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文檔簡介

1、 【試驗(yàn)題目】 細(xì)胞膜通透性試驗(yàn)【試驗(yàn)?zāi)康摹?、觀看溶血現(xiàn)象并把握其發(fā)生氣制。 2、了解細(xì)胞膜的滲透性及各類物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞的速度?!驹囼?yàn)材料與用品】 1. 試劑:0.85% NaCl溶液、0.085% NaCl溶液、0.8mol/L甲醇溶液、0.8mol/L丙三醇溶 液、6% 葡萄糖溶液、2% TritonX-100  2. 器具:離心管、試管架、滴管、顯微鏡、離心機(jī) 3. 材料:雞血紅細(xì)胞【試驗(yàn)原理】 細(xì)胞膜是細(xì)胞與環(huán)境進(jìn)行物質(zhì)交換的選擇性屏障,它是一種半透膜,可選擇性把握物質(zhì)進(jìn)出細(xì)胞。各種物質(zhì)出入細(xì)胞的方式是不同的,水是生物界最普遍的溶劑,通

2、透性高(腎小管、腸上皮、植物根細(xì)胞更高),水分子可以從滲透壓低的一側(cè)通過細(xì)胞膜向滲透壓高的一側(cè)集中,這種現(xiàn)象稱為滲透。滲透作用是細(xì)胞膜的主要功能之一。1. 溶血現(xiàn)象 將紅細(xì)胞放在低滲鹽溶液中,水分子大量滲到細(xì)胞內(nèi)使細(xì)胞漲破,血紅蛋白釋放到介質(zhì)當(dāng)中,介質(zhì)由不透亮的細(xì)胞懸液變?yōu)榧t色透亮的血紅蛋白溶液(此時(shí)的細(xì)胞膜收縮,會(huì)略有不溶性內(nèi)容物),這種現(xiàn)象稱為溶血。 紅細(xì)胞在等滲鹽溶液中短時(shí)間之內(nèi)不會(huì)發(fā)生溶血,但是由于紅細(xì)胞的細(xì)胞膜對(duì)不同物質(zhì)的通透性不同,時(shí)間久了,膜兩側(cè)的滲透壓平衡會(huì)被打破,也會(huì)發(fā)生溶血。 由于各種溶質(zhì)透過細(xì)胞膜的速度不同,因此發(fā)生溶血的時(shí)間也不相同。發(fā)生溶血現(xiàn)象所需的時(shí)間,可以作為測量

3、某種物質(zhì)進(jìn)入紅細(xì)胞速度的指標(biāo)。即溶血時(shí)間對(duì)應(yīng)著穿膜速度。2. 物質(zhì)穿膜運(yùn)輸?shù)念愋停?)被動(dòng)運(yùn)輸(不耗能) 被動(dòng)運(yùn)輸分為簡潔集中(順濃度梯度集中)和幫忙集中。(通道:載體蛋白、通道蛋白)(2) 主動(dòng)運(yùn)輸(耗能) 需要跨膜載體蛋白的幫忙,這些載體蛋白起到泵的作用,有選擇性地把專一溶質(zhì)逆濃度梯度的穿膜運(yùn)輸。3. 影響物質(zhì)穿膜通透性的因素(1) 脂溶性越大的分子越簡潔穿膜(非極性的物質(zhì)比極性的物質(zhì)更簡潔溶于脂類物質(zhì))(2) 小分子比大分子更簡潔穿膜(小的非極性分子,如O2 、CO2等)(3) 不帶電荷的分子簡潔穿膜(離子難溶于脂質(zhì)物質(zhì),離子帶水膜使體積增大)(4) 親水性分子和離子的穿膜要依靠于專一性

4、的跨膜蛋白 【試驗(yàn)步驟】 1、 大體流程6只試管分別滴加50%紅細(xì)胞懸液1滴取6只試管分別加入等量的不同溶質(zhì)配置50%的雞血紅細(xì)胞懸液 在顯微鏡下觀看細(xì)胞形態(tài)混勻后,觀看并記錄溶血時(shí)間2、 具體操作1. 取雞血6ml,加0.85%NaCl溶液4ml,在1000r/min條件下離心5分鐘;(RBC壓積量不 少于 0.6mol) 2. 將上述離心后的紅細(xì)胞按沉淀量配成50%濃度;(總體積應(yīng)不少于1.2ml) 3. 每組取6支試管,分別加入如下溶液各3ml: (1)0.85%NaCl溶液 (2)0.085%NaCl溶液 (3)0.8mol/L(0.3mol/L等滲)甲醇溶液 (4)0.8mol/L(

5、0.3mol/L等滲)丙三醇溶液 (5)6%(5%等滲)葡萄糖溶液 (6)2%(1.5%等滲)TritonX-100 4. 向上述6支試管中分別加入50%紅細(xì)胞懸液1滴,輕搖混勻,觀看試管中是否有溶血現(xiàn)象發(fā)生 (觀看時(shí)間1小時(shí)),記錄溶血時(shí)間,并于顯微鏡下觀看各溶液的細(xì)胞?!驹囼?yàn)結(jié)果與分析】 I.試驗(yàn)結(jié)果 圖1:0.85% NaCl溶液 圖2:0.085% NaCl溶液 圖3:0.8mol/L甲醇溶液 圖4:丙三醇溶液(20min) 圖5:丙三醇溶液(40min) 圖6:丙三醇溶液(60min) 圖7:葡萄糖溶液 圖8:TritonX-100II.觀看記錄表編號(hào)溶液類型是否溶血溶血時(shí)間現(xiàn)象記錄

6、10.85% NaCl溶液不溶血/溶液呈暗紅色乳濁液,未發(fā)生溶血,作為對(duì)比組20.085% NaCl溶液完全溶血6s溶液呈鮮亮的紅色,完全溶血,作為對(duì)比組。30.8mol/L甲醇溶液完全溶血35s溶液呈鮮亮的紅色;完成溶血的時(shí)間很短40.8mol/L丙三醇溶液不完全溶血20min溶液短時(shí)間內(nèi)仍呈暗紅色,透亮度不高;溶血速度緩慢,每隔10min進(jìn)行觀看,發(fā)覺顯微鏡下個(gè)別細(xì)胞形態(tài)有所轉(zhuǎn)變56% 葡萄糖溶液幾乎不溶血1h溶液呈暗紅色乳濁液;溶血速度慢,在1h內(nèi)幾乎沒有溶血現(xiàn)象62% TritonX-100 完全溶血1min溶液呈鮮亮紅色,震蕩后溶液上層有泡沫產(chǎn)生;溶血速度快,且細(xì)胞膜被破壞 III.

7、 試驗(yàn)分析 1號(hào)溶液和雞血是等滲的,在短時(shí)間內(nèi)不發(fā)生溶血(時(shí)間若過長,膜兩側(cè)的滲透壓平衡會(huì)被打破,也會(huì)發(fā)生溶血)本次試驗(yàn)中把握溶血觀看時(shí)間在1h內(nèi); 2號(hào)溶液為低滲溶液,發(fā)生完全溶血,因此可將 1號(hào)、2號(hào)溶液作為對(duì)比和另四種溶液進(jìn)行比對(duì);3號(hào)甲醇溶液中的雞血紅細(xì)胞溶血速度很快,在幾十秒內(nèi)就已完全溶血,因甲醇的脂溶性高、分子量小,進(jìn)入細(xì)胞的速度很快,因此在操作過程中要求速度快,在完全溶血前做好裝片在顯微鏡下觀看; 4號(hào)丙三醇溶液雖然脂溶性較高,但分子量較大,因此進(jìn)入細(xì)胞的速度慢,溶血過程緩慢,在20min左右發(fā)覺有溶血的細(xì)胞(圖4),在40min以后發(fā)覺有個(gè)別細(xì)胞在顯微鏡下的形態(tài)有變化(圖5、圖

8、6),因丙三醇進(jìn)入細(xì)胞,且其對(duì)光的折射率很高,使細(xì)胞看上去有缺口; 5號(hào)葡萄糖溶液,因其分子量過大,進(jìn)入細(xì)胞的速度很慢,在1小時(shí)的觀看中,未發(fā)生明顯溶血現(xiàn)象; 6號(hào)溶液中添加了表面活性劑,可以將膜蛋白抽提出來,使細(xì)胞膜的通透性增大,快速發(fā)生溶血現(xiàn)象,同時(shí)由于有大量膜蛋白被抽提,細(xì)胞結(jié)構(gòu)遭到破壞,若操作速度過慢簡潔觀看不到細(xì)胞;膜蛋白溶于溶液中使得溶液的透亮度沒有2號(hào)溶液的高;經(jīng)過本次試驗(yàn)可以看出,由于溶質(zhì)的脂溶性、分子量等的差異會(huì)導(dǎo)致其進(jìn)入細(xì)胞的速度不同,從而導(dǎo)致溶血時(shí)間上的不同,因此可把發(fā)生溶血現(xiàn)象的時(shí)間當(dāng)做一種測量物質(zhì)進(jìn)入紅細(xì)胞速度的指標(biāo)。 【留意事項(xiàng)】1、 滴加完50%的血細(xì)胞懸液后,可用手指輕彈試管,使其混合均勻,防止血細(xì)胞沉入底部,但不要用力震蕩,以免細(xì)胞遭到人為損壞;2、 留意滴加的挨次,因3號(hào)溶液再加入血細(xì)胞后溶血時(shí)間很短,最好在

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