0310.10510.0256抗體陽性率變化情況采用ELISA方法，按試劑盒說明書計(jì)算抗體陽性率。判定標(biāo)準(zhǔn)為：CSF樣品0。即值N0.35,表示線瘟抗體陽性;FMD樣品OD值N0.4,表示FMD抗體陽性；PRRS樣品ODw值N0.38,表示PRRS抗體陽

14、性。由此得出各期各組各種抗體的陽性率：在試驗(yàn)進(jìn)行到30d時(shí)，2組的FMD抗體陽性率為90%,1組的FMD抗體陽性率為80%,直到120d時(shí)，兩組FMD抗體陽性率都達(dá)到了100%；在試驗(yàn)的30-120d階段,2組和1組的PRRS抗體陽性率都是100%；在試驗(yàn)30d時(shí)，2組和1組的CSF抗體陽性率為70%,在60d的陽性率為60%,在90120d,兩組的CSF抗體均顯陰性。7分析與結(jié)論7.1從表1、表2、表3可以看出，在整個(gè)試驗(yàn)期間(120d),對(duì)照組(10頭豬)血清中的CSF、FMD、PRRS抗體都呈陰性；1組和2組中FMD和PRRS的抗體OD均值與對(duì)照組中相應(yīng)的抗體OD即均值比較，.差異顯a(

15、P<0.05)；在30-60d期間,CSF抗體0D«)均值與對(duì)照組中相應(yīng)的抗體ODg均值比較，差異顯著(Pv0.05)o說明本次試驗(yàn)期間，各試驗(yàn)蛆豬均不存在自然感染CSF、FMD、PRRS的情況，所測得的陽性抗體均源于疫苗免疫后產(chǎn)生。7.2從表1還可以看出，第2組3針同時(shí)免疫后的30d內(nèi)，一直都有較高滴度的PRRS陽性抗體(0D儀值038),這種高滴度抗體至少可以維持到l20d。證明同時(shí)肌注3針疫苗的免疫方法在整個(gè)育肥期間對(duì)PRRS都有較好的免疫保護(hù)作用。7.3從表2可以看出，第2組3針免疫后在第30d都有較高滴度的FMD抗體，血清樣品OD«o值在0.842-1.55

16、3之間，其均值為1.187,并且還略高于同期試驗(yàn)組的FMD抗體0D血均值(0.888)。】、2兩組的FMD抗體0D«)均值都在0.4以上，說明PRRS對(duì)FMD抗體的產(chǎn)生具有促進(jìn)作用，這與孟麗軍等的試驗(yàn)結(jié)果較一致。這種高滴度的抗體至少可以維持到120d,證明3針同時(shí)肌注的免疫方式在整個(gè)有肥期間對(duì)豬FMD也都有很好的免疫保護(hù)作用。第1組在免疫后30d,只有2份血清樣品的FMD抗體0D位值為0.337.0.377,略低于0.4的陽性判定標(biāo)準(zhǔn)，可能是個(gè)體差異所致，其他8份血清樣品的0D®值在0.639-1397之間，都在0.4以上，而該組樣品。血，的平均值為0.888(>0.

17、4)；直到60、90、120d,該組10份樣品的0D碩值都大于0.4,說明同時(shí)接種CSF、FMD兩種疫苗的免疫方法對(duì)FMD還是有較好的免疫保護(hù)作用。在試驗(yàn)30d時(shí)，第2組的FMD陽性抗體OD«o均值為1.187,略高于第1組的FMD抗體0D位均值(0.888)(PvO.05),差異顯著；到試驗(yàn)60d及以后，1、2組中的FMD陽性抗體滴度基本持平(P>0.05),差異不顯著。說明豬PRRS活疫苗在免疫初期對(duì)豬FMD抗體的產(chǎn)生有促進(jìn)作用。7.4從表3可以看出，1、2組豬在免疫30-60d后,CSF抗體檢測呈陽性(0D曲值都>0.35),但抗體滴度都不太。)名猝著缶2OI3-O

18、7期.怠第274期高，血清樣品0D位值在0.35-0.44之間，只略高于陽性抗體判定標(biāo)準(zhǔn)(0.35),與試劑簽提供的陽性抗體0D阪均值1.28比較,差異極大(P<0.05)。2組和1組的CSF抗體ODm均值差異不顯著(P>0.05)；與對(duì)照蛆比較，在試驗(yàn)進(jìn)行到90d時(shí)，兩免疫蛆血清中的CSF抗體均呈陰性，差異也不顯著(P>0.05)o證明在仔豬去勢時(shí)無論是用CSF活疫苗、FMD合成肽疫苗、PRRS活疫苗三種疫苗同時(shí)免疫的方法，還是按一貫采用的CSF活疫苗、FMD合成肽苗兩種疫苗同時(shí)免疫的方法,都必須在初次免疫豬CSF疫苗60d后，再次加強(qiáng)免疫CSF活疫苗，這樣才能確保育肥后期對(duì)CSF的免疫保護(hù)作用。7.5從各組各抗體陽性合格率可以看出，試驗(yàn)2組和1組在免疫后30-120d期間，F(xiàn)MD和PRRS抗體合格率都超過了國家規(guī)定的70%標(biāo)準(zhǔn)，但是CSF抗體合格率只在免疫后30d才達(dá)到國家規(guī)定的70%標(biāo)準(zhǔn)，到60d,CSF抗體合格率只有60%,到90120d時(shí),CSF抗體合格率就已為0了。參考文獻(xiàn)：1張長龍，嚴(yán)寶英,賈文孝，等.豬瘟、豬D蹄疫