微生物限度檢驗操作規(guī)程

1、*有限公司質(zhì)量管理標準文件共3頁 第1頁文件名稱微生物限度檢驗操作規(guī)程文件編號編制人編制日期修訂人修訂日期審核人審核日期批準人批準日期版本號制作份數(shù)生效日期頒發(fā)部門分發(fā)部門1. 目的規(guī)范菌落總數(shù)檢驗操作，確保檢驗數(shù)據(jù)真實有效。2. 適用范圍適用于本公司菌落總數(shù)檢驗操作規(guī)程。4.依據(jù)檢驗規(guī)程參照GB 4789.2-2016食品安全國家標準 食品微生物學(xué)檢驗 菌落總數(shù) 測定。4.內(nèi)容4.1菌落總數(shù)定義：食品檢樣經(jīng)過處理，在一定條件下（如培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度、和培 養(yǎng)時間等）培養(yǎng)后，所得每g（ml）檢樣中形成的微生物菌落總數(shù)。4.2 儀器與材料：除微生物實驗室常用的滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下4

2、.2.1 恒溫培養(yǎng)箱：36C 1C4.2.2 冰箱：2C-5 C，4.2.3 恒溫水浴鍋：46C 1C，4.2.4 天平：感量為0.1g，4.2.5均質(zhì)器4.2.6無菌吸管：1ml （具有0.01ml刻度）、10ml （具有0.1ml刻度）或微量移液器及 吸頭。4.2.7無菌錐形瓶：容量瓶250ml、500ml4.2.8無菌培養(yǎng)皿：直徑90mm4.2.9 pH計或pH比色管或精密pH試紙4.2.10放大鏡或菌落計數(shù)器微生物限度檢驗操作規(guī)程共 3頁第6頁4.3 培養(yǎng)基和試劑4.3.1平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基4.3.2虎紅培 養(yǎng)基4.3.3硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基4.4 操作步驟：4.4.1樣品稀釋：4.4

3、.1.1（1） 半固體、固體樣液制作：稱取 25g樣品置盛有225ml0.85%的無菌生理鹽水內(nèi)， 8000r/min-10000r/min 均質(zhì)1min-2min，或放入盛有0.85%的無菌生理鹽水的無菌均質(zhì) 袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min-2min，制成1:10的樣品。（2）液體樣品，以無菌吸管吸取 25ml樣品置盛有225ml0.85%的無菌生理鹽水的無菌 錐形瓶（瓶內(nèi)預(yù)置適當數(shù)量的無菌玻璃珠） 或其他無菌容器中，充分振搖或置于機械振 蕩器中振搖，充分混勻，制成1:10的樣品勻液。4.4.1.2用1 mL無菌吸管或微量移液器吸取1： 10樣品勻液1 mL，沿管壁緩慢注于 盛有9mL稀釋

4、液的無菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用一支無菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻，制成 1： 100的樣品勻液。4.4.1.3按441.2操作程序，制備10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用 一次1 mL無菌吸管或吸頭。4.4.1.4根據(jù)對樣品污染狀況的估計，選擇 2個-3個適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣 品可包括原液），在進行10倍遞增稀釋時，每個稀釋度分別吸取1 mL樣品勻液加人兩個無菌平皿內(nèi)。同時分別取1mL稀釋液加人兩個無菌平皿作空白對照。4.4.1.5及時將15 mL-20 mL冷卻至46C的平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基（可放置于 46C 1C 恒溫水浴箱中保溫）傾注平

5、皿，并轉(zhuǎn)動平皿使其混合均勻。4.4.2培養(yǎng)：4.4.2.1樣品提取：瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)，36C 1C培養(yǎng)48h2h。4.4.2.2如果樣品中可能含有在瓊脂培養(yǎng)基表面彌漫生長的菌落時，可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養(yǎng)基（約4 mL），凝固后翻轉(zhuǎn)平板，按4.4.1.1條件進行培養(yǎng)。4.4.3菌落計數(shù)：4.4.3.1可用肉眼觀察，必要時用放大鏡或菌落計數(shù)器，記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù) 量。菌落計數(shù)以菌落形成單位（CFU ）表示。443.2選取菌落數(shù)在30 CFU-300 CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計數(shù)菌落總數(shù)。 低于30 CFU的平板記錄具體菌落數(shù)，大于 300 CFU的可記錄為多不

6、可計。每個稀釋 度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個平板的平均數(shù)。4.4.3.3其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的 平板作為該稀釋度的菌落數(shù)；若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很 均勻，即可計算半個平板后乘以2，代表一個平板菌落數(shù)。4.4.3.4當平板上出現(xiàn)菌落間無明顯界線的鏈狀生長時，則將每條單鏈作為一個菌落計 數(shù)。4.5結(jié)果計算：4.5.1若只有一個稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)，計算兩個平板菌落數(shù)的平 均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每克（或毫升）中菌落總數(shù)結(jié)果。4.5.2若有兩個連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)時，按下式計算:Z CN

7、=（n0.1 n2）d式中：N樣品中菌落數(shù)；c 平板（含適宜范圍菌落數(shù)的平板）菌落數(shù)之和；山一一第一稀釋度（低稀釋倍數(shù)）平板個數(shù)；n2 第二稀釋度（高稀釋倍數(shù)）平板個數(shù)；瓦C(n i 0.1 n2)dd稀釋因子（第一稀釋度）；示例:稀釋度1:100 （第一稀釋度）1:1000 （第二稀釋度）菌落數(shù)（CFU）232,24433,3523224433 35 二 247272 (0.1 2) 10-4.5.3若所有稀釋度的平板上菌落數(shù)均大于 300CFU則對稀釋度最高的平板進行計數(shù), 其他平板可記錄為多不可計，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計算。4.5.4所有稀釋度的平板菌落數(shù)均小于 30CFU則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。4.5.5若所有稀釋度（包括液體樣品原液）平板均無菌落生