中藥川芎中川芎嗪提取工藝優(yōu)化的探索

1、中藥川芎中川芎嗪提取工藝優(yōu)化的探索                             作者：馬琳 王秀杰，張堅(jiān)，趙啟鐸，陳志娟 【摘要】  目的考查川芎藥材有效成分川芎嗪提取的影響因素，優(yōu)化提取工藝。方法采用正交實(shí)驗(yàn)對(duì)川芎最佳提取工藝進(jìn)行考察，以HPLC條件為 Kromacil C18（150

2、 mm×4.6 mm，5m）色譜柱為分析柱，以甲醇-1%醋酸水溶液（2575）為流動(dòng)相，流速1.0 ml·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm，柱溫為室溫作為優(yōu)化分析手段。結(jié)果川芎的最佳提取工藝：80%乙醇（含5%乙酸）12倍量，超聲提取2次，45 min/次。鹽酸川芎嗪在2.0260.6 g/ ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為Y=20 205X-11 452，r=1.00平均回收率為 101.70，RSD=2.79%。結(jié)論該實(shí)驗(yàn)對(duì)川芎藥材中的有效成分川芎嗪的提取效率高，檢測(cè)快速準(zhǔn)確。在此HPLC條件下川芎嗪和其它成分之間能得到很好的分離。 【關(guān)鍵詞】  川芎

3、川芎嗪 高效液相色譜Abstract：ObjectiveTo take the factors which influence Rhizoma huanxiong's extraction into account and optimize the extractive craft.MethodsTo adopt crosscut experiment and explore the best extractive craft. The experiment was based on HPLC whose condition contained Kromacil C18（150mm&#

4、215;4.6mm，5m），the flow phase which methanol to acetic acid was 25 to 75,velocity of flow with 1.0ml per min,checking wavelengh with 280nm and the temperature with room temperature. ResultsRhizoma Chuanxiong's best extractive craft were as follows: ethanol 80%（include 5% acetic acid） and 12 times

5、' quantity. Extraction method was ultrasonic wave with 2 times and 45min per time. Tetramethylpyrazine had good linearity relationship at the range of 2.0260.6g/ ml. Regression equation was Y=20 205X-11 452, r=1.00. Average reclaim rate was 101.70，RSD=2.79%. ConclusionThe method is convenient an

6、d great efficient. Under this condition of chromatogram tetramethylpyrazine can be obtained satisfying separation.Key wordsRhizoma Chuanxiong；  Tetramethylpyrazine ；  HPLC中藥川芎(Rhizoma Chuanxiong)為傘形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根莖。具有活血、行氣及止痛的功效。臨床上廣泛用于頭痛、胸肋疼痛、經(jīng)閉腹痛、冠心病、跌打損傷等。其有效成分是生物堿類

7、以及酚酸類。本實(shí)驗(yàn)有關(guān)14，對(duì)川芎中生物堿類有效成分川芎嗪（tetramethylpyrazine）的最佳提取工藝進(jìn)行研究，尋找提取效率高、快速準(zhǔn)確的提取方法并使其在HPLC檢測(cè)條件下，有效成分川芎嗪和其它成分之間能得到很好的分離。1  器材1.1  儀器島津LC-6A高效液相色譜系統(tǒng)包括LC-6A恒流泵、SPD-6AV紫外檢測(cè)器、Anastar色譜工作站Kromacil C18色譜柱（150mm×4.6mm，5m），天津市色譜技術(shù)公司；超聲波提取器（KQ2200）；天平（Mettler Toledo）。1     

8、0;   1.2  材料川芎藥材購(gòu)于河北安國(guó)藥材市場(chǎng)，經(jīng)鑒定為傘形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根莖；鹽酸川芎嗪標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)于藥品生物制品檢定所（批號(hào)110817-200305）；甲醇（色譜純）；重蒸水。2  方法2.1  色譜條件以Kromacil C18（150 mm×4.6 mm，5 m）色譜柱為分析柱，以甲醇-1%醋酸水溶液（2575）為流動(dòng)相，流速1.0 ml·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm，柱溫為室溫，進(jìn)樣量20 l。2.2  標(biāo)準(zhǔn)品的制備精密稱定川芎嗪1

9、0.1 mg，置于25 ml的棕色容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度。制備成川芎嗪標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為404 g/ ml。2.3  線性關(guān)系考察精密吸取川芎嗪標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.05，0.1，0.2，0.3，0.5，1，1.5 ml，分別置于10 ml棕色瓶中，用甲醇稀釋至刻度。制成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液。在上述“2.1”項(xiàng)色譜條件下，進(jìn)樣20 l ，進(jìn)行檢測(cè)。以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)得到線性回歸方程為： Y=20 205X-11 452 ，r=1.00。鹽酸川芎嗪在2.0260.6 g/ ml濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系.2.4  提取溶劑量、時(shí)間、次數(shù)和溶劑濃度的考察取川芎粉末5 g，超聲提

10、取。對(duì)溶劑量(8，10，12倍)、時(shí)間（15，30，45 min）、次數(shù)(1，2，3)和溶劑濃度(50%，80%，95%)考察。平行實(shí)驗(yàn)兩次。提取液過(guò)濾，蒸干，甲醇定容至50 ml，0.45m微孔濾膜過(guò)濾。HPLC檢測(cè)，川芎嗪的含量。3  結(jié)果3.1  精密度實(shí)驗(yàn)取同一標(biāo)準(zhǔn)品溶液在上述HPLC條件下連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)得峰面積，計(jì)算RSD=0.40%。3.2  系統(tǒng)適應(yīng)性在上述HPLC條件下,川芎嗪和樣品中和其它峰分離良好。結(jié)果見(jiàn)圖12。3.3  溶劑濃度、倍數(shù)、時(shí)間、次數(shù)考察結(jié)果見(jiàn)表12。表1  川芎嗪提取工藝統(tǒng)計(jì)結(jié)果（略）表2  方差

11、分析（略）經(jīng)方差分析得：A，B，C，D有顯著差異，結(jié)果選擇A2B2C3D3。即12倍80%乙醇（含5%乙酸）超聲提取2次，45 min/次。3.4  重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)稱取川芎粉末5 g，按照最佳提取工藝進(jìn)行提取，在上述高效液相條件下進(jìn)樣，測(cè)定。RSD=1.43%。3.5  加樣回收率實(shí)驗(yàn)稱取已知含量的川芎藥材粉末5g按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表3。表3  川芎嗪加樣回收率（略）3.6  穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)稱取川芎粉末藥材5.0 g，按最佳提取工藝提取。在上述HPLC條件下于0，1，2，12，24 h進(jìn)樣，RSD=2.29%。由此表明川芎有效成分川芎嗪在24 h以內(nèi)是穩(wěn)定的。4  結(jié)論綜合上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可得出，川芎藥材粉在12倍80%乙醇（含5%乙酸），超聲提取2次，45 min/次，提取效率最高。在川芎嗪的提取時(shí)，不加乙酸放置3 d后檢測(cè)不到川芎嗪的峰?？紤]在酸性環(huán)境下提取比較合適，因此在提取溶劑中均加有5%的乙酸。在檢測(cè)川芎有效成分時(shí)曾試用C18（250 mm×4.6 mm，5m）的柱子，但是保留時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，而且峰是嚴(yán)重的拖尾峰，所以改用C18（150 mm×4.6 mm，5m）的柱子。【】  1葛莉，王小榮. 川芎中有效成分的不同提取