ISO-15189實驗室認(rèn)可性能驗證方案

1、醫(yī)學(xué)實驗室 ISO 15189 認(rèn)可性能驗證實驗方案 為了滿足目前醫(yī)學(xué)實驗室認(rèn)可的需求保證實驗室檢測結(jié)果的準(zhǔn) 確性，特制定本方案。適用于強(qiáng)生 VlTRoS產(chǎn)品的試驗項目的性能驗 證，包括 V250/V350/V950/FS5.1/V3600/V5600 上所能開展的所有定 性檢測項目。本方案從準(zhǔn)確度、精密度、參考范圍、線性范圍以及方 法學(xué)比對 5個方面對各個試驗項目進(jìn)行評價。一、 精密度 （Precision ）：精密度是指在規(guī)定條件下所獲得的檢測結(jié)果的接近程度， 表示測定結(jié)果中隨機(jī)誤差大小程度的指標(biāo)。 精密度通常用不精密度表示。 可以分別評價連續(xù)精密度 （批內(nèi)精密度）、 重復(fù)性不精密度（中間

2、精密度，包括批間、日間精密度等）和再現(xiàn)性 精密度。本方案采用批內(nèi)和天間兩種方法對各個試驗項目的精密度進(jìn) 行評價。全部實驗過程使用同批號試劑和質(zhì)控品， 并且保證檢測當(dāng)日 質(zhì)控在控。1、 批內(nèi)精密度（連續(xù)精密度）：方法： 在檢測患者標(biāo)本過程中，連續(xù)運行高低水平質(zhì)控品各20 次，記錄檢測結(jié)果。計算批內(nèi)精密度的 CV值和SD值。結(jié)果評價（1）廠家評價標(biāo)準(zhǔn)：計算精密度指數(shù)=驗證SD/廠商SD 精密度指數(shù)要求小于等于1,或者實測CV小于等于廠家要求的CV 兩者符合其一即可。具體見精密度評價表格。（2）按照國際推薦標(biāo)準(zhǔn)：批內(nèi)精密度應(yīng)在 CLIA88允許誤 差的1/4以內(nèi)，見美國CLIA' 88能力比

3、對檢驗的分析質(zhì)量要求。 2、天間精密度（中間精密度）：方法：同樣使用兩個水平的質(zhì)控品，若需復(fù)溶凍干質(zhì)控品做實驗，要 注意選擇產(chǎn)品的穩(wěn)定性和瓶間差。 要嚴(yán)格控制每次復(fù)溶凍干品時的操 作手法。連續(xù)測試 20天，每天檢測 1次。在次過程中不能更換試劑批 號及質(zhì)控品批號， 是否需要重新定標(biāo)則取決于實驗室。 測試完成后記 錄檢測結(jié)果。結(jié)果評價（1）廠家評價標(biāo)準(zhǔn)：計算天間的SD及CV值，并計算精密度 指數(shù)=驗證SD/廠商SD精密度指數(shù)要求小于等于1,或者實測CVJ、于 等于廠家要求的CV兩者符合其一即可。具體見精密度評價表格。（2）按照國際推薦標(biāo)準(zhǔn)：批內(nèi)精密度應(yīng)在 CLIA88 允許誤 差的 1/3 以內(nèi)

4、,見美國 CLIA'88 能力比對檢驗的分析質(zhì)量要求。二、準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度（accuracy）指檢測結(jié)果與被測量物真值之間的接近程度。是 分析測量范圍、分析靈敏度以及生物參考區(qū)間評價的基礎(chǔ)。 準(zhǔn)確度的評價方法很多,比如檢測定值參考物質(zhì),同參考方法進(jìn) 行比對,同有溯源性的檢測系統(tǒng)進(jìn)行方法學(xué)比對,衛(wèi)生部臨檢中 心質(zhì)評的匯報結(jié)果均可以作為評價準(zhǔn)確性的方法之一。本方案采 用測定定值標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的方法來評價各個檢測項目的準(zhǔn)確度。定值 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)采用廠家定值標(biāo)準(zhǔn)品。方法：（1）試驗期間保證機(jī)器狀態(tài)正常,保證試驗當(dāng)日室內(nèi)質(zhì)控在控。2） 按廠家要求準(zhǔn)備各個項目的新批號定標(biāo)品 （要與定標(biāo)時使用的定標(biāo)品批號不同）各

5、一套，按照標(biāo)準(zhǔn)復(fù)溶（3）記錄該新批號定標(biāo)品的定值。（4）在設(shè)備上檢測各個定標(biāo)品 （多水平）的相關(guān)項目， 每個水平 重復(fù) 2 次，記錄檢測結(jié)果，將檢測結(jié)果錄入準(zhǔn)確度評價 表格。結(jié)果評價：（ 1）廠家標(biāo)準(zhǔn)： 按照各定標(biāo)品各水平的定值和不確定度 （廠家提供）， 來確定準(zhǔn)確度的偏倚范圍。計算實測均值的各項目各水平定標(biāo) 品的偏倚，與偏倚范圍相比較，來判斷偏倚是否可以接受。詳 見準(zhǔn)確度評價表，實測的均值如果落在該限度內(nèi)，則為其 準(zhǔn)確度認(rèn)為可被接受。（2） 按照國際推薦標(biāo)準(zhǔn)：準(zhǔn)確度偏倚應(yīng)該在CLIA88允許誤差的1/2以內(nèi)，見美國 CLIA'88 能力比對檢驗的分析質(zhì)量要求。三、參考范圍驗證參考NC

6、CLSC2一 A2文件，本方案僅對廠家提供的或者實驗室正在使用的各個項目的參考范圍進(jìn)行驗證。方法：（1）選擇 20 個能夠代表實驗室的健康總體的標(biāo)本。（ 2）保證試驗系統(tǒng)運行正常，依照標(biāo)準(zhǔn)操作程序檢測標(biāo)本。（3）運行該 20 份標(biāo)本，記錄結(jié)果，將結(jié)果填入?yún)⒖紖^(qū)間驗證表 格。結(jié)果評價 如果 20個參考個體中不超過 2 例的檢測值在驗證的參考限之外，廠 商或提供參考區(qū)間的實驗室報告的 95%參考區(qū)間可以接受。如果 3 例 以上超出界限，再選擇 20個參考個體進(jìn)行驗證，若少于或等于 2 個 觀測值超過原始參考值，則可接受，若還有 3 個超出參考限，需要重 新檢查各種條件，決定是否建立自己的參考區(qū)間。

7、四、線性范圍分析測量范圍即定量檢測項目的線性范圍， 是整個檢測系統(tǒng) （包 括儀器、試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、操作程序、檢驗人員等）對應(yīng)于系 列分析濃度的儀器最終輸出的信號間是否呈恒定比例的性能， 是一個 很重要的儀器性能分析指標(biāo)。 本實驗通過測定不同配比比例的高低值新鮮患者標(biāo)本， 以驗證實測值 和理論值的線性關(guān)系，來評估每個檢測項目的線性范圍。方法： （1）實驗室人員必須十分熟悉儀器的操作、質(zhì)量控制和定標(biāo)方法， 以及正確的收集樣本。試驗期間保證儀器狀態(tài)良好下，質(zhì)控在 控。（2）全部實驗數(shù)據(jù)盡可能在較短的時間內(nèi)收集，如可能，單個分析 試驗最好在一天內(nèi)做完。（3）用于驗證線性范圍的標(biāo)本類型應(yīng)與臨床測試

8、所用的標(biāo)本類型相 同或相類似，所有標(biāo)本應(yīng)不含廠家所標(biāo)定的干擾因素 （如溶血、 黃疸、脂血等）。如果上述條件不可避免，則應(yīng)在最后的報告 中注明在評價實驗中所用的標(biāo)本處理方法或基質(zhì)類型。注意： 收集的高濃度標(biāo)本應(yīng)盡可能的接近線性范圍高限。(4) 按照線性評價表格要求配比標(biāo)本。將 H和L樣品按：5L、 4L+IH、3L+2H、2L十3H、IL十4H、5H關(guān)系各自配制棍合， 形成系列評價樣品。(5) 難以收集到低限樣品，可收集高值樣品，用相應(yīng)稀釋液作系列 不同程度稀釋，形成系列評價樣品。( 6) 在 線性評價表格記錄檢測結(jié)果。結(jié)果評價：將數(shù)據(jù)填入線性評價表格，以X表示各樣品的預(yù)期值， 以Y表示各樣品的

9、實測值，得出散點圖。若所有實驗點呈明顯直線趨勢， 用直線回歸對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計， 得直線回歸 Y=bX+a若r2>0.95 ,斜率b在1.00 ± 0.03范圍內(nèi)，可直 接判斷測定方法在實驗所涉及的濃度范圍內(nèi)成線性。五、用患者標(biāo)本進(jìn)行方法比對及偏倚評估 實驗室準(zhǔn)備用一個新的檢測系統(tǒng)或測定方法 ( 或新的試劑盒、新儀器 進(jìn)行病人標(biāo)本測定前，應(yīng)與原有的檢測系統(tǒng)或者公認(rèn)的參考方法 -起 檢測一批病人標(biāo)本， 從測定結(jié)果間的差異了解新檢測系統(tǒng)或方法引人 后的偏倚。如果偏倚不大， 或者偏倚量在允許誤差范圍內(nèi)，說明兩檢 測系統(tǒng)或方法對病人標(biāo)本測定結(jié)果基本相符， 新檢測系統(tǒng)或方法替代 原有檢測系統(tǒng)

10、或方法不會對臨床引人明顯偏倚， 這樣的實驗稱為方法 學(xué)比較實驗。在方法學(xué)比較中，常將新方法稱為實驗方法，與之比較 的方法稱為比較方法。試驗方法：（1）各種儀器處于良好的工作狀態(tài)，嚴(yán)格按 So操作。（2）檢驗人員有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各個環(huán)節(jié)，熟悉評價方 案。（ 3） 在整個實驗中，保持實驗方法和比較方法都處于完整的質(zhì)量控 制之下，始終對實驗結(jié)果有校準(zhǔn)措施。（ 4） 實驗時間至少做 5天，時間長一些更好，可以客觀反映實際情況。（ 5） 至少做 40份病人標(biāo)本，多一點更好。（6）盡可能使50%的實驗標(biāo)本分析物的含量不在參考區(qū)間內(nèi)， 各個標(biāo) 本分析物含量越寬越好。（7）不要使用對任一方法有干擾的

11、標(biāo)本。（8）每份標(biāo)本應(yīng)有足夠的量，以便使實驗方法和比較方法都能做雙 份測定。例如，第 l 次序號為 1 、2.3.4 、5.6 、7 、8 ， 第 2次序號為 8 、7 、6 、5 ， 4 、3 、2.1 。兩方法都 按此實驗。（ 9） 應(yīng) 在2個小時內(nèi)兩種方法對同批標(biāo)本分別開始實驗， 最好使用當(dāng) 天采集的標(biāo)本。（ 10）實驗結(jié)束后，記錄數(shù)據(jù)。保留原始數(shù)據(jù)。結(jié)果評價：（ 1 ） 不 采用已明確有人為誤差的結(jié)果。（2） 將所有無明顯誤差的實驗結(jié)果記錄下來。但是，若兩種方法結(jié)果的各自差值大于任一方法的批內(nèi)不精密度，應(yīng)查對標(biāo)本，并重新實驗。若找不出原因，應(yīng)保留數(shù)據(jù)備考。（3）整個實驗一定要有內(nèi)部質(zhì)量

12、控制，失控時結(jié)果必須重做。（ 4）對實驗數(shù)據(jù)的初步篩查： 設(shè)比較方法測定結(jié)果為 X 值，實驗方法測定結(jié)果為 Y 值。在 方法學(xué)比對表格上錄入檢測數(shù)據(jù)， 若有40個標(biāo)本，則有 80 個 X 和 Y 的結(jié)果。 檢查每一方法內(nèi)現(xiàn)份測定值有無離群表現(xiàn)，先計算每一標(biāo)本每一方法成對結(jié)果的差值和差值的均值。 以4 倍的各方法差值的均值 為判斷限， 各方法內(nèi)標(biāo)本的成對差值都應(yīng)在限值內(nèi)， 說明雙份測定結(jié) 果符合要求。 若原數(shù)據(jù)僅 40 例病人標(biāo)本的結(jié)果， 剔除的數(shù)據(jù)應(yīng)另做實驗補(bǔ) 上。若有1 例以上需剔除， 應(yīng)檢查原因是標(biāo)本原因，其他數(shù)據(jù)仍可使 用。無法找出原因，則保留使用所有數(shù)據(jù)。若最大差異超過臨床允許 誤差，

13、應(yīng)從儀器、試劑、方法上尋找原因，停止繼續(xù)實驗。（5）在方法學(xué)比對表格上，以X均值、Y均值和（Y-X）、X作圖， 通過這兩種圖了解線性關(guān)系， 即有無明顯離群點， 是否呈恒定變異等 情況。如果實驗結(jié)果具良好線性關(guān)系，繼續(xù)處理數(shù)據(jù)。（ 6） X 、 Y 關(guān)系實驗點有無離群表現(xiàn)先看圖在無明顯離群點。若無，可作以后的統(tǒng)計；若有，應(yīng)對X、丫配 對值作離群值計算。 將每一個標(biāo)本兩個方法的前后兩個測定值一一對 應(yīng)，求出第1個X與第1個丫的差值和第2個X與第2個丫的差值， 并計算出所有標(biāo)本總的平均差值， 以4 倍的平均差值為判斷限值。 所 有差值都不應(yīng)超出限值。若有，為離群點，僅一點離群點，剔除。有 一點以上離

14、群點，需查原因，判斷是否保留數(shù)據(jù)。若原因不清，不能 隨意剔除，全部保留作統(tǒng)計分析，或者用一批新標(biāo)本重做評價。凡有 剔除的，應(yīng)另用標(biāo)本補(bǔ)做。（7） 標(biāo)本內(nèi)分析物含量分布是否適當(dāng)?shù)臋z驗。相關(guān)系數(shù) r 常用來表 示兩個變量間互相關(guān)系密切的程度。在直線回歸統(tǒng)計時，除所 有實驗點和回歸線間的離散度會影響 r 值的大小外，實驗點對 應(yīng)的分析物含量分布寬度也會明顯影響 r 值的大小。若實驗點 過于密集，盡管離散度不大，但 r 值偏小。因此，可用 r 檢驗 X 取值范圍是否適當(dāng)。一般要求r大于或等于0.975 （或r2大于或 等于0. 95）,認(rèn)為X范圍是適合的。若r小于0.975時，應(yīng)再 多做實驗，擴(kuò)大數(shù)據(jù)

15、范圍。（8）線性回歸統(tǒng)計可用直線回歸分析來估計斜率和截距。 數(shù)據(jù)以回歸式Y(jié)=b炸a,表示這 些數(shù)據(jù)的直線趨.這是以X方法為準(zhǔn)，丫方法與之配合的關(guān)系式。式 中b為斜率,a為截距。兩方法理想狀態(tài)的回歸式應(yīng)為 Y=X 即b =1， a=0。根據(jù)臨床使用要求，可在各個臨床醫(yī)學(xué)決定水平濃度XC處，了解丫方法引人后相對于X方法的系統(tǒng)誤差（SE） , SE = | （b -1）Xc + a | 。（9）以美國CLIA' 88能力比對檢驗的分析質(zhì)量要求允許誤差的1/2 為判斷依據(jù)，由方法學(xué)比較評估的系統(tǒng)誤差（SE）不大于允許誤差，認(rèn) 為系統(tǒng)誤差在可接受水平內(nèi)。備注：1、各個實驗室應(yīng)該根據(jù)自己的實際情況， 建立性能驗證的方法和 標(biāo)準(zhǔn)。該方法適用于科室內(nèi)所有生化設(shè)備的驗證。2、上述試驗方案可用于強(qiáng)生 Vitros 系列產(chǎn)品，僅供實驗室參考參考文獻(xiàn)：1、 臨床檢驗質(zhì)量管理技術(shù)，馮仁豐 ，上?？茖W(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版 社2、 臨床檢驗方法學(xué)評價 ，楊有業(yè) 張秀明，人民衛(wèi)生出版社3、NCCL，S Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples; Approved Guideline