藥材顯微鑒別檢查法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、文件藥材顯微鑒別檢查法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī) 程編號(hào)SOP?09?1006版本2 頁用 1/4編制日期替代/審定日期頒發(fā)質(zhì)量保障部批準(zhǔn)日期生效年1月20日發(fā)放質(zhì)保中心目的：建立顯微鑒別法檢查標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程范圍：確定藥材中有效成份在組織中分布狀況及其特征1 .儀器與用具1.1 不儀器生物光譜顯微鏡架盤天平1.2 用具1.2.1 放大鏡、刀片、銀子、剪刀1.2.2 載玻片、蓋玻片1.2.3 培養(yǎng)皿或小燒杯（放切片用、切片后的處理均可在其中進(jìn)行），酒精燈、滴瓶、玻璃棒（粗與細(xì)）1.2.4 鉛筆、濾紙、火柴2 .試液2.1 水合氯醛試液：按架盤天平標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程稱取水合氯醛50g，加水15ml,與甘油10ml使溶解即

2、得?；蚴垢煽s的細(xì)胞壁膨脹而透明，并能溶解淀粉， 樹脂、蛋白質(zhì)及揮發(fā)油等。2.2 甘油醋酸試液：取甘油，冰醋酸與水各等份，混合即得，此液專用于觀 察淀粉形態(tài)，可使淀粉粒不膨變形。便于測(cè)量大小。2.3 甘油一乙醇溶液：取甘油1份，50%乙醇1份，混合即得。此液為封 藏液，用于保存植物材料及臨時(shí)切片，有軟化組織的作用。3 .顯微標(biāo)本片的制作3.1 切片制作標(biāo)本片（橫切或縱切）3.1.1 藥材的預(yù)處理先將藥材表面泥沙刷洗干凈，將應(yīng)觀察的部位，切成適 當(dāng)大小的塊或段，一般長(zhǎng)3cm,寬1cm為宜，切面削平整。質(zhì)地軟硬適中的藥材可直接進(jìn)行切除；質(zhì)地堅(jiān)硬的則須先使其軟化后再切片。軟化方法可放在水中浸軟或煮軟。

3、有些根、根據(jù)莖、莖及木類藥材，質(zhì)地雖堅(jiān)實(shí)，可將削平的切面浸水中片刻，表面潤(rùn)濕時(shí)取出，直接切片也能切成較完整的薄片。過于柔軟的材料，可將其浸入7095乙醇中，約20分鐘后可變硬些，即可進(jìn)行切片。對(duì)于細(xì)小，柔軟而薄的藥材，如種子或葉片，不便直接手持切片。藥材在預(yù)處理時(shí)應(yīng)注意不能影響要觀察的顯微鏡鑒別特征。如要觀察菊糖，粘液等在軟化、切片、裝片等過程中，均不可與水接觸，以免溶解消失，觀察揮發(fā)油，樹脂等則不可與高濃度乙醇或其它有機(jī)溶媒接觸。3.1.2 徒手切片在檢驗(yàn)工作中，此法最常用，操作簡(jiǎn)便，迅速，制成的切片保持其細(xì)胞內(nèi)含物的固有形態(tài)，便于進(jìn)行各種顯微鏡化學(xué)反應(yīng)觀察。3.1.2.1 切片 右手持刀片

4、，左手拇指和食指夾持藥材，中指拖著藥材的底部，使藥材略高出食，拇二指指，肘關(guān)節(jié)應(yīng)固定，使材料的切面保持水平，刀口向內(nèi)并使刀刃從左前方向右后方切削，即可切得薄片。操作時(shí)材料的切面和刀刃須經(jīng)常加水或50%乙醇保持濕潤(rùn)，防止切片粘在刀片上。切好的切片用毛筆蘸水輕輕從刀片上移到盛有水或50%乙醇的培養(yǎng)皿中。3.1.2.2 裝片 選取平整的切片置載薄片上，根據(jù)所需觀察的內(nèi)容要求，滴加適宜的試液1 2 滴， 蓋好蓋玻片，即可在顯微鏡下觀察。如加水合氯醛試液透化、將薄片移到載薄片上，滴加1 2 滴水合氯醛試液，在酒精燈下微微加熱至透化完全為止；加熱溫度不能過高，以防止水合氯醛試液沸騰，使組織內(nèi)帶入氣泡；加熱

5、時(shí)應(yīng)將載玻片不斷移動(dòng)，不宜對(duì)準(zhǔn)一處燒，以免受熱不均而炸裂；透化后放冷，加甘油乙醇試液1 2 滴加后封蓋玻片，貼上標(biāo)簽。冬日室溫較低時(shí)，透化后不得放冷即滴加甘油乙醇液，以防水合氯醛結(jié)晶析出而防礙觀察。水合氯醛試液有潔凈透明作用，并能使已收縮的細(xì)胞膨脹，對(duì)草酸鈣結(jié)晶無作用，為觀察草酸鈣結(jié)晶的良好試劑，如需觀察菊糖等一些多糖物質(zhì)則加水合氯醛試液不加熱。3.2 粉末制片主要用于粉末狀的藥材粉末制成的成方制劑觀察3.2.1 粉末制備藥材要先干燥，磨或銼成細(xì)粉、裝瓶、貼上標(biāo)簽。粉末制備時(shí)，注意取樣的代表性，應(yīng)注意各部位的全面性；例如：根要切成根頭，根中段及根尾部等，必須全部磨成粉，不得丟棄渣頭。并需通過4

6、 號(hào)篩，混合均勻。干燥時(shí)，一般溫度不能超過60避免經(jīng)受高溫，使淀粉粒糊化，難以觀察其完整者。3.2.2 制片法 用鮮剖針挑取粉末少許，置載玻片的中央偏右的位置，加適宜的試液滴，用針攪勻(如為酸或堿時(shí)，應(yīng)用細(xì)玻璃棒代替針)待液體滲入粉末時(shí)， 用左手食指與拇指夾持蓋玻片的邊緣，使其左側(cè)與藥液層左側(cè)接觸，再用右手持小鑷子或解剖針拖住蓋玻片的右側(cè)，輕輕下放，則液體逐漸擴(kuò)充滿蓋玻片下方， 如液體未滿蓋玻片，應(yīng)從空隙相對(duì)邊緣滴加液體，以防產(chǎn)生氣泡；若片下方。如液體過多，用濾紙片吸取益出的液體，最后在載玻的左端貼上檢品的標(biāo)簽或書寫上標(biāo)記。1顯微測(cè)量顯微鑒定時(shí)應(yīng)用測(cè)量方法以測(cè)定細(xì)胞內(nèi)含物等的大小，應(yīng)用最多的則

7、是長(zhǎng)度測(cè)定。常用的量具是目鏡測(cè)微尺與載物臺(tái)測(cè)微尺。4.1 目鏡測(cè)微尺，又稱目鏡量尺或目微尺。它是放大回鏡內(nèi)的一種標(biāo)尺，是一個(gè)直徑1820mm勺圓形玻璃片，中央刻有精確等距離的平行線刻度，常為 50 條或 100 條。目鏡測(cè)微尺是用以直接測(cè)量物體用的，但其刻度所代表的長(zhǎng)度是根據(jù)顯微放大倍數(shù)不同而改變，故使用前必須用載物臺(tái)測(cè)微尺來標(biāo)化。4.2 載物臺(tái)測(cè)微尺，又稱鏡臺(tái)測(cè)微尺或臺(tái)微尺，它是一種特制的載玻片，中央貼有一小圓形玻片，上刻有將1mm(2mm)ft確等分為100(200)小格長(zhǎng)為10um,它是用以標(biāo)化目鏡測(cè)微尺的4.3 目鏡測(cè)微尺的標(biāo)化，以確定使用同一顯微鏡及特定倍數(shù)的物鏡，目鏡和鏡筒長(zhǎng)度時(shí)，

8、目鏡測(cè)微尺每一格所代表的實(shí)際長(zhǎng)度。標(biāo)化方法：將載物臺(tái)測(cè)微尺置于顯微鏡臺(tái)上， 按常規(guī)對(duì)光調(diào)焦，并移動(dòng)測(cè)微 尺物象于視野中央，從鏡筒中取上目鏡，旋下接目鏡蓋，將目鏡測(cè)微尺放入目鏡 筒中部的光纜上（應(yīng)正面向上），旋上目鏡蓋后返置鏡筒上。此時(shí)在視野中除鏡臺(tái)測(cè)微尺的象外，還 同時(shí)可觀察到目鏡測(cè)微尺的分度小格。移動(dòng)鏡臺(tái)測(cè)微尺和旋轉(zhuǎn)目鏡，使兩種量尺的刻度平行。 左邊的“0”刻度重合尋找第二條重合刻度，記錄兩刻度的讀數(shù)，并根據(jù)此值計(jì) 算出目鏡測(cè)微尺每一小格的刻度，記錄該物鏡條件下所相應(yīng)的長(zhǎng)度（mm,例如： 接目鏡為10X接物鏡為40X時(shí)，目鏡測(cè)微尺每17小格相當(dāng)于載體物臺(tái)量尺4小 格，則目鏡測(cè)微尺每小格的長(zhǎng)度

9、為 4X10un 17=2.35um4.4 測(cè)定細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)含物的方法：將載物臺(tái)測(cè)微尺取下，換以裝有待測(cè)的標(biāo)本載片。對(duì)光調(diào)焦，移動(dòng)載片，使需測(cè) 量的目的物置于目鏡量尺范圍內(nèi)，調(diào)泊物象，記數(shù)出目的物占測(cè)微尺的小格數(shù)， 乘以目鏡量尺每 1小格的長(zhǎng)度值即得。計(jì)算公式：鏡臺(tái)測(cè)微尺于目鏡測(cè)微尺重合時(shí)所具的長(zhǎng)（um）待測(cè)物體長(zhǎng)度（um） = x所測(cè)物體占有目目鏡測(cè)微尺于鏡臺(tái)測(cè)微尺重合時(shí)所占的格式鏡測(cè)微尺的格數(shù)例如：測(cè)得淀粉長(zhǎng)徑為 20小格，每小格長(zhǎng)2.35um,20X2.35um=47um5.事項(xiàng)5.1 粉碎用具用畢后，必須處理干凈，干燥后才能使用另一種藥材。5.2 所有蓋玻片和載玻片應(yīng)絕對(duì)干凈。新片要用洗液浸泡或用肥皂水煮半個(gè) 小時(shí)，用水沖洗。再用蒸儲(chǔ)水沖洗 12次，置于7090%乙醇中，取出烘干。5.3 進(jìn)行顯微鏡鑒別試驗(yàn)時(shí)有一定的步驟，一般先進(jìn)行甘油醋酸片的觀察， 后進(jìn)行水合氯醛片觀察，最后再進(jìn)行滴加試劑或結(jié)合其它理化試劑的顯微