畢赤酵母發(fā)酵罐發(fā)酵資料講解

1、畢赤醉母發(fā)醉罐發(fā)酹精品文檔微生物發(fā)酪罐發(fā)酪（畢赤酪母）滅菌前：室溫下校準PH電極，先校6.86零點再4.0斜率（若的發(fā)酵pH很長時間是酸性的（如酵母發(fā)酵）用6.86校正零點，4.0校正斜率；若你的發(fā)酵pH很長時間是堿性的（如某些細菌發(fā)酵）用 6.86校正零點，9.18校正斜率）；室溫下校準溶氧電極，1.0點在不接溶氧電極時候標定，100%點接上溶氧電極，放置在空氣中較定；或2.0點在滅菌過程中，溫度達到121度左右壓力0.12mpa左右時候標定，100%在滅菌結(jié)束，降溫至發(fā)酵溫度并穩(wěn)定，轉(zhuǎn)速在發(fā)酵初始轉(zhuǎn)速，通氣量在發(fā)酵初始通氣量時候標定滅菌:1 .滅菌，先將各排氣閥打開，將蒸汽引入夾套或蛇管進

2、行預(yù)熱，待罐溫升至 8090C,將排氣閥逐漸關(guān)小。接著將蒸汽從進氣口、排料口、取樣口直接通入 罐中（如有沖視罐也同時進汽），使罐溫上升到118120C,罐壓維持在0.090.1Mpa （表壓）,并保持30min左右。2 .保溫結(jié)束后，依次關(guān)閉各排汽、進汽閥門，待罐內(nèi)壓力低于空氣壓力后，向罐內(nèi)通入無菌空氣，在夾套或蛇管中通冷卻水降溫，使培養(yǎng)基的溫度降到所需 的溫度，進行下一步的發(fā)酵和培養(yǎng)。（注意壓力：滅菌時，總蒸汽管道壓力要求不低于 0.30.35Mpa,使用壓力不 低于0.2Mpa滅菌后：A.消耗甘油階段1 .滅菌后冷卻30c時:2 .冷卻至30c時，開啟攪拌（轉(zhuǎn)速最大）和通氣（0.1-1.0

3、vvm），接通28%R水（未稀釋）調(diào)PH5.0;每升加4.35ml的無菌PTM1S礎(chǔ)鹽；3 .從搖瓶中接種種子液，DOfi為100%開始培養(yǎng)后會消耗，導致 DO值下降，通氧氣以確保DO值超過20%,速率先為0.1vvm。4 .發(fā)酵過夜甘油被完全消耗（18-24h）,標志為DO值增加到100%。【每天至少兩次取樣，測OD600,濕重，顯微觀察.將菌體和上清（離心后）在-80C下保藏，用于后面的分析?！? .這個階段所期望達到的細胞產(chǎn)量為90-150g/L濕細胞。重組蛋白質(zhì)不產(chǎn)生。B.甘油補料階段1 .將12ml/L PTM1加入50%VVM的甘油中，將補料速率設(shè)為 18.15ml每小時每 升初試

4、發(fā)酵液體積。2 .甘油補料將進行約4h或更長。在本階段完成后 細胞產(chǎn)量應(yīng)達到180-220g/L濕 細胞，但是不會有重組蛋白質(zhì)的產(chǎn)生?！?%甘油的是所建議的在補料中的最大水平，更高的甘油濃度將會產(chǎn)生毒害問題?！恐匾?如果溶氧低于20%,應(yīng)該停止甘油或甲醇的補料并且不做任何提高溶氧的 事直到溶氧穩(wěn)定。這時開始調(diào)整攪拌、通氣、壓力或氧氣的補充。有報道稱如果培養(yǎng)基的 pH低于30,中性蛋白酶會被抑制。故如果有必要可設(shè) 為3.0保持4-5h甘油補料階段。甲醇補料培養(yǎng)在甲醇補料前甘油都必須消耗干凈。1.12mlPTM1基本鹽類每升的100%的甲醇進行誘導。速率為3.6ml/h每升初試發(fā)酵液體積。開始的2

5、-3h內(nèi)甲醇會在發(fā)酵液中累積，溶氧值會有變化。2 . DO值不能維持在20%以上，停止流加甲醇，等到DO值穩(wěn)定后繼續(xù)以當前速率流加甲醇。增加攪拌、通氣、壓力或者氧氣的 補充來使DO維持在20%以 上。do值會一直變化。件3 .當培養(yǎng)物完全適應(yīng)利用甲醇 （2-4h）并且甲醇成為其限制性生長因子后，將會 有一個穩(wěn)定的DO讀數(shù)和一個較快的DO穩(wěn)定時間點（通常不到1min）。在培 養(yǎng)物適應(yīng)甲醇后而將流加速率翻倍前在限制條件下保持這個較低的流加速率最少出。然后流加速率增加一倍到約7.3mji/h而而始發(fā)酉臉衛(wèi)A2h）4 .調(diào)10.9 ml/h到最后。5 .一共加入接近740ml,約70h。細胞濃度會最終增加到 350-450g/L濕細胞。YPD（100ml）酵母膏是1g,蛋白陳2g,葡萄糖2g。若固體，再加2g瓊脂粉。自然pH值約5.4,剛好是酵母合適的pH值。一般不需要調(diào)節(jié)pH。LB胰蛋白(T (Tryptone) 10g/L酵母提取物(Yeast extract)5g/L氯化鈉(NaCl) 10g/LNaOH 調(diào)節(jié)