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文檔簡介

專題整合專題整合克隆技術1.克隆技術的含義和克隆的條件(1)克隆技術的含義:包括分子克隆、細胞克隆和個體克隆三個水平。當用于分子、細胞水平描述時,指從眾多的基因或細胞群體中通過無性繁殖和選擇獲得目的基因或特定類型細胞的技術操作,如PCR技術擴增DNA、細胞培養(yǎng)。當用于個體水平描述時,克隆就是一種通過單個細胞,特別是來自特定個體的單個體細胞進行無性繁殖,從而產(chǎn)生新個體的過程或技術,如植物組織培養(yǎng)、克隆動物。(2)克隆動物的條件具有包含物種完整基因組的細胞核的活細胞。具有能有效調控細胞核發(fā)育的細胞質物質。具備完成胚胎發(fā)育的必要的環(huán)境條件。2.分子克隆PCR技術擴增DNA(1)原理:DNA復制。(2)條件:DNA模板、引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶和4種脫氧核苷酸等。(3)擴增過程:模板DNA受熱解旋為單鏈(變性)、冷卻后,引物結合到互補DNA鏈上(復性)、在熱穩(wěn)定DNA聚合酶作用下,從引物開始進行互補鏈的合成(延伸)。3.細胞克隆(克隆培養(yǎng)法)動物細胞的培養(yǎng)(1)概念:把單個細胞從群體中分離出來單獨培養(yǎng),使之繁衍成一個新的細胞群體的技術。(2)最基本要求:保證所建成的克隆來源于單個細胞。(3)過程(4)提高細胞克隆形成率的措施選擇適宜的培養(yǎng)基;添加血清;以滋養(yǎng)細胞支持生長;激素刺激;用CO2調節(jié)pH。4.個體克隆(1)植

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