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文檔簡(jiǎn)介
1、植物細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)報(bào)告班級(jí): 姓名:學(xué)號(hào): 指導(dǎo)老師: 時(shí)間: 目錄實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備:培養(yǎng)基母液的配制培養(yǎng)基的配制與滅菌實(shí)驗(yàn)一、香蕉吸芽的組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)二、煙草葉片的組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)三、木薯的微繁技術(shù)實(shí)驗(yàn)四、桉樹(shù)再生體系建立實(shí)驗(yàn)五、玉米花生成熟胚培養(yǎng) 實(shí)驗(yàn)六、柱花草葉片組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)七、水稻盾片組織培養(yǎng)自選實(shí)驗(yàn):洋蔥、仙人掌的組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備:培養(yǎng)基母液的配制一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握培養(yǎng)基母液的配制。在配置培養(yǎng)基之前,為了方便和用量準(zhǔn)確,常常將大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)物、激素類分別配制成比培養(yǎng)基配方需要量大若干倍的母液。當(dāng)配置培養(yǎng)基時(shí),只需按預(yù)先計(jì)算好的量吸取母液。二、實(shí)驗(yàn)原理 培養(yǎng)基是植物細(xì)胞、組織和器官吸取
2、營(yíng)養(yǎng)的場(chǎng)所。在植物細(xì)胞的分裂和分化過(guò)程中,需要各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),這些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)包括無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分、有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)等。在對(duì)植物的器官、組織和細(xì)胞進(jìn)行離體培養(yǎng)時(shí),只是切取植物體的一小部分,它們無(wú)法象整體植株那樣合成生長(zhǎng)發(fā)育所需的全部物質(zhì)。而自然界的植物千差萬(wàn)別,每一種植物都有自己獨(dú)特的生理代謝過(guò)程和各自的營(yíng)養(yǎng)需求,沒(méi)有哪一種培養(yǎng)基能夠適用于所有植物。因此,對(duì)培養(yǎng)基組成成分的篩選是非常重要和必不可少的程序。目前對(duì)植物進(jìn)行組培時(shí),人們所使用的培養(yǎng)基只幾十種,其中MS培養(yǎng)基應(yīng)用最為廣泛。說(shuō)明MS培養(yǎng)基的無(wú)機(jī)鹽成分對(duì)許多植物種均是適宜的,它的無(wú)機(jī)鹽含量較高,微量元素種類較全,濃度也較高。三、實(shí)驗(yàn)試
3、劑與儀器設(shè)備1、藥品試劑:母液、蔗糖、卡拉膠(或瓊脂)、NaOH溶液、HCl溶液、無(wú)菌水、NAA、BA、IAA、2,4-D等。2、儀器設(shè)備:電子天平、量筒、PH試紙、培養(yǎng)瓶、解剖刀、酒精燈、高壓滅菌鍋、移液管、洗耳球、玻璃棒、藥勺、超凈操作臺(tái)、鐵架、鑷子等。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容(一)母液的配制MS培養(yǎng)基母液方案配制如下表:成分1L母液的用量(mg/L)每升培養(yǎng)基取用量(ml)備注大量元素(20X)NH4NO33300050KNO338000KH2PO43400MgSO47H2O7400CaCl2660050單獨(dú)配制鐵鹽(100X)FeSO4.7H2O278010Na2-EDTA3730微量元素(200
4、X)KI1665H3BO31240MnSO4.H2O3380ZnSO4.7H2O1720Na2MoO4.2H2O50CuSO4.5H2O5CoCL2.6H2O5有機(jī)元素(100X)VB11010VB650煙酸50甘氨酸200肌酸10000具體配制步驟如下:1、大量元素母液的配制 無(wú)機(jī)鹽中大量元素母液,按照培養(yǎng)基配方的用量,把各種化合物擴(kuò)大20倍,用感量為0.01g的扭力天平,分別用50mL燒杯稱量,用重蒸餾水溶解.溶解時(shí)在每只燒杯中加入30-40mL重蒸餾水,置于酒精燈上,加熱使其溶解(注意溫度不可過(guò)高,60-70)。溶解后,在1000mL量筒中,混合后用重蒸餾水定容到1000mL。其中CaC
5、l2單獨(dú)配制。在加入母液時(shí)CaCl2應(yīng)最后加入,以免形成沉淀。將配好的混合液倒入細(xì)口瓶中,貼好標(biāo)簽保存于冰箱中。配制培養(yǎng)基時(shí),配1000mL培養(yǎng)基取此母液50mL。2、微量元素母液的配制無(wú)機(jī)鹽中微量元素母液,按照培養(yǎng)基配方用量的200倍,用微量0.0001g的電光分析天平,分別用50mL燒杯稱量,用重蒸餾水溶解。混合定容于100ml容量瓶中保存于冰箱中,配制培養(yǎng)基時(shí),每配制1000mL培養(yǎng)基取此母液5mL.3、鐵鹽母液的配制無(wú)機(jī)鹽中鐵鹽母液,按照培養(yǎng)基配方用量的100倍,用感量0.01g的扭力分析天平,分別用50mL燒杯稱量,用重蒸餾水溶解,混合定容,倒入細(xì)口瓶中,每配制1000mL培養(yǎng)基取此
6、母液10mL。4、有機(jī)元素的配制無(wú)機(jī)鹽中有機(jī)元素母液,按照培養(yǎng)基配方用量的100倍,用感量0.01g的扭力天平,分別用50mL燒杯稱量,用重蒸餾水溶解,混合定容,倒入細(xì)口瓶中,每配制1000mL培養(yǎng)基取此母液10mL。五、注意事項(xiàng)1、配制時(shí)注意一些離子之間易發(fā)生沉淀,如Ca2+和S042-,Ca2+、Mg2+和PO43-一起溶解后,會(huì)產(chǎn)生沉淀,一定要充分溶解再放入母液中。2、配制母液時(shí)要用蒸餾水或重蒸餾水。3、藥品應(yīng)選取等級(jí)較高的化學(xué)純或分析純。4、藥品的稱量及定容都要準(zhǔn)確。各種藥品先以少量水讓其充分溶解,然后依次混合。5、一般配成大量元素、微量元素、鐵鹽、維生素等母液,其中維生素 氨基酸類可
7、以分別配制,也可以混在一起。5、母液配好后放入冰箱內(nèi)低溫保存,用時(shí)再按比例稀釋。實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備:培養(yǎng)基的配制與滅菌一、培養(yǎng)基的配制及消毒:(1)按照MS培養(yǎng)基的配方(以配制1LMS培養(yǎng)基為例)取大燒杯加入先前配制好的母液其中包括:大量元素50ml、微量元素5ml、鐵鹽10ml、有機(jī)元素10ml,最后加鈣鹽50ml充分混勻。再加入30g食用白糖,加入適量的去離子水使總量將近1L,混勻后調(diào)PH值(調(diào)至5.8-6.2),用1000ml量筒定容,最后向培養(yǎng)基中添加8.0g卡拉膠混勻。注意事項(xiàng):配制MS時(shí),鈣鹽一定要最后加入;調(diào)好PH值后再加卡拉膠(或瓊脂)。(2)培養(yǎng)基配制好后分裝到培養(yǎng)瓶中每瓶約30ml,
8、蓋好瓶蓋帖上標(biāo)簽。需要加入激素的培養(yǎng)基在定容到1000ml后加入所需的激素。混勻后調(diào)PH值(調(diào)至5.8-6.2),用1000ml容量瓶定容,最后向培養(yǎng)基中添加8g卡拉膠,混勻后進(jìn)行分裝,然后裝入高溫高壓滅菌鍋進(jìn)行滅菌(一般培養(yǎng)基用0.1MPa,121.5,1530分鐘可達(dá)到徹底滅菌的目的)。滅菌好后取出冷卻備用。(3)培養(yǎng)環(huán)境條件:培養(yǎng)溫度為28(-1、+1),光照強(qiáng)度20003000LX,光照時(shí)間為12h/d,每隔7天觀察一次。二、超凈操作臺(tái)的消毒消毒時(shí)先用75%的酒精對(duì)超凈臺(tái)的各處進(jìn)行消毒,點(diǎn)燃酒精燈放于超凈臺(tái)右側(cè),再對(duì)實(shí)驗(yàn)工具進(jìn)行灼燒滅菌,后放于架上冷卻待用。并依次將實(shí)驗(yàn)中所用培養(yǎng)基瓶及
9、所需試劑瓶進(jìn)行消毒,置于超凈臺(tái)左側(cè),注意實(shí)驗(yàn)中要用75%的酒精對(duì)手進(jìn)行消毒。實(shí)驗(yàn)一、香蕉吸芽的組織培養(yǎng)前言:香蕉傳統(tǒng)的繁殖方法多是采用吸芽分株法,這種方法的繁殖系數(shù)低,速度慢,難以滿足當(dāng)前大規(guī)模的栽培生產(chǎn),且容易傳播疾病。利用組織培養(yǎng)的技術(shù)來(lái)對(duì)香蕉優(yōu)質(zhì)品種進(jìn)行無(wú)性繁殖,這樣不但可以保持香蕉的優(yōu)良性狀,加快繁殖速度,而且,試管苗不帶病蟲(chóng)害和病毒病,并且,利用組織培養(yǎng)技術(shù)得到的幼苗生長(zhǎng)比較一致,有利于田間的管理和采收,本實(shí)驗(yàn)利用香蕉的吸芽作為外植體。1、材料和方法:1.1材料(1) 香蕉吸芽(2) 無(wú)菌紙、鑷子、酒精燈等(3)實(shí)驗(yàn)采用MS基本培養(yǎng)基,PH: 5.8-6(4)誘導(dǎo)培養(yǎng)基: MSBA3
10、mgL30gL白糖+8.5gL卡拉膠(5)繼代培養(yǎng)基: MSBA5mgL30gL白糖+8.5gL卡拉膠1.2方法1.2.1外植體消毒用自來(lái)水沖洗吸芽表面的泥土,剝離外假莖,只留下莖和假莖各2-3cm長(zhǎng),假莖的的直徑有2-3cm,用洗衣粉清洗一遍,用自來(lái)水沖洗,轉(zhuǎn)入0.1%升汞浸泡15-20min,其間不斷攪拌,棄去升汞用無(wú)菌水洗3遍(無(wú)菌水漂洗:將從升汞中取出的香蕉吸芽組織塊轉(zhuǎn)入無(wú)菌水中漂洗,不斷搖動(dòng)使漂洗干凈)留在瓶中備用。1.2.2誘導(dǎo)培養(yǎng)將香蕉吸芽放到無(wú)菌工作臺(tái)的無(wú)菌紙上,用消毒刀將外植體的假莖的最外層剝掉,以及有消毒刀將已經(jīng)變色的莖外面一小層也切掉,然后從外植體莖中間一分為四,接入誘導(dǎo)
11、培養(yǎng)基,共4瓶。7天后觀察。1.2.3繼代培養(yǎng)將誘導(dǎo)培養(yǎng)得到的香蕉苗中長(zhǎng)勢(shì)較好的一瓶用作繼代培養(yǎng)的材料,在超凈工作臺(tái)上將香蕉芽叢分開(kāi),切去頂部葉片部分,削去底部褐化部分,將芽叢接種于香蕉繼代增殖培養(yǎng)基中,接種2瓶。1.2.4培養(yǎng)條件:培養(yǎng)溫度為28(-1、+1),光照強(qiáng)度20003000LX,光照時(shí)間為12h/d(注意香蕉吸芽誘導(dǎo)期無(wú)需光照),每個(gè)星期觀察一次 。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析:2.1 誘導(dǎo)培養(yǎng):共接種了4瓶,出現(xiàn)一定的褐化現(xiàn)象,誘導(dǎo)率為100%,污染率為25%,說(shuō)明用0.1%的升汞對(duì)香蕉的吸芽消毒15-20min的時(shí)間控制比較合理,消毒的效果也較好。附錄1、誘導(dǎo)培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)表外植體數(shù)
12、目成活數(shù)污染數(shù)成活率污染率441100%25%2.2 繼代培養(yǎng):從三瓶未污染的香蕉苗中選取長(zhǎng)勢(shì)最好的一瓶,繼代培養(yǎng)兩瓶,一瓶長(zhǎng)勢(shì)良好,另一瓶香蕉苗由于褐化現(xiàn)象比較嚴(yán)重而死去。原因:可能是因?yàn)樵诶^代的培養(yǎng)過(guò)程中,用刀切去褐化部分時(shí)切去的過(guò)多,使香蕉基部受傷嚴(yán)重而死亡。3、注意事項(xiàng)1)整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程要嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作;2)倒培養(yǎng)基時(shí)要邊用玻璃棒攪拌,邊倒培養(yǎng)基,防止培養(yǎng)基的濃度不均勻;3)觀察記錄時(shí),要注意拿組培瓶的方式,手要握住組培瓶的下方而不要握住組培瓶的蓋子;4)發(fā)現(xiàn)污染的外植體,要及時(shí)清理干凈,以免污染其他的;5)觀察記錄時(shí)要仔細(xì),認(rèn)真描述并做好記錄。實(shí)驗(yàn)二、煙草葉片組織培養(yǎng)前言:目前煙草一
13、般采用有性繁殖,但繁殖的煙苗不均衡,易發(fā)生變異,而且易感病菌,造成多種病害發(fā)生,品質(zhì)退化,從而影響經(jīng)濟(jì)收人。用嫩葉片的組培方法,可以保持優(yōu)良品種的優(yōu)良性狀,減少病蟲(chóng)害,從而達(dá)到高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的目的。另外,煙草生長(zhǎng)速度快,生長(zhǎng)周期短,所以是基因工程中最為廣泛使用的模式植物之一。本實(shí)驗(yàn)利用煙草的葉片作為外植體,誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MSBA 1.0 mgL。1、材料和方法:1.1材料(3) 1)煙草葉片、無(wú)菌紙、鑷子、酒精燈等2)MS為基本培養(yǎng)基3)誘導(dǎo)培養(yǎng)基: MSBA 1.0 mgL30gL白糖+8.5gL卡拉膠4)繼代培養(yǎng)基: MSBA 1.0 mgLNAA 0.5 mgL30gL白糖+8.5gL卡拉膠1.
14、2方法1.2.1外植體消毒將煙草葉片洗凈,將煙草葉片左右墊與牛皮紙上用手術(shù)刀切取2cm長(zhǎng),2cm寬的無(wú)主葉脈、主側(cè)葉脈的長(zhǎng)方形葉片塊(10片左右),置于加了1-2滴土溫的0.1%的升汞溶液中消毒10-15min,期間注意不斷搖動(dòng),取出葉片置于無(wú)菌水中清洗3次,留于最后清洗的無(wú)菌水中備用。1.2.2誘導(dǎo)培養(yǎng)將煙草葉片取出將葉片周遍切去,再將每片葉切成2片,接入誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,每7天觀察記錄一次。1.2.3培養(yǎng)條件:培養(yǎng)溫度為28(-1、+1),光照強(qiáng)度20003000LX,光照時(shí)間為12h/d,,每個(gè)星期觀察一次 。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析:1)誘導(dǎo)培養(yǎng)全部被污染,污染率100%,誘導(dǎo)率為0。原因可能是
15、:滅菌不徹底,整組均被污染用升汞消毒的時(shí)間過(guò)短,因此應(yīng)適當(dāng)延長(zhǎng)消毒時(shí)間。操作過(guò)程染菌附錄1、第一次煙草誘導(dǎo)培養(yǎng)結(jié)果統(tǒng)計(jì)表接種瓶數(shù)誘導(dǎo)數(shù)污染數(shù)誘導(dǎo)率污染率4040100%2) 未能進(jìn)行繼代培養(yǎng)3、注意事項(xiàng)1)整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程要嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作;2)倒培養(yǎng)基時(shí)要邊用玻璃棒攪拌,邊倒培養(yǎng)基,防止培養(yǎng)基的濃度不均勻;3)觀察記錄時(shí),要注意拿組培瓶的方式,手要握住組培瓶的下方而不要握住組培瓶的蓋子;4)發(fā)現(xiàn)污染的外植體,要及時(shí)清理干凈,以免污染其他的;5)觀察記錄時(shí)要仔細(xì),認(rèn)真描述并做好記錄。實(shí)驗(yàn)三、木薯的微繁技術(shù)前言:在我國(guó)南亞熱帶地區(qū),木薯是僅次于水稻、甘薯、甘蔗和玉米的作物。木薯是用其莖干來(lái)進(jìn)行無(wú)性繁
16、殖的,但是往往新品種剛剛出現(xiàn)時(shí),其莖干是非常有限的,因此,對(duì)優(yōu)質(zhì)品種的迅速推廣是非常不利的。利用組織培養(yǎng)的方法不僅可以保持母樹(shù)的性狀,而且繁殖速度快,有利于品種的推廣。本實(shí)驗(yàn)利用木薯的莖段作為外植體。1、實(shí)驗(yàn)材料與方法:1.1實(shí)驗(yàn)材料:(4) 1)、木薯幼枝、無(wú)菌紙、鑷子、酒精燈等2)、以MS為基本培養(yǎng)基3)、誘導(dǎo)培養(yǎng)基:MSCuSO40.05mgL2,4-D0.02mgL30gL白糖+8.5gL卡拉膠1.2方法1.2.1外植體的消毒:1. 從苗圃剪取幼嫩木薯枝條,剪去葉子。2. 以一個(gè)芽節(jié)為一段(芽節(jié)上下端保持1.5cm左右)切下,置于75%的酒精溶液中消毒5s。3. 再置于0.1%升汞溶液
17、中消毒10-15min左右,其間注意不斷搖動(dòng),取出木薯枝條置于無(wú)菌水中清洗3次。1.2.2誘導(dǎo)培養(yǎng)將消毒好的木薯枝條取出,置于無(wú)菌的牛皮紙上,切去上下端各一小部分后,接入誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng),接種5瓶,7天后觀察。1.2.3培養(yǎng)條件:培養(yǎng)溫度為28(-1、+1),光照強(qiáng)度20003000LX,光照時(shí)間為12h/d,每個(gè)星期觀察一次 。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析總共接種5瓶木薯,每瓶中接種2個(gè)木薯莖段。培養(yǎng)一周后觀察,幾乎所有的莖段都被污染了,污染率幾乎達(dá)到100%。其中有三瓶誘導(dǎo)成功??赡艿脑蛉缦拢?、在升汞中消毒的時(shí)間不夠,應(yīng)再適當(dāng)延長(zhǎng)消毒時(shí)間;2、取材的時(shí)間不合理,致使外植體表面帶有大量的菌,進(jìn)而導(dǎo)
18、致外植體脫毒困難。因此,取材時(shí)要選擇向陽(yáng)的健壯的枝條并在天氣晴朗時(shí)取材,而不宜在陰雨天取材。3、注意事項(xiàng)1)整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程要嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作;2)倒培養(yǎng)基時(shí)要邊用玻璃棒攪拌,邊倒培養(yǎng)基,防止培養(yǎng)基的濃度不均勻;實(shí)驗(yàn)四、桉樹(shù)再生體系的建立前言:桉樹(shù)是異花授粉植物,有性繁殖很容易引起變異,很難保持物種的優(yōu)良性狀,無(wú)性繁殖如扦插等繁殖得很慢,無(wú)法滿足生產(chǎn)的需要。而桉樹(shù)組培快繁可使桉樹(shù)保持其遺傳穩(wěn)定性,其繁殖系數(shù)大,一年內(nèi)一個(gè)桉樹(shù)帶節(jié)莖段,可以繁育百萬(wàn)株以上的苗木。本實(shí)驗(yàn)利用桉樹(shù)的莖段作為外植體。1、實(shí)驗(yàn)材料與方法:1.1實(shí)驗(yàn)材料:(5) 1)、桉樹(shù)幼枝、無(wú)菌紙、鑷子、酒精燈等2)、以MS為基本培養(yǎng)基3
19、)、芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基:MSBA1mgLNAA0.5mgL30gL白糖+8.5gL卡拉膠1.2、方法1.2.1外植體的消毒:采取幼嫩桉樹(shù)枝條(選取腋芽還沒(méi)有抽出芽枝的),剪去葉子,置于清水下洗凈,在洗衣粉水中浸泡20min左右,清洗干凈后用流水(自來(lái)水)沖洗到下午做實(shí)驗(yàn)時(shí)。取出以一個(gè)芽節(jié)為一段(芽節(jié)上端保持1-1.5cm,下端2cm左右)切下,置于75%的酒精溶液中消毒5s,在置于0.1%升汞溶液中消毒10-15min,其間注意不斷搖動(dòng),取出桉樹(shù)枝條置于無(wú)菌水中清洗3次。1.2.2芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)將消毒好的桉樹(shù)枝條取出,置于無(wú)菌的牛皮紙上,切去上下端各一小部分后,接入芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng),接種5瓶。1
20、.2.3培養(yǎng)條件:培養(yǎng)溫度為28(-1、+1),光照強(qiáng)度20003000LX,光照時(shí)間為12h/d,每個(gè)星期觀察一次 。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析總共接種5瓶桉樹(shù),每瓶中接種2個(gè)桉樹(shù)莖段。培養(yǎng)一周后觀察,發(fā)現(xiàn)幾乎所有的莖段都被真菌或細(xì)菌污染了,污染率幾乎達(dá)到100%??赡艿脑蛉缦拢?、在升汞中消毒的時(shí)間不夠,應(yīng)再適當(dāng)延長(zhǎng)消毒時(shí)間;2、取材的時(shí)間不合理,致使外植體表面帶有大量的菌,進(jìn)而導(dǎo)致外植體脫毒困難。 3、滅菌不徹底3、 注意事項(xiàng)1)整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程要嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作;2)倒培養(yǎng)基時(shí)要邊用玻璃棒攪拌,邊倒培養(yǎng)基,防止培養(yǎng)基的濃度不均勻;實(shí)驗(yàn)五玉米、花生成熟胚的培養(yǎng)1、實(shí)驗(yàn)材料與方法:1.1實(shí)驗(yàn)材料:1
21、)、玉米、花生成熟種子2)、培養(yǎng)基MS + 30g/L白糖 + 8.5g/L卡拉膠 PH=5.8 1.2方法均設(shè)置三組對(duì)比:不做任何處理,直接接種。各1瓶取成熟玉米和花生粒(15粒左右),直接置于0.1%升汞溶液中消毒10-20min左右,期間注意不斷搖動(dòng),取出置于無(wú)菌水中清洗后切開(kāi),取帶胚的一半進(jìn)行培養(yǎng)。各1瓶消毒方法同上,用無(wú)菌水沖洗后小心剝離出胚單獨(dú)培養(yǎng)。各2瓶1.2.3培養(yǎng)條件培養(yǎng)溫度為28(-1、+1),光照強(qiáng)度20003000LX,光照時(shí)間為12h/d,每個(gè)星期觀察一次 。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析一周后觀察。玉米:接種了4瓶培養(yǎng)基。已經(jīng)污染長(zhǎng)勢(shì)良好,無(wú)污染長(zhǎng)勢(shì)健壯花生:接種了4瓶培養(yǎng)基。
22、污染嚴(yán)重?zé)o污染,長(zhǎng)勢(shì)較好有一瓶被污染,另一瓶長(zhǎng)勢(shì)良好分析:如果對(duì)花生玉米不作處理,極易被污染。 單獨(dú)分離出胚的長(zhǎng)勢(shì)更好一些3、注意事項(xiàng)1)整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程要嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作;2)倒培養(yǎng)基時(shí)要邊用玻璃棒攪拌,邊倒培養(yǎng)基,防止培養(yǎng)基的濃度不均勻;3)觀察記錄時(shí),要注意拿組培瓶的方式,手要握住組培瓶的下方而不要握住組培瓶的蓋子;4)發(fā)現(xiàn)污染的外植體,要及時(shí)清理干凈,以免污染其他的。實(shí)驗(yàn)六、柱花草葉片組織培養(yǎng)1、 材料和方法:1.1材料(6) 1)、柱花草葉片、無(wú)菌紙、鑷子、酒精燈等2)、MS為基本培養(yǎng)基3)、誘導(dǎo)培養(yǎng)基:M S+BA4mg/L+NAA1.0mg/ml1.2方法1.2.1外植體消毒將柱花草
23、葉片洗凈,然后將葉片放在牛皮紙上,用手術(shù)刀切取2cm長(zhǎng)的片塊(10片左右),置于0.1%的升汞溶液中消毒10-15min,期間注意不斷搖動(dòng),取出葉片置于無(wú)菌水中清洗3次,留于最后清洗的無(wú)菌水中備用。1.2.2誘導(dǎo)培養(yǎng)將柱花草葉片取出放入超凈工作臺(tái)中無(wú)菌的牛皮紙上,然后將葉片兩端切去少許,接入誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,接種4瓶,每7天觀察記錄一次。1.2.3培養(yǎng)條件:培養(yǎng)溫度為28(-1、+1),光照強(qiáng)度20003000LX,光照時(shí)間為12h/d,,每個(gè)星期觀察一次 。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析:1)第一次對(duì)柱花草進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)時(shí),污染率25%,誘導(dǎo)率為50%,污染率很高。原因可能是,用升汞消毒的時(shí)間過(guò)短,或者是升汞
24、濃度較低,因此應(yīng)適當(dāng)延長(zhǎng)消毒時(shí)間或適當(dāng)提高升汞的濃度或者嘗試別的消毒方法。附錄1、柱花草誘導(dǎo)培養(yǎng)結(jié)果統(tǒng)計(jì)表接種瓶數(shù)誘導(dǎo)數(shù)污染數(shù)誘導(dǎo)率污染率42150%25%實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)論:由實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析可知,柱花草葉片的組織培養(yǎng)污染率比較高,說(shuō)明取材方法和消毒措施不佳,應(yīng)采用合理的消毒方法,以降低污染率。3、注意事項(xiàng)1)整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程要嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作;2)倒培養(yǎng)基時(shí)要邊用玻璃棒攪拌,邊倒培養(yǎng)基,防止培養(yǎng)基的濃度不均勻;3)觀察記錄時(shí),要注意拿組培瓶的方式,手要握住組培瓶的下方而不要握住組培瓶的蓋子;4)發(fā)現(xiàn)污染的外植體,要及時(shí)清理干凈,以免污染其他的;5)觀察記錄時(shí)要仔細(xì),認(rèn)真描述并做好記錄。實(shí)驗(yàn)七、水稻盾片
25、的組織培養(yǎng)前言:水稻是世界上最重要的糧食作物之一,約有40%的世界人口以稻米為主食,因此,培育高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的水稻品種一直是世界范圍的重要研究課題。水稻的花藥培養(yǎng)使人們得到了純合二倍體植株,大大縮短了水稻的雜交育種年限。提高選擇效率。由于水稻盾片取材方便,在實(shí)際的研究工作中作為誘導(dǎo)愈傷組織的外植體材料來(lái)源應(yīng)用越來(lái)越廣泛。1、實(shí)驗(yàn)材料與方法:1.1實(shí)驗(yàn)材料:(7) 1)、水稻干燥成熟種子、無(wú)菌紙、鑷子、酒精燈等2)、水稻發(fā)芽培養(yǎng)基MS3)、誘導(dǎo)培養(yǎng)基:MS2,4-D2.5mgL30gL白糖+8.5gL卡拉膠1.2方法1.2.1外植體的消毒:取水稻種子20-30粒,在室溫下直接浸于 0.1%升汞溶液中消
26、毒20min左右,其間注意不斷搖動(dòng),取出種子置于無(wú)菌水中清洗3次。1.2.2誘導(dǎo)培養(yǎng)將消毒好的水稻種子取出,接入發(fā)芽培養(yǎng)基中培養(yǎng)(共接4瓶)。 一周后,取已發(fā)芽的水稻種子,切除芽不要,將種子直接接入誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)。1.2.3培養(yǎng)條件培養(yǎng)溫度為28(-1、+1),光照強(qiáng)度20003000LX,光照時(shí)間為12h/d,每個(gè)星期觀察一次 。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析用MS培養(yǎng)基誘導(dǎo)水稻種子發(fā)芽,接種的4瓶培養(yǎng)基均長(zhǎng)出小苗,未污染。發(fā)芽率100%第二次誘導(dǎo)培養(yǎng)的4瓶,有三瓶長(zhǎng)勢(shì)良好,一瓶已被污染??赡茉颍翰僮鬟^(guò)程不規(guī)范,導(dǎo)致染菌3、注意事項(xiàng)1)整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程要嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作;2)倒培養(yǎng)基時(shí)要邊用玻璃棒攪拌,
27、邊倒培養(yǎng)基,防止培養(yǎng)基的濃度不均勻。自選實(shí)驗(yàn)開(kāi)題報(bào)告實(shí)驗(yàn)題目:班級(jí):姓名:學(xué)號(hào):指導(dǎo)老師:洋蔥的組織培養(yǎng)選題依據(jù)及意義:洋蔥是百合科蔥屬植物,以肉質(zhì)鱗片和鱗芽構(gòu)成產(chǎn)品器官的二年生草本植物,營(yíng)養(yǎng)豐富,而且具有殺菌、降脂、降壓、抗哮喘等多種保健功能,深受人們喜愛(ài) ,起源于中亞地區(qū) ,歷史悠久 ,分布廣泛 ,是世界第四大蔬菜作物。由于洋蔥兩年生 ,異花受粉 ,異質(zhì)性強(qiáng) ,必須保持高度雜合 ,自交兩三代就失去育性。盡管已經(jīng)發(fā)現(xiàn)雄性不育系 ,但通過(guò)分子生物學(xué)的方法可以得到性狀更優(yōu)良的品種 ,通過(guò)組織培養(yǎng)建立植株再生體系是轉(zhuǎn)基因的必要手段 ,各國(guó)學(xué)者對(duì)此做了大量的工作 ,近幾十年來(lái)成果主要集中于以下幾個(gè)方
28、面 :1研究進(jìn)展1 .1器官發(fā)生型自 1997年Dunstan首次由洋蔥獲得離體植株后 ,各國(guó)學(xué)者相繼作了成功的報(bào)道。 1980年Hussey首次把雙鱗片作為外植體誘導(dǎo)得到芽 ,又以得到的芽縱切后為二代外植體 ,得到離體植株。Kahane (1992a)報(bào)道以鱗莖盤為外植體 ,經(jīng)芽擴(kuò)繁 ,植株個(gè)體化 ,生根馴化得到再生植株 ,三個(gè)步驟為一個(gè)周期 ,約 3 4個(gè)月 ,擴(kuò)繁系數(shù)為 10 ,大大縮短了再生時(shí)間并部分解決取材的季節(jié)性限制。接著Yassen(1993)報(bào)道以未成熟的花作試材 ,直接形成小鱗莖 ,有效地避免和減少了繼代培養(yǎng)的次數(shù) ,同樣繁殖系數(shù)約為 10。將收獲的新鮮洋蔥球冷藏,然后剝除外
29、皮至直徑為2-3cm,然后對(duì)它進(jìn)行消毒處理;然后在無(wú)菌條件下將消毒處理后的洋蔥球切除成外植體,然后將外植體接種到洋蔥增殖培養(yǎng)基;經(jīng)過(guò)培養(yǎng),獲得已長(zhǎng)出若干個(gè)側(cè)芽的無(wú)菌材料;其后每20-30天就可擴(kuò)繁一次;將擴(kuò)繁得到的洋蔥單株壯苗轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng),得成活洋蔥苗。材料與方法:1. 材料(8) 洋蔥、無(wú)菌紙、鑷子、酒精燈等(9) 采用MS為基本培養(yǎng)基3)誘導(dǎo)培養(yǎng)基:、MS+ BA0.5mg/L+2,4-D2mg/L30gL白糖+8.5gL卡拉膠2.方法2.1外植體消毒方法洋蔥用流水沖洗5 h后,剝?nèi)ネ馄ぶ林睆綖?-3cm于超凈工作臺(tái)上先用70酒精浸泡30 s、0.1的升汞中消毒7min,然后用
30、無(wú)菌水沖洗5次最后將消毒好的材料置于無(wú)菌濾紙上吸干水分。2.2誘導(dǎo)培養(yǎng)將經(jīng)消毒的洋蔥鱗莖尖接入誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,共接5瓶,每7天觀察記錄一次。2.3培養(yǎng)條件:培養(yǎng)溫度為28(-1、+1),光照強(qiáng)度20003000LX,光照時(shí)間為12h/d,每個(gè)星期觀察一次 。仙人掌的組織培養(yǎng)選題依據(jù)及意義:仙人掌類植物原產(chǎn)南北美洲熱帶、亞熱帶大陸及附近一些島嶼,部分生長(zhǎng)在森林中。多漿植物的多數(shù)種類原產(chǎn)南非,僅少數(shù)分布于其它各洲的熱帶、亞熱帶地區(qū)。目前仙人掌科的植物將近有2000種 ,其中大多數(shù)有良好的食用和藥用價(jià)值,在食用和醫(yī)療方面有著廣闊的應(yīng)用前景及巨大的開(kāi)發(fā)潛力。仙人掌科植物最早在歐洲一些發(fā)達(dá)國(guó)家開(kāi)始栽培和研
31、究目前已經(jīng)進(jìn)入工廠化種植,且組培苗在交易中占有一定比例。國(guó)內(nèi)外研究趨勢(shì)及發(fā)展?fàn)顩r:我國(guó)近年引進(jìn)的仙人掌科植物逐漸增多。但對(duì)仙人掌植物的研究和應(yīng)用仍處于起步階段。仙人掌科植物的繁殖方法主要以傳統(tǒng)的扦插為主。繁殖一般較容易,但由于生長(zhǎng)緩慢、繁殖系數(shù)低,多數(shù)名貴種類繁殖困難,尤其對(duì)斑錦變異和畸形變異品種的性狀保持較難,大大影響了該類植物的擴(kuò)大栽培。利用組織培養(yǎng)技術(shù)可以大幅提高繁殖系數(shù),保持品種性狀擴(kuò)大突變品種、新特品種和珍稀品種的繁殖降低栽培成本。材料與方法:2. 材料 1)仙人掌嫩莖、無(wú)菌紙、鑷子、酒精燈等2)MS培養(yǎng)基3)誘導(dǎo)培養(yǎng)基:、MS+BA20 mgL+NAAO2 mgL4)增殖培養(yǎng)基:M
32、S+BA05 mgL+NAA02 mgL5)生根培養(yǎng)基:12MS+IBA05mgL2.方法2.1外植體消毒方法嫩莖用流水沖洗5 h后,于超凈工作臺(tái)上先用70酒精浸泡30 s、0.1的升汞中消毒7min,然后用無(wú)菌水沖洗5次最后將消毒好的材料置于無(wú)菌濾紙上吸干水分。2.2誘導(dǎo)培養(yǎng)將經(jīng)消毒的嫩莖切割成外表面06 cm長(zhǎng),0.6 cm寬帶刺座的接種塊。接入誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,共接10瓶,每7天觀察記錄一次。自選實(shí)驗(yàn):洋蔥、仙人掌的組織培養(yǎng)前言:洋蔥是百合科蔥屬植物,以肉質(zhì)鱗片和鱗芽構(gòu)成產(chǎn)品器官的二年生草本植物,異花受粉 ,異質(zhì)性強(qiáng) ,必須保持高度雜合 ,自交兩三代就失去育性將收獲的新鮮洋蔥球冷藏,然后剝除外皮至直徑為2-3cm,然后對(duì)它進(jìn)行消毒處理;然后在無(wú)菌條件下將消毒處理后的洋蔥球切除成外植體,然后將外
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