豬肺炎支原體概述及疫苗研究進展.docx

1、豬肺炎支原體概述及疫苗研究進展黎先偉編譯猛藤炎支原體在養(yǎng)豬業(yè)中的現(xiàn)狀呼吸系統(tǒng)疾病是影響豬只健康的最重要的問題之一。豬地方性肺炎的主要病原是豬肺炎支原體，屬于一種慢性呼吸系統(tǒng)疾病。豬肺炎支原體在全球養(yǎng)豬業(yè)的感染情況非常普遍，大約38%100%不等，而且會造成重大的經(jīng)濟損失(ThackerandMinion,2010)。豬肺炎支原體主要寄生于呼吸道的纖七上皮細胞，破壞細胞.并誘發(fā)感染動物出現(xiàn)繼發(fā)感染(ThackerandMinion,2010)o支原體代謝的毒性產(chǎn)物，如過氧化氫和超氧自由基等也可造成上皮細胞的損傷(Razinetal.,1998)。雖然不同H齡的動物對該病原體均易感，但是生長育肥階

2、段的動物受影響的程度最高。不過，對于無抵抗力的畜群，本病可影響所有生長階段的豬群，包括乳貓和繁育豬群(Sibilaetal，2007)。豬肺炎支原體引起的感染可用多種不同的措施來進行診斷。特征性的臨床癥狀和病理變化可作為豬肺炎支原體的初步診斷，但確診需要進一步的實驗室檢測。雖然人們通常認為豬肺炎支原體的培養(yǎng)是診斷本病的黃金標準，但這種方法并不經(jīng)常使用(Sibilaetal.,2009)。這主要是因為在Friis培養(yǎng)液中分離病原菌非常困難(Friis,1975)。此外，其他不同支原體的存在可能會抑制豬肺炎支原體的生長，這將使得它們的分離變得更加困難。因此，從一些疑似感染動物中未能培養(yǎng)出病原菌并不

3、能排除這些動物未受病原菌的感染(Thacker,2004)。另外，人們也會經(jīng)常進行免疫熒光(IF)的檢測，而血清學(xué)方法常用于監(jiān)測畜群的健康狀況，但這并不適合于個體動物的診斷(Sorensenetal.,1997)。PCR檢測是目前診斷豬肺炎支原體感染最靈敏的方法(Calsamigliaetal.,1999)。豬肺炎支原體的防控應(yīng)著重于管理措施和欄舍條件的優(yōu)化(Maesctal.,2008),抗菌藥物的使用(Viccaetal.,2004)以及合適的疫苗接種。一些商用疫苗，包括豬肺炎支原體全細胞滅活佐劑苗等均可在全球范圍內(nèi)使用。這些疫苗已被證實町有效降低感染的臨床癥狀，但僅有少數(shù)可防止已有病變的

4、發(fā)展(Haesebroucketal.,2004)o以下將講述豬肺炎支原體的病因，發(fā)病機理以及防控措施，而且特別將重點放在目前已提出的后基因組時代的疫苗接種策略。二. 病原學(xué)支原體屬于柔膜細菌類，體積微小，無細胞壁，因此從表型上來看與其他細菌有差異。雖然支原體和其他細菌之間存在著根本的區(qū)別，但是支原體在分子生物學(xué)方面與革蘭氏陽性菌有著許多相似之處(ThackerandMinion,2010)。支原體是最小的非寄生的自我復(fù)制的微生物。它們也有若最小的基因組(5801350kb)和較高的A+T含雖(約70%)。豬肺炎支原體屬于最有序的豬支原體(Liuetal.,2011,Minionetal.,2

5、004andVasconcelosetal.,2005)。由于其基因組較小，支原體只進行有限的代謝活動和生物合成(Razinetal.,1998)。而生物合成途徑的缺乏意味若它們需要從外界生長環(huán)境中獲取氨基酸、嗦吟和喘昵，以及合成細胞膜的成分(ThackerandMinion,2010)o此外，支原體在體外培養(yǎng)的要求甚高，而且大多種類的支原體都從未進行過培養(yǎng)(Razinetal.,1998).豬肺炎支原體可在體外進行培芥，但需要在介質(zhì)中補充血清和在Friis培養(yǎng)液中生長(Friis,1975)。豬肺炎支原體的培養(yǎng)和分離相當?shù)馁M力、費時，而且經(jīng)常會失敗，因此分離病原萌一般不用于常規(guī)的診斷。此外，

6、這也經(jīng)常容易受到其他支原體的污染，如豬鼻支原體(常存在于豬的呼吸道)和豬絮狀支原體(一種非致病性的支原體，其形態(tài)、生長和抗原性與豬肺炎支原體有相似之處)(ThackerandMinion,2010)0支原體的這種荀求的特性和蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能的遺傳系統(tǒng)尚未闡明，在很大程度上阻礙了我們了解其生物學(xué)特性。支原體物種已發(fā)生了變化，可通過改變其表面特性，以避免被宿主的免疫反應(yīng)所識別和清除(Browningetal.,2011)0以往的研究已表明，豬肺炎支原體的基因組具有一個復(fù)雜的轉(zhuǎn)錄組織，并暗示若可能存在一種未知的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制(Siqueiraetal.,2011)o豬肺炎支原體可產(chǎn)生粘附素、調(diào)控素、

7、攻擊素和阻抗素，這可對宿主的免疫系統(tǒng)進行粘附和調(diào)控(Murietaetal.,2008)。除此之外，研究發(fā)現(xiàn)，豬肺炎支原體的表面抗原能被蛋白水解處理后易位穿過細胞膜(Bogemaetal.,2011andWUtonetal.,2009)。豬肺炎支原體選擇性切割其分泌賀白的能力，使得這種病原菌具有一種非凡的性能，即可改變其表面結(jié)構(gòu)。分子生物學(xué)技術(shù)表明，豬肺炎支原體在基因組(Straitetal.,2008)和蛋白質(zhì)組水平(Calusetal.,2007)上具有一個很大的多樣性。Viccactal.(2003)的研究結(jié)果顯示，豬肺炎支原體在致病性方面也存在差異。這些作者根據(jù)實驗室攻毒試驗獲得的結(jié)果

8、，將分離株歸為低毒力株、中等毒力株和強毒力株。Villarrealetal.(2011)的結(jié)果表明，低毒力豬肺炎支原體的感染并沒有對后續(xù)強毒株的感染和發(fā)病起到預(yù)防作用。然而，這有必要進一步調(diào)查研究不同毒株之間差異的臨床重要性。三. 發(fā)病機理豬肺炎支原體是豬的特定病原體，只感染豬。它的發(fā)病機理，尤其是有可能的致病因素目前尚未完全清楚。豬肺炎支原體可通過水平傳播(如飛沫)經(jīng)呼吸道黏膜感染健康的動物(ThackerandMinion,2010)«,-旦吸入機體，豬肺炎支原體必須克服黏膜纖毛的活動梯和大量糖基化粘蛋白的橫向?qū)?。在定植期間，支原體利用表面的糖復(fù)合物和細胞外基質(zhì)成分為細菌粘附素合

9、成誘餌。豬肺炎支原體粘附于呼吸道上皮細胞纖毛上，最初可能會引起纖毛停滯、纖毛受損，甚至有可能造成上皮細胞死亡(DebeyandRoss,1994)o在這種病原微生物的定植和感染中，粘附于呼吸道上皮細胞的病原體，長期的炎癥反應(yīng)刺激，以及先天和適應(yīng)性免疫反應(yīng)的抑制和調(diào)制被認為是非常重要的步驟。結(jié)果導(dǎo)致，受感染的動物更容易受到其他呼吸道病原體的感染。病原體粘附于纖毛的確切方式尚未完全闡明。不過相關(guān)研究已明確了一些條與粘附過程的蛋白。豬肺炎支原體多動能的粘附素屬于P97/P102家族，其中包括Mhpl82(P102).Mhpl83(P97)、Mhp493(P159)、Mhp494(P216)、Mhp6

10、83(P135)、Mhp271,Mhp107和MhplO8(P116)0這些粘附素是在肉湯培養(yǎng)期間(PbUoctal.,20g,Wiltonetal.,2009andZhargetal.,1995)和體內(nèi)感染豬試驗(Adamsctal.,2005)中所表達的。研究已證實，P97(Zhangetal.,1995).P216(Wiltonetal.,2009),P102(Seymouretal.,2012)、Mhp271(Dcutscheretal.,2012)、Mhp107(Seymouretal.,2011)和Mhp683(B低mactal.,2011)的片段結(jié)合于姬纖玖P97蛋白是豬肺炎支原

11、體中被首個發(fā)現(xiàn)的粘附素。它可識別存在于呼吸道上皮細胞纖毛上的受體，常被認為是一種致病因子(Zhangetal.,1995).P97蛋白的C末端部分，命名為R1,主要負責纖毛的粘合，而這需要8個R1重復(fù)單元。由于重復(fù)的氨基酸加或減的變化有可能會導(dǎo)致蛋白質(zhì)的改變，從而干擾免疫系統(tǒng)的識別(Minionctal.,2000)。不過，其他因素或額外的蛋白質(zhì)也可能需要堅持。P102蛋白與P97蛋白的部分操縱子相同，而且雖然它的表達可能與病原體結(jié)合于纖毛有關(guān)，但有研究表明其與毒力有關(guān)，因為在感染過程中，它會在體內(nèi)表達(Adamsetal.,2005).除了這些發(fā)現(xiàn)以外，P102及其旁系同源基因的作用尚未清楚

12、闡明。Seymouretal.(2010)研究了豬肺炎支原體232株P(guān)102的旁系同源基因P116(一種廣泛的加工蛋白)的表面表達和酶加工現(xiàn)象。結(jié)果顯示，這種蛋白是一種多功能的毒力因素，涉及豬肺炎支原體疾病的過程。該作者還指出，P102是一種具有多功能結(jié)合能力的蛋白，能弟補充豬肺炎支原體表面的血纖維蛋白溶酶原和纖連蛋白，這意味若P102蛋白在毒力中發(fā)揮著重要的作用。事實上，P102和P97均是具有多功能結(jié)合能力的蛋白，能第補充豬肺炎支原體表面的血纖維蛋白溶酶原和纖連蛋白，表明這兩種蛋白在毒力中發(fā)揮著重要的作用。血纖維蛋白溶酶原和纖連蛋白結(jié)合于豬肺炎支原體的表面具有劑量依賴性和可飽和性(Deut

13、schcretal.,2012,Seymouretal.,2011andSeymouretal.,2012),而H這兩種蛋白，P102和P97也是病原體感染過程中重要的目標。血纖維蛋白溶酶原在豬肺部的支氣管肺泡液中是可隨時獲得的，而豬肺炎支原體的表面受體，在哺乳動物血纖維溶酶原催化劑促進血纖維蛋白溶酶轉(zhuǎn)化的過程中，與血纖維蛋白溶酶原相結(jié)合(Seymouretal.2012)o結(jié)果，豬肺炎支原體定植于纖毛上皮細胞，可能隔離器細胞表面上的血纖維蛋白溶酶原，并促進其轉(zhuǎn)化為血纖維蛋白溶酶。這個過程可能會造成組織侵潤和全身性感染(Bogemaetal.,2012)。雖然豬肺炎支原體主要是呼吸道的病原體，

14、但研究發(fā)現(xiàn)其可從內(nèi)臟器官中分離到，這意味著病原體或許可通過淋巴或血液循環(huán)在體內(nèi)進行傳播(Maroisetal.,2007)o人工感染和接觸的豬群可從肝臟、脾臟和腎臟組織中重新分離到病原(Maroisetal.,2(X)7),而且在這些相同組織中也能檢測到豬肺炎支原體的DNA(Woolleyetal.,2012)。然而，這種病原在體內(nèi)的蔓延似乎是短哲的過程，可能不會涉及疾病的發(fā)展過程(Maroisetal.,2007andWoolleyetal.,2012)。相關(guān)研究已證實，豬肺炎支原體對免疫系統(tǒng)具有調(diào)節(jié)作用，但這種調(diào)節(jié)的本質(zhì)尚未充分認識。豬肺炎支原體刺激形成肺泡巨噬細胞和淋巴細胞，產(chǎn)生促炎性細

15、胞因子，這與肺部病變和淋巴組織增生有關(guān)(Rodriguezetal.,2004),意味著在病變的發(fā)展過程中有免疫反應(yīng)的參與。在一般情況下，支原體能夠逃避宿主的天然防御能力。眾所周知，一些病原菌能夠利用它們的遺傳機制來改變其表面抗原.從而避開宿主的免疫應(yīng)答,形成慢性感染(Razinetal.,1998)。3株豬肺炎支原體的測序與比較分析的數(shù)據(jù)，可對與致病性有關(guān)的菌株的特異性區(qū)域進行鑒定(Minionetal.,2004andVasconcelosetal.,2005)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)2株致病性的菌株均存在一個綜合接合因子(1CE)。這意味著，ICE是一個可移動的DNA成分，可能與基因重組和致病性有關(guān)(

16、Pintoetai.,2007b).此外，一些研究已發(fā)現(xiàn)r豬肺炎支原體在感染過程中被免疫系統(tǒng)識別的蛋白質(zhì)(Chcnetai.,2008,Chenetal.,2003,Marchioroetal.,2012andSimionattoetal.,2012),這些蛋白可能具有重要的生理功能，和/或與發(fā)病機理有關(guān)。不過，這仍需要進一步的研究來闡明這些抗原在感染過程中的作用，以及涉及這種病原發(fā)病的作用機制。四. 控制措施豬肺炎支原體引起的感染可通過多種因素的相互結(jié)合來進行綜合防控，如管理措施、生物安全措施和欄舍條件的優(yōu)化，以及抗生素和疫苗的使用。管理措施的改善是控制這種疾病的關(guān)鍵，而且這是檢測到豬肺炎支

17、原體后首要采取的措施(Maesetal.,2008)?？股?如四環(huán)素類和大環(huán)內(nèi)酯類)常用于治療呼吸系統(tǒng)疾病(如豬地方性肺炎<Viccaetal.,2004>)o由于病原菌是在呼吸道的表面上定植，因此唯有抗生素能夠在呼吸道的粘液和液體內(nèi)達到較高的濃度才能夠在體內(nèi)達到預(yù)期的效果。經(jīng)有效的抗生素處理過的豬群，其臨床癥狀和肺部病變較少，而且繼發(fā)感染的現(xiàn)象也會降低(Ciprianetal.,2012).盡管在控制豬肺炎支原體感染方面藥物治療方案是成功的，但往往只能實現(xiàn)局部性的保護。這種效果可能是不能持續(xù)的，因為當停止治療措施后，疾病又有可能會復(fù)發(fā)(ThackerandMinion,2010

18、)o此夕卜，抗生素的預(yù)防或用藥措施應(yīng)盡可能最小程度地采用，以避免抗生素耐藥性的進-步發(fā)展。接種滅活的、添加佐劑的全細胞菌苗(單獨或與抗生素聯(lián)合使用)是目前全球范圍內(nèi)最常使用的，用控制豬肺炎支原體感染的措施(Haesebroucketal.,2004)。美國有超過85%的豬群接種了預(yù)防豬肺炎支原體的疫苗(ThackerandMinion,2010)o許多不同的研究報告已證實了疫苗接種的有效性。雖然接種疫苗對受感染的豬群具有積極的效果，但是這種效果在不同的帝群之間存在差異性。這種差異性可能是由于不同的因素，如感染水平、受感染動物的II齡、復(fù)雜的因素以及不同豬肺炎支原體分離株之間的變異性所造成的(C

19、alusetal.,2007andVillarrealetal.,2011)。不過，接種疫苗仍舊被認為是控制該病感染中最有效的措施(Mateusenetal.,2002)«豬肺炎支原體疫苗的主要優(yōu)勢包括改善日增重(2%8%)和飼料轉(zhuǎn)化率(2%5%)、縮短豬群達到屠宰體貢的時間、減少臨床癥狀和肺部病變，以及降低治療成本(Maesetal.,1999)。商用疫苗一直是全球范圍內(nèi)控制豬肺炎支原體感染的一個非常重耍的手段。雖然這些疫苗確實具有一定的效果，但是它們只能提供部分保護,并不會阻止豬肺炎支原體定植F上皮細胞上(Thackeretal.,2000)。一些研究表明，目前有效的商用疫苗可減

20、少呼吸道中的病原菌數(shù)量(Meynseta1.,2006andVillarrealctal.,2011),因而降低動物的感染水平，以及畜群中病原菌的擴散(Sibilaetal.,2007)。雖然疫苗接種可顯著地降低疾病的臨床癥狀和肺部病變，但在豬肺炎支原體的傳播過程中儀表現(xiàn)出有限的限制(Meynsetal.,2006andVillarrcaletal.,2011),這些研究結(jié)果強調(diào)了，僅僅疫苗接種不足以清除感染豬群中的豬肺炎支原體，并達到預(yù)期的效果。因此，疫苗接種應(yīng)與其他管理因素相結(jié)合，以達到最佳的效果(Haesebroucketal.,2004)。根據(jù)特別的畜群和變量:的需求，如生產(chǎn)系統(tǒng)、畜群

21、的類型、感染情況和養(yǎng)豬生產(chǎn)者的選擇，人們已采用不同的疫苗接種策略(包括單劑量和雙劑量疫苗接種方案)。疫苗接種的決定或不依賴于養(yǎng)殖場的經(jīng)濟可行性，以及接種疫苗將帶來的與疾病所造成的經(jīng)濟損失有關(guān)的利潤(Maesetal.,2008)。盡管疫苗接種已廣泛應(yīng)用于對抗豬肺炎支原體，但是其對病原體的傳播、不同的菌株以及免疫反應(yīng)等多方面的影響尚不清楚，這有待進一步的研究。然而，有研究表明，黏膜抗體和全身性免疫反應(yīng)對于本病的控制非常重要(Thackeretal.,2000).商用疫苗可誘導(dǎo)血清中特異性抗體的產(chǎn)生，盡管疫苗之間的抗體反應(yīng)可能有所不同(Thackeretal.,1998),而且動物之間血清轉(zhuǎn)化率的

22、變化范圍可從30%100%不等(Sibilaetal.,2004)0特異性抗體的誘導(dǎo)和對抗肺炎之間的相互關(guān)系還不清楚。豬群人工攻毒試驗的結(jié)果表明，血清中的抗體濃度與防護豬肺炎支原體之間是不相關(guān)的(Thackerctal.,1998)。因此，血清中含有抗體及其濃度水平，似乎并不是評價保護性免疫的最佳方式。所有有效的商用疫苗都是由滅活的支原體培養(yǎng)物而制成的，而且其中含有不同的佐劑。雖然佐劑具有不同的性質(zhì)，但是一般來說，它們會刺激和激活機體的免疫防御系統(tǒng)對抗外源物質(zhì)(抗原)。一些佐劑彼認為是相對溫和的，如鋁鹽等，而油性佐劑，通常以油劑的形式(油和水的混合)，往往具有更強的活性，并可能需要更長的時間來

23、被吸收，因此佐劑釋放和刺激的時間將會更長(YukiandKiyono,2003)。在商用疫苗中佐劑成分的差異可能也會影響誘導(dǎo)疫苗反應(yīng)的種類和保護的水平。除此之外，目前用于控制豬地方性肺炎的商用疫苗大多數(shù)是以J株為基礎(chǔ)，這種菌株最初是從英國的一頭豬上分離到。因此，人們會質(zhì)疑這種菌株是否與世界各地流行的豬肺炎支原體具有相似的特點(Stakenborgetal.,2005andVranckxetal.,2011)0在臨床條件下觀察到的疫苗效果的差異性可能是由于，除其他因素外，豬群中流行的菌株與疫苗菌株之間存在抗原的差異。除了疫苗接種的效果，在新生仔豬的保護中，母源細胞免疫和抗體介導(dǎo)的免疫反應(yīng)的作用尚

24、不完全清楚，而主動免疫的潛在干擾則需要更進一步的了解。不管母源抗體是否對疫苗接種的效果存在差異，單有研究報告指出，單.劑量的豬肺支原體疫苗可對1周齡左右的仔豬誘導(dǎo)產(chǎn)生長期的保護性免疫，而人工感染強毒后肺部的病變程度有所減緩(Reynoldsetal.,2009)o當來自不同窩的豬群混養(yǎng)在一起時一種早期的疫苗接種方案是應(yīng)在斷奶的時候給予血清轉(zhuǎn)化。這時候很有可能是它們要面臨第一個傳染病的挑戰(zhàn)，而當有發(fā)展多因素的風險時，重癥肺炎則可能會加劇。Meynsetal.(2004)估計，在為期6周的保育期間，一頭受感染動物將平均感染同欄的一頭易感動物。因此，這些結(jié)果強調(diào)了，從幼年動物開始實施防控策略的重要性

25、。五, 新的試驗性疫苗盡管目前使用的疫苗都是以菌苗為基礎(chǔ)，但是關(guān)于其有效性的問題依然存在。而且這些疫苗的生產(chǎn)成本也較高，這主要是因為豬肺炎支原體在體外難以培養(yǎng)(KobischandFriis,1996)O因此，這有必要研發(fā)更有效且成本更低的豬肺炎支原體疫苗。重組DNA技術(shù)可用來克服常規(guī)疫苗所遇到的一些問題。雖然4株豬肺炎支原體的基因組已被成功測出(Liuetal.,2011,Minionetai.,2004andVasconcelosetal.,2005)，但是幾乎沒有找到可以作為候選疫苗的重組抗原(Chenetal.,2008,Chenetal.,2003,Faganetal.,2001an

26、dKingetal.,1997)。這種病原菌的基因組很小，分泌蛋白或表面蛋白的數(shù)量有限，這有利于反向疫苗學(xué)技術(shù)的使用(Rappuoli,2001)o不過，支原體屬使用一個不尋常的遺傳密碼。在大多數(shù)支原體中，色氨酸的編碼子不是TGG,而是TGA,這是一個終止密碼子(Razinetal.,1998)。這種差異阻礙了豬肺炎支原體含有TGA密碼子的基因在大腸桿菌中表達，以及最為可行的系統(tǒng)用于敢組蛋白的生產(chǎn)(NucandNuc,2006)o不過，點突變技術(shù)已可把TGA替換成TGG,從而解決了這個問題。Simionattoetal.(2009)闡述了從豬肺炎支原體的14個基因中定點突變TGA密碼了的PCR

27、程序的優(yōu)化，是這些基因可在大腸桿菌中克隆和表達。目前，科研人員正不斷努力研發(fā)新的疫苗，為預(yù)防豬肺炎支原體的感染提供更好的保護。一些研究已通過不同形式的用法和劑型，評估了豬肺炎支原體的重組蛋白，試圖研發(fā)更有效的疫苗。其中，某些重組蛋白進行了單獨的評估(GaUietal.,2012andSimionattoetal.,2012),而其他則與減毒細菌或病毒載體相關(guān)聯(lián)(Chenetal.,2006a,Chenetal.,2006b,Chenetal.,2001,Faganetal.,2001,Okambaetal.,2010,Okambaetal.,2007,Shimojietal.,2003andZ

28、ouetal.,2011),或與黏膜佐劑相融合(Conceicaoetal.,2006),又或作為一種抗原的混合物(Chenetal.,2008)o只有少數(shù)一些重組蛋白進行了豬的攻毒試驗，而大多數(shù)僅在小鼠上進行了評價。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)了這些抗體誘導(dǎo)的免疫存在一定的差異，這可能受到疫苗設(shè)計、免疫途徑、以及有利于抗原刺激產(chǎn)生抗體的正確折昏和/或其他翻譯后修飾能力的影響(Pintoetai.,2007a).然而，這些評估結(jié)果表明，這些新的疫苗可能代表若有前景的新措施，并在控制豬肺炎支原體上可能是經(jīng)濟可行的。表1總結(jié)了迄今為止用于試驗性豬肺炎支原體疫苗的抗原、佐劑、栽體和免疫途徑。粘附素P97蛋白，豬肺炎

29、支原體中一種重耍的粘附素，已被廣泛的研究且認定為應(yīng)對豬肺炎支原體最具潛力的保護性抗原。在一些研究中已采用不同的疫苗制劑對其進行了評估。Kingetal.(1997)報道稱，基于重組粘附素P97蛋白的亞單.位疫苗，在豬的攻毒試騎中并沒有產(chǎn)生顯著的保護效果。不過，當P97蛋白的C末端區(qū)域(R1)與假單胞菌毒素相融合以后，免疫的小鼠和豬均對R1能產(chǎn)生特異性的免疫應(yīng)答(Chenetal.,2001)0口服免疫重組紅斑丹毒絲菌表達的P71蛋白，可降低由豬肺炎支原體感染引起的肺部病變的嚴重程度，這表明，紅斑丹春絲菌可能是-個有前景的疫苗載體，可搭載外來抗原至豬的免疫系統(tǒng)(Ogawaetal.,2009)。

30、除了疫苗中的抗原以外，佐劑和免疫途徑在免疫保護中也發(fā)揮著重要的作用。黏膜佐劑和滴鼻免疫接種作為替代傳統(tǒng)免疫的方式尤為受到人們關(guān)注，這可能會提高黏膜免疫力。Conceicaoetal,(2006)的報道稱，.種將具有黏膜免疫佐劑作用的不耐熱腸毒素B亞單位與P97蛋白的R1亞單位相融合的重組亞單位疫苗，在小鼠中對R1可產(chǎn)生全身性和黏膜性抗體。而Shimojietal.(2003)的報道稱，當給豬群進行人工感染時，紅斑丹毒絲菌表達的P97蛋白的R1區(qū)域可將降低鼻內(nèi)免疫豬群的肺部病變的嚴重程度。然而，這沒有產(chǎn)生體液或細胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。此外，Okambaetal.(2007)的研究結(jié)果表明，小鼠鼻內(nèi)免

31、疫缺陷型腺病毒表達的P97蛋白的C末端區(qū)域(rAdP97c),可誘導(dǎo)產(chǎn)生系統(tǒng)性Thl/Th2免疫反應(yīng)和局部免疫。與此相同的方法在豬上也進行了評估，并與一些商用疫苗作了比較。結(jié)果顯示，rAdP97c可顯著降低炎癥反應(yīng)的嚴重程度，以及表1試驗性豬肺炎支原體疫苗的信息表呼吸道中豬肺炎支原體的數(shù)晝。而旦平均日增重也略有改善。不過，商用疫苗可更有效第誘導(dǎo)保護性免疫(Okambaetal.,2010)e這些結(jié)果表明，這種抗原誘導(dǎo)的免疫可能受到疫苗設(shè)計、免疫途徑，以及所使用的佐劑或載體的影響。研究顯示，給小鼠口服免疫含有P97蛋白R1區(qū)域的鼠傷寒沙I、J氏菌aroACS332和豬肺炎支原體的核昔酸還原酶(N

32、rdF)R2亞單位的疫苗，可產(chǎn)生Thl細胞為基礎(chǔ)的免疫反應(yīng)，但不會產(chǎn)生體液或黏膜免疫反應(yīng)。然而，在鼠傷寒沙門氏菌aroASL3261中表達NrdF的R2亞單位，可在免疫小鼠中發(fā)現(xiàn)黏膜免疫反應(yīng)(Faganetal.,1997).而當用于免疫豬群時，這種抗原能夠降低豬肺炎支原體攻毒感染所引起的肺部病變(Faganetal.,2001)?？乖呙绶N類截體/佐劑試驗動物免疫途徑蠹懿參考文獻P97重組亞單位Freund'sNrdF(R2)再絹裁體鼠傷寒沙門氏菌aroASL3261P97(Rl)重組載體假單胞菌外毒素NrdF(R2)質(zhì)組載體鼠傷寒沙門氏菌aroASL3261P42DNApcDNA3

33、否P97(R1R2)重組載體紅斑丹毒絲菌YS-1P97(Rl)重組載體鼠傷寒沙門氏菌aroACS332NrdF(R2)重組裁體鼠傷寒沙門氏菌aroACS332P97(Rl)重組亞單位LTBP97(RI)重組裁體腺病匪P97(R1R2)Ifi組載體紅斑丹毒絲菌KoganeiP97(Rl)重組載體腺病毒P36重組載體胸膜肺炎放線桿菌SLW3634*重組亞單位鋁P37,P42,P46,P95重組亞單位和DNA鋁和pcDNA3豬鬻豬xili;豬ASI肌注口服皮下和肌注口服肌注皮下和鼻內(nèi)口服口服肌注和鼻內(nèi)肌注和鼻內(nèi)口鼻肌肌肌服內(nèi)注注注是否否是否否否否否否是是否否否Kingetal.(1997)Fagan

34、etal,(1997)Chenetal.(2001)Faganetal.(2001)Chenetal.(2003)Shimojictai.(2OO3)Chenetal.(2006a)Chenetal,(2006b)Conceicaoetal.(2006)Okambaetal.(2007)Ogawaetal.(2009)Okambactal.(2010)Zouetal.(2011)Simionattoctal,(2012)Gallietal.(2012)除了重組亞單位疫苗以外，相關(guān)研究也對DNA疫苗在小鼠體內(nèi)的免疫反應(yīng)進行了研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，基于熱休克蛋白P42的DNA疫苗對小鼠可產(chǎn)生顯著的免疫反

35、應(yīng)。小鼠的DNA免疫可誘導(dǎo)產(chǎn)生Th!細胞和Th2細胞的免疫反應(yīng)。此外，研究還發(fā)現(xiàn)，受免疫動物的血清可抑制豬肺炎支原體的生長(Chenetal.,2003)。一些研究觀察到，含有P46抗原的DNA疫苗也具有相類似的功效。不僅可在免疫小鼠中產(chǎn)生Thl和Th2免疫反應(yīng)，而且還可增加干擾素-Y的水平（Gallietal.,2012）。DNA疫苗可能具有一定的應(yīng)用前景，以制定更有效的豬肺炎支原體疫苗。盡管這些抗原具有免疫特性以及肺部病變的嚴重程度有所卜降，但目前它們其中沒有一個能夠像商用疫苗-樣，可提供全面的保護或類似的保護效果。多價疫苗也是預(yù)防豬肺炎支原體的另一個很好的選擇（Chenetal.,200

36、8）.相關(guān)研究評價了豬肺炎支原體的5個重組抗原（P97、P97R1、NRDF、P36和P46）作為DNA和蛋白質(zhì)疫苗的效果。小鼠免疫抗原混合物（DNA疫苗）的分析結(jié)果顯示，只有P97和P36蛋白可誘導(dǎo)血清【gG抗體的產(chǎn)生。肌注免疫抗原混合物（DNA疫苗）則可誘導(dǎo)Thl細胞免疫反應(yīng)，而這抗體反應(yīng)似乎是抗原依賴的。皮下免疫相同的抗原混合物（重組亞單位疫苗）可誘導(dǎo)體液免疫和Thl細胞免疫的產(chǎn)生。（上接57頁）周進行一次膽蟲，配合對510d的犢牛灌服驅(qū)蟲藥，可有效減少犢牛白痢病的發(fā)生。（四）補充營養(yǎng)農(nóng)村散養(yǎng)動物的日糧，大多養(yǎng)分不均，適時在飼料或飲水中添加電解多維，可有效的預(yù)防維生素缺乏，增強體質(zhì)，促進生長。特別是嚴寒、酷暑季節(jié)，運輸、斷喙、轉(zhuǎn)群，疫苗接種或動物患病期間，可明顯降低應(yīng)激反應(yīng)，有利于機體康復(fù)。四，加強執(zhí)法監(jiān)督近年來，我們加強了村防疫員、民間獸醫(yī)的管理，通過培訓(xùn)考核，擇優(yōu)聘用，淘汰了部分低劣的行醫(yī)人員，基本規(guī)范r臨床用藥。通過加強產(chǎn)地當DNA疫苗和亞單位疫苗聯(lián)合使用時，機體可同時產(chǎn)生體液免疫和Thl細胞免疫。此