強(qiáng)直性脊柱炎與TNF β遺傳多態(tài)性研究

1、    強(qiáng)直性脊柱炎與TNF 遺傳多態(tài)性研究蔣黎華范麗安楊玨琴姚芳娟 周嘉陵許榮鐘麗民 關(guān)于強(qiáng)直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)發(fā)病機(jī)制，除發(fā)現(xiàn)其與HLA-B27的強(qiáng)相關(guān)之外，很多證據(jù)提示還可能有其它遺傳因素參與1。腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor,TNF)是一種參與免疫應(yīng)答的細(xì)胞因子，其基因TNF 位于HLA 類和類基因之間并與之緊密連鎖，近年來有研究發(fā)現(xiàn)TNF 的遺傳多態(tài)性與一些免疫性疾病相關(guān)聯(lián)2，3。本文對AS與TNF 多態(tài)性的關(guān)系進(jìn)行調(diào)查，以期為AS與B27關(guān)聯(lián)機(jī)制提供線索。 1資料與方法 1

2、.1研究對象：60例AS病人取自上海光華醫(yī)院風(fēng)濕科，均經(jīng)血清學(xué)方法確定為HLA-B27陽性。79例正常對照取自本室建立的隨機(jī)正常配組。均取靜脈血常規(guī)鹽析法抽提DNA。 1.2研究方法：TNF 等位基因的檢測采用PCR/RFLP方法，先用一對引物TNFL(5"CCGTGCTTCGTGCTTTGGACTA3')和TNFR(5"AGAGCTGGTGGGGACATGT-CTG3')擴(kuò)增TNFB基因外顯子1與內(nèi)含子3之間一段靶DNA，PCR循環(huán)溫度為95 、55 、和72 。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物再用限制性內(nèi)切酶Nco進(jìn)行酶切，1.5% agarose電泳檢查酶切結(jié)果，740

3、 bp的PCR產(chǎn)物經(jīng)酶切后形成555 bp和185 bp兩種片段，根據(jù)酶切格局可確定TNF 等位基因。 2結(jié)果 2.1TNF等位基因的指定：標(biāo)本經(jīng)PCR/RFLP后可產(chǎn)生3種酶切格局：TNF*2純合子的標(biāo)本，其PCR產(chǎn)物經(jīng)Nco消化后不產(chǎn)生酶切，則電泳后只出現(xiàn)740bp一根條帶；TNF*1純合子產(chǎn)生完全酶切，則出現(xiàn)555 bp和185 bp兩根條帶；TNF*1/TNF*2雜合子產(chǎn)生部分酶切，則出現(xiàn)740 bp、555 bp和185 bp三根條帶。 2.2AS病人和正常對照組TNF等位基因的分布見表1。TNF*1/TNF*2雜合子在AS病人和正常對照組中均是最常見的檢出形式，分別占50%和58.

4、2%，其次是TNF*2純合子的檢出率在AS病人組比正常對照組要高一些，但經(jīng)統(tǒng)計學(xué)2檢驗(yàn)P0.05，差異無顯著性。其它各種TNF遺傳多態(tài)性的分布在兩組間無顯著性差異。 表1AS病人和正常對照組TNF遺傳多態(tài)性分布 AS病人組 正常對照組 檢出率 TNF*1純合子 13.3%(8/60) 18.9%(15/79) TNF*2純合子 36.7(22/60) 22.8%(18.79) TNF*1/*2雜合子 50%(30/60) 58.2%(46/79) 表型頻率 TNF*1 63.3%(38/60) 77.2%(61/79) TNF*2 86.7%(52/60) 81.0%(64/79) 等位基因頻

5、率 TNF*1 0.383(46/120) 0.481(76/158) TNF*2 0.617(74/120) 0.519(82/158) 3討論 HLA是人類第6號染色體上一組高度多態(tài)性的基因群，在免疫系統(tǒng)尤其是免疫識別及其遺傳控制中起極重要作用，但AS與HLA-B27關(guān)聯(lián)的機(jī)制迄今不明。有調(diào)查發(fā)現(xiàn)，AS患者的一級相關(guān)親屬中B27()個體的發(fā)病率比一般的B27()群體高10倍1，提示除B27外AS還 可能與其它遺傳因素有關(guān)，對雙胞胎的研究也證明了這一可能4。近年來研究顯示除B27外其它一些HLA基因如HLA-B60、DR1、DR8在某些人群中也可能與AS關(guān)聯(lián)，我們的有關(guān)研究則發(fā)現(xiàn)HLA-DP

6、B1*0401與AS呈負(fù)相關(guān)5。由于HLA作為人體最具多態(tài)性的遺傳系統(tǒng)是疾病基因的極好遺傳標(biāo)志，故提示上述的所謂其它遺傳因素可能就位于HLA區(qū)域。另外一些觀點(diǎn)則認(rèn)為B27抗原分子因與某些腸道菌存在分子模擬而可被上述其它自身HLA抗原遞呈導(dǎo)致自身免疫。 TNF與免疫調(diào)節(jié)和免疫炎癥有關(guān)，近年來發(fā)現(xiàn)TNF 具有遺傳多態(tài)性，不同TNF 基因型的個體在功能上還可能存在差異，且TNF 多態(tài)性與SLE、糖尿病、原發(fā)性膜性腎小球腎炎等疾病相關(guān)2，3。因此極有可能TNF 是與AS發(fā)生有關(guān)的遺傳因素之一，而前述與AS關(guān)聯(lián)的HLA基因只是作為一種遺傳標(biāo)志，因其與TNF基因之間的緊密連鎖而顯示出與AS相關(guān)。我們的調(diào)查

7、結(jié)果顯示TNF 各等位基因與AS無相關(guān)性，則初步排除了這種可能性。 作者單位：200025上海第二醫(yī)科大學(xué)上海市免疫學(xué)研究所(蔣黎華、范麗安、楊玨琴、姚芳娟)，上海光華醫(yī)院(周嘉陵、許榮、鐘麗民) 參考文獻(xiàn) 1Feltkamp TEW,Khan MA,Lopez de Castro JA.The pathogenetic role of HLA-B27.Immunology Today,1996,17(1)5 2Bettinotti MP,Hartung K,Deicher H,et al.Polymorphism of the tumor necrosis factor beta gene in systemic lupus erythematosus:TNF-MHC haplotypes.Immunogenetics,1993,37:449 3Medcraft J,Hitman GA,Sachs JA,et al.Autoimmune renal disease and tumor necrosis factor gene polymorphism.Clin Nephro,1993,40(2):63 4Jarvinen P.Occurrence of ankylosing spondylitis in a nationwide series