HIV篩查實驗室標(biāo)準(zhǔn)操作程序

1、HIV篩查實驗室作業(yè)指導(dǎo)書*醫(yī)院 *醫(yī)院文件編號：SXX*YY- 01-0第 1 頁 共 1 頁作業(yè)指導(dǎo)書第1版 第 1 次修訂頒布時間：20080701標(biāo)題：目錄文件編制人：張* 文件審核發(fā)人：盧* 標(biāo)題 所在頁面HIV樣品接收、登記和處理 P3HIV抗體篩查檢測方法和步驟 P4雷勃 MK3酶標(biāo)儀使用 P5P6雷勃 MK3酶標(biāo)儀維護(hù) P7雷勃 MK2洗板機使用 P8P10雷勃 MK2洗板機維護(hù) P11HIV篩查實驗室質(zhì)量控制 P12P17HIV抗體結(jié)果解釋與報告 P18HIV篩查實驗室保密程序 P19HIV檢測數(shù)據(jù)的記錄與保存 P20P21HIV追蹤與處理 P22P23廢棄物處理和消毒 P2

2、4HIV篩查實驗室安全防護(hù) P25420X電熱恒溫培養(yǎng)箱 P26低速離心機 P27P28 HIV篩查檢測操作規(guī)程及安全防護(hù)制度 P29P40附件：樣品登記本作業(yè)指導(dǎo)書 血清庫登記本作業(yè)指導(dǎo)書 廢棄物處理登記本作業(yè)指導(dǎo)書 儀器設(shè)備使用登記本作業(yè)指導(dǎo)書 檢測人員健康檔案 意外事故登記本作業(yè)指導(dǎo)書 設(shè)備（冰箱、恒溫箱）溫度登記本作業(yè)指導(dǎo)書 差錯登記本作業(yè)指導(dǎo)書 *醫(yī)院文件編號：SXX*YY- 010第 1 頁 共 1 頁作業(yè)指導(dǎo)書第1版 第 1 次修訂頒布時間：20080701標(biāo)題：前言文件編制人：張* 文件審核發(fā)人：盧*為加強艾滋病檢測工作的規(guī)范化、科學(xué)化管理和質(zhì)量控制，確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠

3、性，保證艾滋病檢測實驗室安全，及時有效地發(fā)現(xiàn)HIV感染者和上報疫情，參照全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范【2009】版，結(jié)合我縣疾病控制中心的實際情況，特制定本作業(yè)指導(dǎo)書。本作業(yè)指導(dǎo)書包括以下內(nèi)容：樣品的采集、接收、登記和處理；HIV抗體檢測的方法和程序；儀器的操作維護(hù)和校正；結(jié)果的解釋與報告；實驗室的清理與消毒；保密制度；追蹤與處理；HIV抗體篩查實驗室檢測原始記錄；HIV抗體篩查報告；HIV抗體復(fù)檢化驗單；HIV抗體檢測數(shù)季報表等。本作業(yè)指導(dǎo)書由院辦公室張*起草、檢驗科主任盧*簽發(fā)之日起執(zhí)行。本作業(yè)指導(dǎo)書為HIV抗體篩查實驗室作業(yè)指導(dǎo)書，僅供本中心內(nèi)部使用。 *醫(yī)院 20080701 *醫(yī)院文件編號

4、：SXX*YY- 0101第 1 頁 共 1 頁作業(yè)指導(dǎo)書第1版 第 1 次修訂頒布時間：20080701標(biāo)題：HIV樣品接收、登記和處理編制依據(jù)：全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范【2009年版】文件編制人：張* 文件審核發(fā)人：盧*1. 目的確保HIV樣品安全有效地到達(dá)實驗室。2. 適用范圍本作業(yè)指導(dǎo)書適用于HIV實驗室安全地接收樣品。3. 職責(zé)HIV檢測人員負(fù)責(zé)本作業(yè)指導(dǎo)書的執(zhí)行，院辦公室負(fù)責(zé)監(jiān)督執(zhí)行。4. 步驟4.1 HIV樣品的包裹必須在具有處理感染源設(shè)備的實驗室內(nèi)由經(jīng)過培訓(xùn)的、穿戴防護(hù)衣的工作人員打開，用后的包裹應(yīng)進(jìn)行消毒。4.2 核對樣品與送檢單，檢查樣品管有無破損和溢漏。如發(fā)現(xiàn)溢漏應(yīng)立即將尚

5、存留的樣品移出，對樣品管和盛器消毒，同時報告有關(guān)領(lǐng)導(dǎo)和專家。4.3 檢查樣品的狀況，記錄有無嚴(yán)重溶血、微生物污染、血脂過多以及黃疸等情況。如果污染過重或者認(rèn)為樣品不能被接受，則應(yīng)將樣品安全廢棄。并要將樣品情況立即通知送樣人。4.4 打開標(biāo)本容器時要小心，以防內(nèi)容物潑濺。樣品處理時若內(nèi)容物有可能濺出，則應(yīng)在生物安全柜中戴手套進(jìn)行。同時應(yīng)戴口罩、防護(hù)眼鏡，以防皮膚或粘膜污染。4.5 接收樣品時應(yīng)對樣品進(jìn)行登記。4.6 用于抗體檢測的血清或血漿樣品，應(yīng)存放于-20以下，短期（1 周）內(nèi)進(jìn)行檢測的樣品可存放于2-8*醫(yī)院文件編號：SXX*YY- 0102第 1 頁 共 1 頁作業(yè)指導(dǎo)書第1版 第 1

6、次修訂頒布時間：20080701標(biāo)題：HIV抗體篩查檢測方法和步驟編制依據(jù)：全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范【2009年版】文件編制人：張* 文件審核發(fā)人：盧*1. 目的規(guī)范HIV抗體篩查檢測方法和步驟，確保檢測結(jié)果準(zhǔn)確。2. 適用范圍本作業(yè)指導(dǎo)書適用于HIV抗體檢測。3. 職責(zé)HIV檢測人員負(fù)責(zé)本作業(yè)指導(dǎo)書的執(zhí)行，院辦公室負(fù)責(zé)監(jiān)督執(zhí)行。2. 內(nèi)容：4.1 試驗前儀器、材料的準(zhǔn)備4.1.1 恒溫培養(yǎng)箱 酶標(biāo)儀 微量振蕩器 洗板機 定時鐘4.1.2 HIV抗體檢測ELISA試劑盒4.1.3 050ul，50250ul移液器各一把，配備相應(yīng)干燥潔凈吸嘴1個/人份4.1.4 500ml燒杯1只，500ml量筒

7、一個4.2 試驗開始前將試劑和樣品放置在室溫(1823)4.3 試驗步驟：4.3.1 檢查培養(yǎng)箱溫度是否調(diào)至37 (見培養(yǎng)箱使用 )4.3.2檢查試劑盒是否在有效期內(nèi)使用,檢查試劑文號、批號、有無衛(wèi)生部批檢合格封簽。4.3.3 燒杯內(nèi)裝5000mg/l次氯酸鈉消毒液。4.3.4 從試劑盒中取出反應(yīng)板，按試劑盒內(nèi)說明書操作及判斷結(jié)果。洗板用洗板機操作具體見洗板機操作 注意事項：結(jié)果判斷用酶標(biāo)儀操作具體見酶標(biāo)儀操作 。 *醫(yī)院文件編號：SXX*YY- 0103第 1 頁 共 2 頁作業(yè)指導(dǎo)書第1版 第 1 次修訂頒布時間：20080701標(biāo)題：雷勃 MK3酶標(biāo)儀使用編制依據(jù)：雷勃 MK3酶標(biāo)儀使用

8、說明書文件編制人：張* 文件審核發(fā)人：盧*1. 目的：維護(hù)酶標(biāo)儀的正常工作，規(guī)范酶標(biāo)儀的使用與保養(yǎng)。2. 適用范圍：適用于雷勃 MK2酶標(biāo)儀3. 職責(zé)：HIV檢測人員負(fù)責(zé)本作業(yè)指導(dǎo)書的執(zhí)行，院辦公室負(fù)責(zé)監(jiān)督執(zhí)行。4. 儀器操作：4.1 開機：將酶標(biāo)儀后部的電源開關(guān)打開，儀器自檢完畢顯示“準(zhǔn)備就緒”，如果聯(lián)機電腦是開機狀態(tài)，此時酶標(biāo)儀顯示“正在由計算機控制”，酶標(biāo)儀開機完畢。4.2 點擊電腦桌面上“酶免”圖標(biāo)選擇用戶名，輸入密碼，進(jìn)入酶標(biāo)儀控制軟件。4.3 酶標(biāo)儀軟件操作4.3.1 首次使用應(yīng)在“工具” “測試項目”“增加”中填寫相應(yīng)的“代碼”和“名稱”均為“HIV”，“處理方法”設(shè)置為“定性計

9、算1”，然后按“確認(rèn)”。并在“工具” “試劑”“增加”中填寫相應(yīng)的試劑信息（批號等信息），然后按“確認(rèn)”。4.3.2 依次選擇“常用設(shè)置”“測量規(guī)劃” “樣本設(shè)置”中選擇需要的參數(shù)，在“測量試劑”中選擇合適的試劑，最后點設(shè)置，依次類推。并在“測量1”對波長進(jìn)行設(shè)置，選“450NM”。4.3.3 需要插入步驟的選“選項” “插入步驟”“震動步驟”，根據(jù)需要選擇。4.3.4 板子布局根據(jù)試驗中板子的布局,先選定所要確定的標(biāo)本類型，然后在對應(yīng)的板孔位置左鍵點擊，例如A1孔是空白，先選擇標(biāo)本類型為空白，再左鍵點擊A1孔就可以了，定好的布局在試劑盒不變的情況下可以存為模版，以后可以在模版的下拉框直接選擇

10、就可以使用了，確定板子的布局與實際情況相符，將板子放在樣品盤上，可以點擊“測量”*醫(yī)院文件編號：SXX*YY- 0103第 2 頁 共 2 頁作業(yè)指導(dǎo)書第1版 第 1 次修訂頒布時間：20080701標(biāo)題：雷勃 MK3酶標(biāo)儀使用編制依據(jù)：雷勃 MK3酶標(biāo)儀使用說明書文件編制人：張* 文件審核發(fā)人：盧*酶標(biāo)儀會自動測量各孔的SOD值并判斷結(jié)果。4.3.5 樣品的錄入 在“常用設(shè)置” “測試樣本”可以錄入對應(yīng)標(biāo)本的性別、年齡、送檢科室、樣品來源、送檢醫(yī)生、標(biāo)本等。結(jié)果查詢及打印在“文件” “打開”中可以根據(jù)日期和酶標(biāo)板號批量打印報告。4.5 質(zhì)量控制5.1 質(zhì)控血清的設(shè)定在工具質(zhì)控維護(hù)中輸入質(zhì)控血

11、清的靶值、SD值、批號、濃度、測量方法等信息。6 注意事項6.1 保養(yǎng)6.1.21 為保證儀器持續(xù)的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性，應(yīng)避免干擾光學(xué)系統(tǒng)的任何部件。光路調(diào)校錯誤會影響測量結(jié)果。6.1.2保持光學(xué)系統(tǒng)的清潔，以確保正常功能和結(jié)果的準(zhǔn)確，應(yīng)避免任何液體流入儀器內(nèi)部，并防塵、防止其它外源性物資，不要用手指摸透鏡表面、慮光鏡、光電監(jiān)測器。6.1.3儀器的常規(guī)清潔應(yīng)該關(guān)閉儀器并拔掉插頭，使用一次性手套，用一次性擦布沾水或溫和去污劑，清潔儀器外部、導(dǎo)軌和板架。6.1.4 儀器的工作環(huán)境溫度應(yīng)在1030，相對濕度不超過80，存儲環(huán)境溫度應(yīng)該在040，儀器應(yīng)放在沒有讓陽光直曬、表面平坦且空間足夠的工作臺上。6.

12、2 儀器使用完畢要及時關(guān)機。*醫(yī)院文件編號：SXX*YY- 0104第 1 頁 共 1 頁作業(yè)指導(dǎo)書第1版 第 1 次修訂頒布時間：20080701標(biāo)題：雷勃 MK3酶標(biāo)儀維護(hù)編制依據(jù)：雷勃 MK3酶標(biāo)儀使用說明書文件編制人：張* 文件審核發(fā)人：盧*醫(yī)院文件編號：SXX*YY- 0105第 1 頁 共 3 頁作業(yè)指導(dǎo)書第1版 第 1 次修訂頒布時間：20080701標(biāo)題：雷勃 MK2洗板機使用編制依據(jù)：儀器使用說明書文件編制人：張* 文件審核發(fā)人：盧*1. 目的：維護(hù)洗板機的正常工作，規(guī)范洗板機的使用與保養(yǎng)。2. 適用范圍：雷勃 MK2洗板機3. 職責(zé)：HIV檢測人員負(fù)責(zé)本作業(yè)指導(dǎo)書的執(zhí)行，院

13、辦公室負(fù)責(zé)監(jiān)督執(zhí)行4. 操作步驟4.1設(shè)置 在關(guān)機狀態(tài)下，按照試劑盒說明書設(shè)置洗滌卡程序，并將設(shè)置好程序的卡插入卡位。4.2開機 打開儀器電源開關(guān)，等儀器初始化結(jié)束后儀器顯示就緒，可以進(jìn)行下一步操作。4.3 沖洗 第一次按“Prime”鍵等待儀器自檢完成。4.4 運行根據(jù)酶標(biāo)板的數(shù)量設(shè)置洗板的行數(shù)(數(shù)字鍵代表酶標(biāo)板的行數(shù)) ，放置好酶標(biāo)板后，按“Start”按鈕開始洗板。4.5 關(guān)機4.5.1 日常關(guān)機 最后一次洗板結(jié)束后將電源開關(guān)置于OFF位。 *醫(yī)院文件編號：SXX*YY- 0105第 1 頁 共 3 頁作業(yè)指導(dǎo)書第1版 第 1 次修訂頒布時間：20080701標(biāo)題：雷勃 MK2洗板機使用

14、編制依據(jù)：儀器使用說明書文件編制人：張* 文件審核發(fā)人：盧*4.5.2 長期關(guān)機 將長時間不使用洗板機時，先用蒸餾水沖洗一遍整個系統(tǒng)，再進(jìn)行日常關(guān)機；保持液體瓶干燥，以免清洗液中的緩沖鹽類結(jié)晶而堵塞清洗頭。3. 儀器使用注意事項6.1 操作前 必須嚴(yán)格按照儀器安裝說明安裝儀器，保證正確連接管路，以免出現(xiàn)滲漏。洗板機長期不用后再度使用時，需要預(yù)洗整個系統(tǒng)四次。6.2操作中6.2.1 按下運行鍵前，需確認(rèn): 已經(jīng)裝上正確清洗頭。 酶標(biāo)板已正確放置 已選擇適當(dāng)?shù)某绦蚣皡?shù)值。 6.2.2 應(yīng)及時傾倒廢液。 6.2.3 如果儀器表面有生物危險物資污染，用中性消毒液清潔。 6.2.4 保持滑道的清潔干燥

15、，避免堵塞；若有液體濺出，及時擦干。 *醫(yī)院文件編號：SXX*YY- 0105第 1 頁 共 3 頁作業(yè)指導(dǎo)書第1版 第 1 次修訂頒布時間：20080701標(biāo)題：雷勃 MK2洗板機使用編制依據(jù)：儀器使用說明書文件編制人：張* 文件審核發(fā)人：盧*6.2.5 在洗板過程中，如需儀器停止運行，請按鍵盤上的復(fù)位鍵，不要用手或物體強制儀器停止運行。4. 儀器的保養(yǎng) 安放和運行儀器時避免陽光直射，且避開熱源，以免影響儀器壽命。 經(jīng)常用軟布和中性清洗液擦洗儀器；儀器使用時及時擦去潑在滑道上的液體，以免造成機械堵塞。 *醫(yī)院文件編號：SXX*YY- 0106第 1 頁 共 1 頁作業(yè)指導(dǎo)書第1版 第 1 次

16、修訂頒布時間：20080701標(biāo)題：雷勃 MK2洗板機維護(hù)編制依據(jù)：洗板機規(guī)程文件編制人：張* 文件審核發(fā)人：盧* *醫(yī)院文件編號：SXX*YY- 0108第 1 頁 共 6 頁作業(yè)指導(dǎo)書第1版 第 1 次修訂頒布時間：20080701標(biāo)題：HIV篩查實驗室質(zhì)量控制 編制依據(jù)：全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范【2009年版】文件編制人：張* 文件審核發(fā)人：盧*1. 目的： 建立艾滋病實驗室質(zhì)量控制,保證HIV實驗室檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。2適用范圍：HIV實驗室所有樣品篩查和復(fù)查的質(zhì)量控制。3. HIV檢測人員負(fù)責(zé)本作業(yè)指導(dǎo)書的執(zhí)行，院辦公室負(fù)責(zé)監(jiān)督執(zhí)行4 質(zhì)量控制（QC）4.1 質(zhì)控血清的制備和保存（以EL

17、ISA 試驗檢測HIV 抗體為例）在每次實驗中必須包含有內(nèi)部對照質(zhì)控血清和外部對照質(zhì)控血清。內(nèi)部對照質(zhì)控血清指試劑盒內(nèi)提供的陽性和陰性對照血清。內(nèi)部對照是質(zhì)量控制的基礎(chǔ)。每一次檢測必須使用內(nèi)部對照，而且只能在同批號的試劑盒中使用。外部對照質(zhì)控血清是為了監(jiān)控檢測的重復(fù)性和穩(wěn)定性以及試劑盒批間或孔間差異而由實驗室設(shè)置的一套對照血清，包括強陽性、弱陽性和陰性對照血清。也可以只設(shè)置一個弱陽性對照，以該試劑盒臨界值（Cut-off）的2-3 倍為宜。4.1.1 外部對照質(zhì)控血清的制備HIV 抗體陽性和陰性血清，56 30min 滅活，3000r/min，離心15min。弱陽性對照可以用HIV 抗體陰性血

18、清梯度稀釋HIV 抗體強陽性血清并標(biāo)定后得到。按一年使用量配制（可加入不影響檢測結(jié)果的防腐劑）用0.2m 濾膜過濾除菌。4.1.2 外部對照質(zhì)控血清的保存4.1.2.1 按一周實驗用量分裝、分類、標(biāo)記、封口、-20凍存于非自動除霜冰箱中。4.1.2.2 外部對照血清不可反復(fù)凍融，一旦融化后應(yīng)該存放28，供一周內(nèi)使用。4.1.3 外部對照質(zhì)控血清的使用每一次實驗必須使用外部對照質(zhì)控血清，以便監(jiān)控實驗的重復(fù)性和穩(wěn)定性。同時可以了解各批試劑盒的批間或孔間差異，繪制質(zhì)量控制圖。4.1.4 外部對照質(zhì)控物的質(zhì)量要求質(zhì)控物的管間或瓶間變異必須小于監(jiān)測系統(tǒng)預(yù)期的變異（cv20%，并且質(zhì)控物的成分應(yīng)在穩(wěn)定狀態(tài)

19、中。質(zhì)控物應(yīng)無菌，并不含有影響ELISA 反應(yīng)的防腐劑。 *醫(yī)院文件編號：SXX*YY- 0108第2 頁 共6 頁作業(yè)指導(dǎo)書第1版 第 1 次修訂頒布時間：20080701標(biāo)題：HIV篩查實驗室質(zhì)量控制編制依據(jù)：全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范【2009年版】文件編制人：張* 文件審核發(fā)人：盧*4.2 質(zhì)控圖的建立及應(yīng)用（以ELISA 試驗檢測HIV 抗體為例）最常用的質(zhì)控圖是Levey-Jennings 質(zhì)控圖，使用累計和技術(shù)或趨勢分析技術(shù)的圖形可提供系統(tǒng)偏移和漂移的狀況。4.2.1 建立質(zhì)控圖參數(shù)外部對照質(zhì)控物的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)建立在實驗室常規(guī)使用方法對質(zhì)控物重復(fù)測定的基礎(chǔ)上。一般采用在不同批次檢

20、測取得至少20 個數(shù)據(jù)；如果僅做少量批次的檢測，也至少做5 個批次的檢測，每個批次中不少于4 個質(zhì)控物測定結(jié)果，以建立一個臨時性的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差，當(dāng)達(dá)到20 批次數(shù)據(jù)后，替代臨時性的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。4.2.1.1 算術(shù)平均值（）： 代表一組S/CO 值的平均值。為了統(tǒng)計學(xué)上有顯著性意義，應(yīng)該采用至少20 次(天)所測得的外部對照質(zhì)控血清S/CO 值結(jié)果計算出平均值。4.2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)差(s)：是描述樣品與均數(shù)之間離散程度的一個指標(biāo)，是與對照質(zhì)控血清S/CO 值均值有關(guān)的預(yù)期范圍。一組S/CO 值的標(biāo)準(zhǔn)差以s 表示。4.2.1.3 變異系數(shù)(cv)：是反映各次S/CO 值相對于均值離散程度的一

21、個指標(biāo)，可以用來衡量檢測的重復(fù)性或精密度。4.2.1.4 控制限：由實驗室根據(jù)對質(zhì)控物檢測結(jié)果的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差來確定。例如12S 質(zhì)控規(guī)則的控制限為外部對照S/CO 平均值加減2 個標(biāo)準(zhǔn)差；13S 質(zhì)控規(guī)則的控制限為外部對照S/CO 平均值加減3 個標(biāo)準(zhǔn)差。4.2.2 繪制質(zhì)控圖質(zhì)控圖是把檢測數(shù)據(jù)與已確定的（計算出的）“控制限”進(jìn)行比較的圖，包含一條中心橫線和其上、下兩條平行的控制線，并按時間順序點入本實驗室每次試驗質(zhì)控血清的測定值。 *醫(yī)院文件編號：SXX*YY- 0108第 3 頁 共 6 頁作業(yè)指導(dǎo)書第1版 第 1 次修訂頒布時間：20080701標(biāo)題：HIV篩查實驗室質(zhì)量控制編制依據(jù)：

22、全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范【2009年版】文件編制人：張* 文件審核發(fā)人：盧*質(zhì)控圖的繪制步驟：4.2.2.1 在常規(guī)條件下，對同一批血清連續(xù)測定20 次（天）或以上，獲得一組S/CO 值，求均數(shù)( )和標(biāo)準(zhǔn)差(s), 超出2s 或3s 的數(shù)據(jù)不應(yīng)刪除。4.2.2.2 將均值( )和標(biāo)準(zhǔn)差(s)分別在質(zhì)控框架圖中標(biāo)示出來。以S/CO 值作縱座標(biāo)(Y 軸)，每一次(天)試驗作橫座標(biāo)(x 軸)，繪制質(zhì)控圖。4.2.2.3 從第21 次起，將每次質(zhì)控血清的檢測結(jié)果依次點入該質(zhì)控框架圖中，檢驗進(jìn)入質(zhì)控狀態(tài)。4.2.3 質(zhì)控規(guī)則及使用實驗室在報告實驗結(jié)果之前必須評價質(zhì)控數(shù)據(jù)，可通過圖形記錄的檢查或由計算機審

23、核結(jié)果來決定。目前許多質(zhì)控規(guī)則已被采用，常用的是12S 和13S 規(guī)則。4.2.3.1 告警（12S）：當(dāng)外部對照的S/CO 值超出x +2s 范圍時，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，是否可以繼續(xù)檢測需要進(jìn)一步觀察。若將12S 做失控標(biāo)準(zhǔn)，有較高的假失控概率，所以一般不采用。4.2.3.2 失控（13S）：當(dāng)外部對照的S/CO 值超出x +3s 范圍時，系統(tǒng)處于失控狀態(tài)，本次實驗結(jié)果不能被接受，可能是系統(tǒng)誤差、隨機誤差或外部對照滴度下降造成。4.2.3.3 位移：連續(xù)幾次（35 次）外部對照S/CO 值都落在均值的一側(cè)則稱為位移，提示實驗條件發(fā)生了較大的變化。4.2.3.4 趨勢：連續(xù)幾次（57

24、次）外部對照S/CO 值幾乎按一個方向分布時稱為趨勢，通常由參數(shù)的緩慢改變引起。 *醫(yī)院文件編號：SXX*YY- 0108第 4 頁 共 6 頁作業(yè)指導(dǎo)書第1版 第 1 次修訂頒布時間：20080701標(biāo)題：HIV篩查實驗室質(zhì)量控制編制依據(jù)：全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范【2009年版】文件編制人：張* 文件審核發(fā)人：盧*質(zhì)控規(guī)則的使用應(yīng)檢出隨機誤差和系統(tǒng)誤差，即具有高的檢出分析誤差的能力，同時應(yīng)具有較低的假失控概率?？疾煸囼炏到y(tǒng)的可靠性應(yīng)采用多標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控方案，多規(guī)則質(zhì)控方法能提高誤差檢出，并具有低的假失控概率。其要點為：出現(xiàn)一次2s 范圍的變化時，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，是否可以繼續(xù)檢測需要進(jìn)一步

25、觀察。出現(xiàn)下列情況時，應(yīng)暫停檢測查找原因：出現(xiàn)一次3s 范圍的變化、連續(xù)兩次出現(xiàn)同一方向2s 范圍的變化、連續(xù)四次出現(xiàn)同一方向的1s 范圍的變化、連續(xù)10 次結(jié)果都在1s 范圍內(nèi)，但落在均值線的同一側(cè)。4.2.4 質(zhì)控圖的分析及失控處理實驗室應(yīng)建立質(zhì)控圖分析及失控情況處理程序。當(dāng)質(zhì)控已有計劃并恰當(dāng)?shù)貓?zhí)行時，要求可靠的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差用于計算質(zhì)控限，將假失控概率降到最低。當(dāng)出現(xiàn)失控時進(jìn)行如重復(fù)質(zhì)控測定或重新分析新的質(zhì)控物不是最有效的方法，必須找出問題原因，找出解除故障的方法，并消除原因，防止將來出現(xiàn)同樣的問題。4.2.5 繪制和分析質(zhì)控圖的要點4.2.5.1 要在常規(guī)條件下建立質(zhì)控圖參數(shù)，用S/C

26、O 比值繪制質(zhì)控圖。對同一批質(zhì)控物連續(xù)測定得到20 個數(shù)據(jù)，求均值( )和標(biāo)準(zhǔn)差(s), 超出2s 或3s 的數(shù)據(jù)不應(yīng)刪除。4.2.5.2 由專人負(fù)責(zé)建立質(zhì)控圖，每月定期召開質(zhì)控分析會，討論本月的質(zhì)量控制情況。 *醫(yī)院文件編號：SXX*YY- 0108第 5頁 共 6 頁作業(yè)指導(dǎo)書第1版 第 1 次修訂頒布時間：20080701標(biāo)題：HIV篩查實驗室質(zhì)量控制編制依據(jù)：全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范【2009年版】文件編制人：張* 文件審核發(fā)人：盧*4.2.5.3 建議長期和穩(wěn)定地使用一種質(zhì)量好的試劑盒，更換不同廠家的試劑盒后，必須重新繪制質(zhì)控圖。改用新批號試劑盒也應(yīng)重新制作質(zhì)控圖。使用新批號或不同廠家

27、的試劑盒必須在質(zhì)控圖上注明使用日期。4.2.5.4 發(fā)現(xiàn)質(zhì)控結(jié)果失控，應(yīng)填寫報告單，上交質(zhì)量負(fù)責(zé)人，分析原因并決定是否發(fā)出檢測報告。4.2.5.5 使用新批次的外部對照質(zhì)控物時，必須重新繪制質(zhì)控圖。變異系數(shù)(cv)小于20，表示外部對照處于穩(wěn)定狀態(tài)。4.3 “即刻法”質(zhì)控“即刻法”質(zhì)控方法是在對同一批外部質(zhì)控血清連續(xù)測定3 次后，即可對第3 次檢驗結(jié)果進(jìn)行質(zhì)控。具體計算方法如下：4.3.1 將質(zhì)控血清的測定值從小到大排列：x1，x2，x3xn(x1 為最小值，xn 為最大值)。 *醫(yī)院文件編號：SXX*YY- 0108第 6頁 共 6 頁作業(yè)指導(dǎo)書第1版 第 1 次修訂頒布時間：2008070

28、1標(biāo)題：HIV篩查實驗室質(zhì)量控制編制依據(jù)：全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范【2009年版】文件編制人：張* 文件審核發(fā)人：盧*4.3.4 將. SI上限、SI下限與. SI值表中的數(shù)字比較。SI值表（1）當(dāng)SI上限和SI下限<n2s時表示處于控制范圍內(nèi)，可以繼續(xù)測定。繼續(xù)重復(fù)以上各項計算。（2）當(dāng). SI上限和. SI下限有一值處于. n 2sn3s值之間時說明該值在. 2s 3s范圍，處于“告警”狀態(tài)。（3）當(dāng)SI上限和SI下限有一值> n 3s值時說明該值已在3s范圍之外，屬“失控”。數(shù)值處于“告警”和“失控”狀態(tài)應(yīng)舍去，需重新測定該質(zhì)控血清和病人樣品。舍去的只是失控的這次數(shù)值，其它測定

29、值仍可繼續(xù)使用。. *醫(yī)院文件編號：SXX*YY- 0109第 1頁 共 1 頁作業(yè)指導(dǎo)書第1版 第 1 次修訂頒布時間：20080701標(biāo)題：HIV抗體檢測結(jié)果解釋和報告編制依據(jù)：全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范【2009年版】文件編制人：張* 文件審核發(fā)人：盧*1.目的：及時準(zhǔn)確的報告HIV檢測結(jié)果、追蹤和處理HIV抗體陽性者，做好醫(yī)學(xué)、法律、生活等各方面的解釋工作。2. 適用范圍： HIV實驗室對檢測結(jié)果的報告與解釋。3. 職責(zé)：HIV檢測人員負(fù)責(zé)本作業(yè)指導(dǎo)書的執(zhí)行，院辦公室負(fù)責(zé)監(jiān)督執(zhí)行4.內(nèi)容 篩查試驗陽性不能出陽性報告，可出具“HIV 抗體待復(fù)查”報告。 對呈陰性反應(yīng)的樣品，可由實施檢測的實驗

30、室在10個工作日內(nèi)出具HIV 抗體陰性報告。 對篩查呈陽性反應(yīng)的樣品用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠家的篩查試劑重復(fù)檢測。如兩種試劑復(fù)測均呈陰性反應(yīng)，則報告HIV 抗體陰性；如均呈陽性反應(yīng)，或一陰一陽，需送艾滋病確認(rèn)實驗室進(jìn)行確認(rèn)。 如需送上級實驗室進(jìn)行復(fù)測或確認(rèn)，需要填寫“HIV 抗體復(fù)測送檢單”，經(jīng)1 名檢驗人員和1 名具有中級以上技術(shù)職稱的人員審核簽字。送當(dāng)?shù)匕滩『Y查中心實驗室，再轉(zhuǎn)送艾滋病確認(rèn)實驗室，或在本實驗室復(fù)檢后直接送確認(rèn)實驗室。 對篩查陰性和陽性者，均需做好檢測后咨詢。 *醫(yī)院文件編號：SXX*YY- 0110第 1頁 共 1 頁作業(yè)指導(dǎo)書第1版 第 1 次修訂頒布時間：

31、20080701標(biāo)題：HIV抗體檢測篩查實驗室保密制度編制依據(jù)：全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范【2009年版】文件編制人：張* 文件審核發(fā)人：盧*1. 目的:檢測人員做好保密工作2. 適用范圍:HIV處篩實驗室檢測過程和結(jié)果3. 職責(zé)：HIV檢測人員負(fù)責(zé)本作業(yè)指導(dǎo)書的執(zhí)行，院辦公室負(fù)責(zé)監(jiān)督執(zhí)行4. *醫(yī)院HIV抗體檢測篩查實驗室由專人負(fù)責(zé)妥善保存各種實驗記錄、感染者檔案，不得擅自修改和銷毀；嚴(yán)格遵守保密制度，未經(jīng)*醫(yī)院主任本人書面通知不得向本中心任何與HIV抗體檢測篩查實驗室無關(guān)人員及領(lǐng)導(dǎo)提供任何情況；未經(jīng)省級衛(wèi)生行政主管部門許可，*醫(yī)院不得向無關(guān)人員或單位提供任何情況。5. *醫(yī)院HIV抗體檢測篩查

32、實驗室檢測的陽性結(jié)果不是最終結(jié)果，應(yīng)及時作出進(jìn)一步確認(rèn)，本篩查實驗室不能出具HIV抗體陽性的結(jié)果報告，更不能告知受檢者本人。6. *醫(yī)院HIV抗體檢測篩查實驗室得到浙江省HIV抗體檢測確認(rèn)實驗室確認(rèn)的以機密級向本篩查實驗室出具的陽性結(jié)果后，應(yīng)立即報告紹興縣衛(wèi)生局，在對陽性者告知檢測結(jié)果時要先做好法律、醫(yī)學(xué)、生活等方面的咨詢。7. 所有經(jīng)確認(rèn)的陽性標(biāo)本，包括在實驗室內(nèi)留存的標(biāo)本，應(yīng)送浙江省疾病預(yù)防控制中心HIV抗體確認(rèn)中心保存，不得擅自處理。標(biāo)本保存時間最少5年。 檢驗原始記錄與保存 文件編號：SXX*YY- 0111*醫(yī)院HIV抗體篩查實驗室檢 驗 原 始 記 錄HIV抗體篩查第 頁 共 頁

33、編號：一、 準(zhǔn)備實驗日期：樣品來源：樣品名稱：樣品性狀： 樣品編號：檢驗依據(jù)：所用試劑：試劑廠家： 產(chǎn)品批號：有效期至： 實驗室溫度：培養(yǎng)箱溫度：洗板機型號： 雷勃 MK2 洗板機產(chǎn)地： 酶標(biāo)儀型號： 雷勃 MK3酶標(biāo)儀產(chǎn)地:： 將試劑盒從冰箱中取出，置室溫平衡30分鐘。將所需數(shù)量的反應(yīng)條孔排列于反應(yīng)板上。二、 操作1. 反應(yīng)板每孔加稀釋液 ul。2. 本次實驗待測標(biāo)本作業(yè)指導(dǎo)書 個，每孔加標(biāo)本血清 ul 設(shè)陰性對照 孔，每孔加陰性對照血清 ul。設(shè)陽性對照 孔，每孔加陽性對照血清 ul。設(shè)外部質(zhì)控 孔 ，每孔加質(zhì)控血清 ul。用膠紙封板后放培養(yǎng)箱 分鐘。3. 將濃縮洗滌液稀釋 倍：取濃縮洗滌

34、液 ml，加蒸溜水至 ml混勻。開啟洗板機電源預(yù)熱。4. 反應(yīng)板從培養(yǎng)箱中取出，用洗板機洗板：每孔加洗滌液400ul，浸泡 秒后吸出，如此洗滌 遍,將反應(yīng)板在吸水紙上拍干。5. 每孔加顯色劑A、B各50ul，輕拍混勻，膠紙封板后放培養(yǎng)箱 分鐘。開啟酶標(biāo)儀預(yù)熱。6. 取出反應(yīng)板，每孔加終止液 ul混勻，中止反應(yīng)。7. 用酶標(biāo)儀比色：比色波長450nm,參比波長620nm。比色結(jié)果見附表。 （樣品排列及實驗結(jié)果見背面） *醫(yī)院HIV抗體篩查實驗室檢 驗 原 始 記 錄HIV抗體篩查第 頁 共 頁 編號：三、 實驗結(jié)果 123456789101112ABCDEFGHNC： NCx:PC1: PCx:

35、Cutoff:結(jié)論： 檢測者： 復(fù)核者： 年 月 日 年 月 日 *醫(yī)院文件編號：SXX*YY- 0112第 1頁 共 2 頁作業(yè)指導(dǎo)書第1版 第 1 次修訂頒布時間：20080701標(biāo)題：HIV追蹤與處理 編制依據(jù)：全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范【2009年版】文件編制人：張* 文件審核發(fā)人：盧*1. 目的：規(guī)范相關(guān)樣品的處理2. 適用范圍：HIV抗體陰性而近期有過高危行為者的樣品、灰區(qū)的樣品、不確定的樣品、HIV抗體陽性的樣品、3. 職責(zé)：3.1 實驗室操作人員按照本規(guī)則進(jìn)行樣品的追蹤與處理3.2 科室負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)綜合管理。4. 操作程序4.1樣品的范圍：4.1.1HIV抗體陰性而近期有過高危行為者

36、，為排除窗口期感染的可能，報告中必須注明每三個月復(fù)查一次，連續(xù)兩次，并做好記錄通知樣品來源單位。HIV抗體灰區(qū)的樣品為排除窗口期感染可能，報告中每三個月復(fù)查一次，連續(xù)兩次，并做好記錄通知樣品來源單位。收到不確定報告單，做好記錄并復(fù)印一份報告單送流調(diào)人員。收到陽性報告單，做好記錄并復(fù)印一份報告單送流調(diào)人員。 *醫(yī)院文件編號：SXX*YY- 0109第 2頁 共 2 頁作業(yè)指導(dǎo)書第1版 第 1 次修訂頒布時間：20080701標(biāo)題：HIV追蹤與處理 編制依據(jù)：全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范【2009年版】文件編制人：張* 文件審核發(fā)人：盧*對發(fā)現(xiàn)并報告的HIV感染者和AIDS病人，由疾病控制科進(jìn)行首次流行

37、病學(xué)調(diào)查。對既往的HIV感染者和AIDS病人，定期進(jìn)行隨訪。對HIV感染者和AIDS病人密切接觸者進(jìn)行調(diào)查隨訪，勸其采樣檢查，并做好記錄。嚴(yán)格保密制度，不得向無關(guān)人員泄露有關(guān)信息。耐心溝通，樹立良好的醫(yī)德和職業(yè)道德。細(xì)心隨訪，加強宣傳教育，讓他們?nèi)媪私釮IV預(yù)防知識及傳播途徑，樹立對己、對家庭、對社會的高度責(zé)任感。HIV陽性標(biāo)本的記錄按規(guī)定妥善保存（標(biāo)本類型、數(shù)量、存儲溫度、時間、保管人等）。試驗原始記錄、檢測記錄、標(biāo)本登記等各種文件記錄應(yīng)妥善保存5年以上。同時使用計算機保存各種文件和記錄。 *醫(yī)院文件編號：SXX*YY- 0113第 1頁 共 1 頁作業(yè)指導(dǎo)書第1版 第 1 次修訂頒布時間

38、：20080701標(biāo)題：HIV抗體檢測篩查實驗室廢棄物品消毒處理 編制依據(jù)：全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范【2009年版】文件編制人：張* 文件審核發(fā)人：盧*目的：防止試驗后廢棄物污染環(huán)境適用范圍： 適用于HIV試驗后廢棄物安全操作指南消毒隔離過程中要嚴(yán)格注意自身保護(hù)和防止污染。1. 血液標(biāo)本置于合適容器內(nèi)，加蓋蓋緊后運送，切勿污染盛器外部。如果盛器被污染，要用消毒液消毒。也可將血樣置于有蓋的塑料管內(nèi)，外面套上塑料袋，封口，連同送檢單一并運送，有血液外溢時，立即用消毒液消毒；2. 各種試劑和化學(xué)品均應(yīng)貼有標(biāo)簽，放置于合適的位置，實驗臺上不放置不必要的物品。任何測試用的樣品和試劑不宜置于桌面或架子的邊沿

39、，以防滑落打破，污染環(huán)境。一旦污染，先在污染區(qū)外周圍倒入消毒液，逐漸向中心消毒處理；3. 實驗室所有垃圾，包括用過的一次性手套和工作衣，置于專門污物袋內(nèi)，經(jīng)焚燒或有效消毒處理后丟棄，污染的非一次性工作衣應(yīng)先消毒后再洗滌；4. 所有用過的實驗用品，尤其是血樣管和血液標(biāo)本先在實驗室內(nèi)消毒，再移出清洗，待消毒后再用；5. 所有尖銳物品應(yīng)置于不宜刺破的容器內(nèi)，消毒后用合適的方法處理；6. 常用的消毒劑和消毒方法與病毒性肝炎消毒法相同。 *醫(yī)院文件編號：SXX*YY- 0114第 1頁 共 1 頁作業(yè)指導(dǎo)書第1版 第 1 次修訂頒布時間：20080701標(biāo)題：HIV實驗室生物安全防護(hù)編制依據(jù)：全國艾滋病

40、檢測技術(shù)規(guī)范【2009年版】文件編制人：張* 文件審核發(fā)人：盧*1. 目的：保護(hù)HIV檢測人員的身體健康，控制傳染源的交叉污染。2. 適用范圍： HIV實驗室的生物安全防護(hù)3. 職責(zé)：HIV檢測人員負(fù)責(zé)本作業(yè)指導(dǎo)書的執(zhí)行，院辦公室負(fù)責(zé)監(jiān)督執(zhí)行4. 內(nèi)容： 建立生物安全制度及相關(guān)的 （包括：廢棄物處置和消毒 、職業(yè)暴露 ） HIV檢測人員按規(guī)定接種乙肝、甲肝等相關(guān)疫苗。 HIV檢測人員進(jìn)入實驗室前在清潔區(qū)穿好隔離衣、戴好手套、防護(hù)眼鏡。 實驗室中用移液器操作所有的液體。 操作中如有標(biāo)本、檢測試劑外濺，及時用浸有1次氯酸鈉溶液的抹布擦拭干凈，如濺出的液體量大、濃度高先用1次氯酸鈉溶液浸泡半小時以后

41、再戴上手套擦凈。 試驗完畢后，脫去手套后洗手，再脫去防護(hù)眼鏡、隔離衣，用肥皂和流動水洗手。 *醫(yī)院文件編號：SXX*YY- 0115第 1頁 共 1 頁作業(yè)指導(dǎo)書第1版 第 1 次修訂頒布時間：20080701標(biāo)題：420X電熱恒溫培養(yǎng)箱 編制依據(jù)：420X電熱恒溫培養(yǎng)箱使用說明書文件編制人：張* 文件審核發(fā)人：盧*1.目的：規(guī)范培養(yǎng)箱的操作，維護(hù)其正常工作。2.適用范圍：420X電熱恒溫培養(yǎng)箱3.職責(zé)：HIV檢測人員負(fù)責(zé)本作業(yè)指導(dǎo)書的執(zhí)行，院辦公室負(fù)責(zé)監(jiān)督執(zhí)行4.步驟4.1按電源開關(guān)，電源按鈕按向“ON”表示電源接通。4.2 指針顯示器：顯示測量溫度。4.3 如需改變溫度旋轉(zhuǎn)溫度控制，旋轉(zhuǎn)至

42、所需要的溫度。 *醫(yī)院文件編號：SXX*YY- 0116第 1頁 共 2 頁作業(yè)指導(dǎo)書第1版 第 1 次修訂頒布時間：20080701標(biāo)題：低速離心機 編制依據(jù)：低速離心機使用說明書文件編制人：張* 文件審核發(fā)人：盧*1.目的：維護(hù)離心機的正常工作，規(guī)范離心機的使用與保養(yǎng)。2.適用范圍：低速離心機3.職責(zé)：HIV檢測人員負(fù)責(zé)本作業(yè)指導(dǎo)書的執(zhí)行，院辦公室負(fù)責(zé)監(jiān)督執(zhí)行4.內(nèi)容4.1低速離心機的控制面板：序號名稱功能說明1顯示窗口顯示相關(guān)數(shù)據(jù)2定時設(shè)定鍵用于樣品離心所需時間的設(shè)定3轉(zhuǎn)速設(shè)定鍵用于樣品離心過程中所需轉(zhuǎn)速的設(shè)定4設(shè)定確認(rèn)鍵用于在每次設(shè)定參數(shù)后的確認(rèn)5R 鍵此為功能預(yù)留鍵，按此鍵無任何作用6M 鍵此為功能預(yù)留鍵，按此鍵無任何作用7離心力顯示鍵按此鍵，顯示當(dāng)前轉(zhuǎn)速下的離心力8數(shù)字鍵用于對設(shè)定參數(shù)的修改9啟動鍵按此鍵離心機開始運轉(zhuǎn)10停機鍵按此鍵離心機停止運轉(zhuǎn)設(shè)定說明：打開電源開關(guān)后，離心機顯示出廠前的設(shè)定值，如果需要重新設(shè)定按如下操作：定時設(shè)定：按定時設(shè)定鍵，然后輸入所需的時間。轉(zhuǎn)速設(shè)定： *醫(yī)院文件編號：SXX*YY- 0116第 2頁 共 2 頁作業(yè)指導(dǎo)書第1版 第 1