直接抗人球蛋白試驗操作規(guī)程

1、XXX醫(yī)院直接抗人球蛋白試驗操作規(guī)程1.目的 保證試驗結(jié)果的精確性，確保臨床輸血平安。2.適用范圍 XXX醫(yī)院輸血科。3.職責(zé) 輸血科具有專業(yè)技術(shù)的工作人員負(fù)責(zé)本院患者直接抗人球蛋白檢測，但只對該單份標(biāo)本負(fù)責(zé)。4.相關(guān)文件 試劑選購、保存和使用管理程序 設(shè)備選購、使用管理程序 消毒與清潔管理程序 標(biāo)本采集、運(yùn)輸、保存和報廢管理程序5.相關(guān)記錄 儀器設(shè)備的選購、使用和維護(hù)記錄 儀器的溫度記錄 恒溫水溫箱的換水和消毒記錄 消毒液的配置記錄 清潔消毒記錄 試劑選購、使用記錄 標(biāo)本交接和報廢記錄6.試驗原理 抗球蛋白試驗（Coombs試驗）是測定結(jié)合在紅細(xì)胞上的抗體和/或補(bǔ)體的主要方法。直接Coomb

2、s試驗是檢測體內(nèi)已被抗體和/或補(bǔ)體致敏的紅細(xì)胞。間接Coombs試驗時通過血清與細(xì)胞的孵育，證明抗體和/或補(bǔ)體在體外的結(jié)合。 抗體分子和補(bǔ)體成分都是球蛋白。用人球蛋白免疫動物使其產(chǎn)生抗體即抗人球蛋白?？谷饲虻鞍自噭┛赡蝗饲虻鞍字旅舻募t細(xì)胞。抗人球蛋白試劑可以和致敏在紅細(xì)胞上的人球蛋白反應(yīng)，通過橋梁作用使致敏紅細(xì)胞消滅凝集，呈現(xiàn)陽性反應(yīng)。7.儀器設(shè)備玻璃試管(75X12mm)、玻片、記號筆、一次性塑料滴管、顯微鏡、交叉配血專用離心機(jī)、試管架、恒溫水溫箱、試劑保存冰箱、標(biāo)本保存冰箱。8.試劑生理鹽水、抗D(IgG)試劑(效價1:8)，直接抗人球蛋白試劑(抗IgG,C3d)，均為有合格證件的正品

3、。9.試劑保存和性能指標(biāo)9.1.保存：直接抗人球蛋白試劑（抗IgG,C3d）應(yīng)置于28冷藏保存，切勿反復(fù)凍融。儲存條件下有效期為24個月。9.2.性能指標(biāo)：直接抗人球蛋白試劑（抗IgG,C3d）為多特異性試劑。外觀：應(yīng)澄清透亮，無雜質(zhì)；靈敏度試驗：分別與強(qiáng)抗體抗D(IgG)，中等強(qiáng)度抗體(抗Jka)和弱抗體(抗Fya)致敏細(xì)胞反應(yīng)，結(jié)果均為陽性。效價：與IgG(抗D)致敏細(xì)胞凝集效價1:4；與C3致敏細(xì)胞凝集效價1:1。特異性試驗：陰性對比試驗與加入AB血漿的Rh(D)陽性細(xì)胞反應(yīng)，結(jié)果為陰性；陽性對比試驗與抗D(IgG)致敏細(xì)胞反應(yīng)，結(jié)果為陽性。10.標(biāo)本收集和處理應(yīng)使用EDTA抗凝標(biāo)本，可

4、反映體內(nèi)紅細(xì)胞被補(bǔ)體致敏的真實狀況。若懷疑冷抗體引起的直接抗球蛋白試驗陽性，其血液標(biāo)本凝固應(yīng)保持在37，直到血清被分別出來為止。11.試驗方法與步驟用生理鹽水制備受檢者3%紅細(xì)胞懸液備用。將1滴受檢者3%紅細(xì)胞懸液加入潔凈的試管中，用生理鹽水洗滌3次3400轉(zhuǎn)/分鐘（1000g），每次離心1分鐘，離心后將上清液全部倒出。加入2滴抗IgG,C3d，以3400轉(zhuǎn)/分鐘（1000g）離心15秒。將取出的試管持肯定角度并輕輕搖動直至松動全部的細(xì)胞，然后反復(fù)傾斜試管，直至呈現(xiàn)均勻的細(xì)胞懸液（陰性）或凝集物（陽性）為止。用肉眼或借助光學(xué)顯微鏡觀看凝集狀況，并按凝集程度進(jìn)行初步判讀結(jié)果并記錄。若初步判讀結(jié)果

5、為陰性，則在室溫中放置510分鐘，再離心一次，重新判讀結(jié)果并記錄。陽性對比試驗（IgG抗D致敏細(xì)胞）：將1滴陽性對比細(xì)胞加入潔凈的試管中；再加入2滴直接抗人球蛋白試劑（抗IgG,C3d）；以3400轉(zhuǎn)/分鐘（1000g）離心15秒；將取出的試管持肯定角度并輕輕搖動直至松動全部的細(xì)胞，然后反復(fù)傾斜試管，直至呈現(xiàn)均勻的細(xì)胞懸液（陰性）或凝集物（陽性）為止；再進(jìn)行初步結(jié)果判讀。對初判為陰性結(jié)果的，再在試管中加入1滴陽性對比細(xì)胞，進(jìn)行再離心、再懸浮和再判讀結(jié)果。假如在制備陽性對比細(xì)胞懸液時，能充分去除全部未結(jié)合的球蛋白，則此步對比試驗結(jié)果為陽性。（此步對比很關(guān)鍵，它是檢測細(xì)胞是否洗滌充分的唯一方法。）

6、陽性對比細(xì)胞（IgG抗D致敏細(xì)胞）制備：取1份市售抗D（IgG）試劑（效價1:8），加入1份Rh(D)陽性O(shè)型紅細(xì)胞，混勻后置37水浴30分鐘，再用生理鹽水洗滌3次3400轉(zhuǎn)/分鐘（1000g），每次離心1分鐘，離心后將上清液全部倒出，最終配成3%紅細(xì)胞懸液備用。12.結(jié)果推斷消滅紅細(xì)胞凝集為陽性反應(yīng)，表示紅細(xì)胞上有相應(yīng)抗體存在；紅細(xì)胞不凝集為陰性反應(yīng)，表示紅細(xì)胞上沒有相應(yīng)抗體存在。13.質(zhì)量把握與留意事項紅細(xì)胞洗滌不充分，微量殘留的未結(jié)合的球蛋白將中和抗人球蛋白試劑，影響試驗結(jié)果的精確性。直接抗人球蛋白試驗的試管在初讀結(jié)果之后，應(yīng)再放在室溫中510分鐘，這樣孵育后，對C3d或IgA致敏紅細(xì)胞有增加作用，重新離心后觀看結(jié)果可使初判的陰性結(jié)果轉(zhuǎn)變?yōu)殛栃越Y(jié)果；而IgG致敏的紅細(xì)胞在孵育后反應(yīng)可能會更弱。試劑中含有0.1%W/V疊氮鈉，若攝入人體會引起中毒。直接抗人球蛋白試劑（抗IgG,C3d）為體外診斷試劑?？笽gG可用于抗體篩選和相容性試驗中，但其有肯定的局限性，使用抗IgG測定抗體間或會失敗，可依靠含有抗C3成分的多價抗球蛋白試劑測定，沒有被IgG測得的抗體在某