黃芪多糖和氧化苦參堿協(xié)同增強雞新城疫疫苗免疫效果研究.docx

1、DOI:10.13207/j.ciiki.jnwafii.2015.06.028網絡出版時間：2O15-O5.ll15:03磷崎讖版縛址期kcms/degg峰株葡技美孳孽抿(培禽滁串腆12015年6月JournalofNorthwestA安FUniversity(Nat.Sci.Ed.)黃茂多糖和氧化苦參堿協(xié)同增強雞新城疫疫苗免疫效果研究陳茜】，邢玉娟2,陳玉庫2,胡元亮，王德云。蔡丙嚴2(1南京農業(yè)大學動物醫(yī)學院.江蘇南京210095；2江蘇農牧科技職業(yè)學院.江蘇泰州225300)摘要【目的】研究黃斐多(Astragaluspolysaccharides.APS)和氧化苦參堿(Oxymalr

2、ine,OM)對新城疫疫苗免疫的影響?！痉椒ā繉日齡非免疫羅曼蛋公雞550羽隨機均分為11組，19組分別為()AP(以OM與APS質量比為6«4配成)、()M和APS的高(4mg/mL)、中(2mg/mL)、低(Img/mL)劑雖組.10組為免疫對照組.11組為空白對照組。除空白對照組外.各組試驗雞只均于14日齡首免、DVIV系疫苗.28日齡而：復免疫。在首次免疫的同時.19組分別口服商、中、低劑量:藥物.免疫對照組和空門對照組口服等鼠生理拙:水，每天1次.連續(xù)3d。分別于5和42日齡采血.用MTT法測定T淋巴細胞增殖的變化,用什微質法測定血清抗體效價變化。于1

3、4,21.28和35日齡.每組隨機抽取雞4羽.稱體質揪.削殺.摘取法氏囊和脾臟并稱質伉計算免疫器官指數(shù)?！窘Y果】()AP、()M、APS高、中劑信隹各時間點均能促進T淋巴細胞增殖；()AP高、中劑技組在各時間點抗體效價顯著高于免疫對照組：OAP高、中、低劑屈組在各時間點的脾指數(shù)和法氏囊指數(shù)均顯著高于免疫對照組(CAP低劑所組35日齡除外【結論】黃芭多糖和氧化苦參堿能協(xié)同增強雞新城疫疫苗的免疫效果。關鍵詞中藥成分復方；T淋巴細胞增殖；抗體效價；免疫器官指數(shù)中圖分類號S853.7文獻標志碼A文章編號1671-9387(2015)06-0041-06Increasingimmuneefficacyo

4、fNewcastlediseasevaccineinchickenbyastragaluspolysaccharideandoxymatrineCHENXi收稿日期一2014-05-27WZuTTiHP4IxlWHr-irW4X4>ilPIf。八houAr>uF女-4-必爪/hl=奸*SArtfiM，。八io11八力八no、,XINGYu-juan2,CHENYu-ku2,HUYuan-liang1WANGDe-yun1,CAIBing-yan2(1CollegeofVeterinaryMedicineNanjingAgriculturalUniversity.NanjingJia

5、ngsu210095A'hina:2JiangsuAgrianimalIltislnindryV(Kational('ollegr,Taizhou.Jiangstt225300.C/jzwu)Abstract:IObjective)Thispaperaimedtostudytheimmuneeffectofastragaluspolysaccharide(APS)andoxymatrine(OM)onNewcastlediseasevaccine.MethodFivehundredandfifty14-day-oldnon-iminiinizedRomancockswerera

6、ndomlydividedinto11groups.GroupsIto9were()AP()MandAPSqualityratioof6:4)，OMandAPSathigh(4mg/mL).medium(2mg/mL)andlow(Img/mL)doses.respectively.Group10wasvaccinecontrolandgroupI1wasblankcontrol.GroupsIto10werevaccinatedwithNDV-1attheagesofI4and28days,respectively.Atthesametimeofthefirstvaccination.the

7、chickensingroupsIto9weregivencompoundsathigh.mediumandlowdosesandchickensinvaccinationandblankcontrolgroupsweregivenphysiologicalsalinebyoraladministration.onceadayforthreeclays.Ondays5and42.peripheralIlymphocyteproliferationsandserumantibodytitersweredeter-minedwithMT'Fmethodandp-micr

8、oscopicmethod.respectively.On14.21.28and35days.theorganindexesofspleenandbursaweredeterminedbykillingIchickensineachgroup.LResultJTlymphocyteproliferationswerepromotedby()AP()MandAPSathighandmediumdosesandserumantibodylitersof()APathighandmediumdosesweresignificantlyhigherthanthoseofvaccinecontrolgr

9、oup.Atanytime,spleenandbursaindexesof(JAPatallclosesweresignificantlyhigherthanthoseofvaccinecontrolgroup(excepttheOAFlowdosegroupfor35-dayoldchicken).ConclusionJAPSandC)McouldsynergisticallyimprovetheimmuneefficacyofNewcastlediseasevaccineinchicken.Keywonls：Chineseherbalmedicinalingredientscompound

10、s;Tlymphocyteproliferation：antibodytiter：immuneorganindex研究證明,中藥及其主要成分作為-種免疫增強劑.具TF來源廣泛、效果顯著、無毒副作用等優(yōu)勢.不僅能克服油乳類、鋁膠類化學佐劑副作用大.局部刺激重、致癌、制備和使用麻煩或不足以提高弱抗原的免疫原性等弊病"而且能顯著增強機體的細胞免疫和體液免疫功能.促進免疫器官的發(fā)育和細胞因子的分泌住勺。在前期研究中.筆者所在研究團隊發(fā)現(xiàn).黃注多糖（.Astragaluspolysaccharides.APS）與氧化苦參堿（OxymatrineOM）等中藥成分具有顯著抑制新城疫病毒（Newsa

11、stlediseasevirus.NDV）增殖的作用；中藥成分復方在攻毒前、與攻毒同時和攻毒后給藥均能顯著降低受試雞的死亡率,提高血清NDV抗體效價.減輕死亡媽的器官出血,但對于其增強免疫作用機理的研究尚未見報道。木試驗在前期研究基礎上.進-步測定了中藥成分及其復方對新城疫苗免疫后雛雞外周血T淋巴細胞增殖、血清抗體效價、法氏囊指數(shù)和脾指數(shù)的影響.進-步探討中藥成分復方增強免疫的作用機理，以期為研制中藥成分免疫增強削提供理論依據。1材料與方法1.1材料I. 1.I藥物準備根據以前的試驗結果隊.分別用雙蒸水將OM、APS和OM-APS（OAP.以雙M與APS質量比為6：4配成）配制成高（4mg/m

12、L）、中（2mg/mL）、低（1mg/mL）3種質量濃度的溶液.常規(guī)消毒后備用。1.1.2 疫苗和病毒新城疫1系（NewcastlediseasevirusIVstrain.NDV-1）疫苗.中牧股份南京藥械廠生產,批號753-3。新城疫檢測抗原.由南京農業(yè)大學動物醫(yī)學院中獸醫(yī)研究室提供。新城疫強胚.恒溫培養(yǎng)72h.收獲尿囊液.按Reed-Muench法測定雞胚半數(shù)感染吊（Egginfectiousdose.EID5o）為10-8.七I.1.3主要試劑RPM1164O培養(yǎng)液.Gibco公司產品.按說明書用三蒸水配制后過濾除曲.分裝.4（保存.臨用前加入犢牛血清達體積分數(shù)5%.同時加青霉素、鏈霉

13、素各10（）lU/mL：植物血凝素（PHA）.上海伊華科技有限公司產品.用RPM11640培養(yǎng)液配制成0.1mg/niL.0.22“m微孔濾膜過濾除菌.分裝后一20笆保存：四甲基偶氮哇藍（MTT）溶液.Amresco公司產品,用pH值為7.4的磷酸鹽緩沖液（PBS）溶解，使最終質缺濃度為5mg/mL.0.22微孔濾膜過濾除菌.分裝后It冰箱避光保存；淋巴細胞分離液.上海恒信化學試劑有限公司產品；淋巴細胞裂解液二甲基亞碗（DMS。）.分析純.蘇州正興化工研究院產品。1.1.4試驗動物1日齡非免疫健康羅曼蛋公雞600羽.購自湯泉農墾種雞場°試驗期間采用籠養(yǎng).全價伺料.自由采食和飲水.11

14、4日齡采用紅外燈保溫.全日制光照。1.2試驗設計雛雞飼養(yǎng)至14日齡（平均體質雖95g/只），平均母源抗體效價3.3時,隨機選取550羽均分為II組。第19組為OAP高（OAPh）、OAP中（OAPm）、OAP低（OAPl）、（）M高（OMh）、（）M中（OMm）、OM低（）Ml）、APS高（APSh）、APS中（APSm）和APS低（APSl）.第10組為疫苗對照組,第II絹為空白對照叩隔離伺養(yǎng)。除空白對照叩外.共.他組試驗雞于II日齡西免.用NDV-N系疫苗滴鼻、點眼免疫.每羽I羽份；28日齡時重復免疫。在首次免疫的同時.3個1藥復方組分別口服高、中、低劑量的OAP復方.母羽Iml,6個單味

15、藥組分別連續(xù)3d。分別于14.21,28,35和42日齡.每絹隨機取雞4羽.無菌心臟采血（4.0mL/羽）.肝素抗凝測定外周血淋巴細胞增殖；每叩隨機另取雞10羽翼掙脈采血，分離血清.用伏微吊:法測定HI抗休效價。在14,21.28和35日齡.每組隨機取雞4羽.稱體質雖，剖殺.摘取法氐囊和脾臟并稱其質量.iI算免疫器官指數(shù)（免疫器官質量/體質量X100%）。1.3淋巴細胞增殖的測定采用MTT法口將抗凝血樣用Hank's液稀釋1倍.小心加在淋巴細胞分離液上層.2000r/min離心20min.吸取中間云霧狀白細胞層.用無血清RPM11640培養(yǎng)液洗2遍.1500r/min離心15mine臺

16、盼藍染色.細胞計數(shù)活細胞大于90%后.用RPM1I64O培養(yǎng)液調整細胞密度為2.5X1（）6個/mL,加入到96孔細胞培養(yǎng)板（德國Nundcn公司生產）中，80/,/孔，每孔再加20“1.PHA.每個樣品重夏4孑L.然后'置于39.5°C、體積分數(shù)5%CO2條件b（CO2培養(yǎng)箱.美國Revco公司產品）培養(yǎng)44h.然后每孔加入MTT溶液20繼續(xù)培養(yǎng)4h后.每孔加裂解液100將細胞板置于微量振蕩器（75-2A型.上海醫(yī)用分析儀器廠牛產）上振蕩5min使沉淀完全溶解在酶聯(lián)免疫儀（DG-3022型.中國華東電子管廠生產）上于570nm處檢測吸光值（A57。）作為丁淋巴細胞增殖的指標

17、。1.4抗體效價的測J定在96孔微量血凝板上.從左到右每孔各加5（）MPBS液.再向每排的第I孔加入50待檢血清.依次向后倍比稀釋宜至第12孔.然后向每孔加入50“L4單位抗原.在微量振蕩器上振蕩混勻后皆于溫箱中感作20min。取出血凝板向每孔加入50雞紅細胞懸液.同時設陽性血清、陰性血清及空|'|對照孔，振蕩混勻后置于37°C溫箱中感作30min,待對照孔紅細胞已經沉淀時觀察結果o1.5數(shù)據處理淋巴細胞值、HI效價和免疫器官指數(shù)以“平均值士標準差”表示。用SPSSII.0軟件進行統(tǒng)計分析,比較各時間點淋巴細胞轉化、抗體效價和免疫器官指數(shù)的差異性。2結果與分析IOM.ASP和

18、CAP對雞淋巴細胞增殖的影響OM、ASP和OAP不同劑量和免疫對照叩各時間點A列值均顯著高于空白對照m（P<0.05）；與免疫對照組相比較OAPh、（）.APm、（）Mh、OMm、APSh、APSm在各時間點.OAPl和APSl在21.28.35和42日齡,OMl在21,28和42日齡的A570值顯著升高（表DoOAPh在各時間點心。值均顯著高于（）Mh和APSh（PV0.05）：（）APm在28日齡人灑值高于APSm.但差異不顯著.其余各時間點其A洌值均顯著高于（）Mm和APSm（P<0.05）；不同劑妣復方組和OMh、APSh在21日齡.膏。值達到高峰.其余各單味藥及對照組在2

19、8日齡達到高峰（表1）。表1()M、ASP和CAP高、中、低劑量對雞淋巴細胞增殖的影響Table1InfluenceofOM.ASPandOAPathigh,mediumandlowdoesonTlymphocyteproliferation組別Group日畛dDayage1421283542CAPh0.342±O.O4Oa0.395±0.086a0.384±0.051a0.366士0.083a0.318±0.040aOAPm0.334士0.073a0.386±0.061a0.375士0.055ab0.352士0.047a0.3】2士0.049

20、aCAPl0.2】l士0.065de0.309±0.041be0.308士0.078c0.284±0.063b0.258士0.032beOMh0.240士0.022h0.343士0.087b0.3】2士0.041c0.282士0.059bO.254±O.048beOMm0.23l±0.028cd0.305±0.052be0.331±0.041c0.289±0.054b0.268士0.032bOMl0.208±0.044de0.284士0.066c0.304±0.042c0.262士0.042be0.234

21、±0.064cAPSh0.255士0.019be0.340±0.034b0.324士0.070c0.301±0.044b0.263±0.040beAPSm0.238士0.044bed0.331士0.091be0.340士0.042be0.291±0.029b0.275±0.048bAPSl0.209士0.034de0.296士0.047be0.306±0.055c0.273士0.048b0.251士0.036be免疫對照Vaccinationcontrol0.188士0.027e0.236士0.068d0.239士0.041

22、d0.224±0.093c0.171±0.024d空白對照Blankcontrol0.155士0.016f0.174士0.019e0.187士0.031e0.173士0.036d0.130士0.029e注：同列數(shù)據后標不同小寫字母表示差異顯著（PV0.05）。下同。Note：Differentlowercaselettersineachcolumnindicatesignificantdifference(P<Z0.05).I'hesamebelow.2.2 ()M、ASP和OAP對雞抗體效價的影響對照組(PV0.05)；()APh和OAPm在1442日士nk

23、fA-n,、"Ad、AZz51"IZz.21日齡抗休效價顯著高于免疫對照ffl（P<0.05）oOAPh的抗休效價在各時間點均顯著高于OMh和APSh（P<0.05）：（）APm抗休效價在21.28.35和42日齡顯著高于（）Mm.在21.28和35日齡顯著高于APSm（PV0.05）,OAPl抗體效價在28日齡顯著高于C）Ml（P<0.05）（表2）。表2OM.ASP和（）AP高，中、低劑量對雞血清抗體效價的影響Table2Influenceof()M.ASPandOAPathigh.mediumandlowdocsonserumantibodytite

24、r組別GroupOAPh()APm()APl()Mh()MmOMlAPShAPSmAPSl免技對照Vaccinationcontrol空白對照Blankcontro7士0.48a7.5士0.52a8.7士0.67a7.9±0.56a7.0±0.67a6.5士0.71ah7.2士0.42ab8.4士0.51a7.4士0.6.9a6.8士0.63ab5.6±0.69cd6.8士0.42be7.5±0.71be6.3±0.67be5.5±0.52de5.5±0.75d6.6±0.52c6.7&#

25、177;0.48e6.1±0.56bed5.5±0.72de6.0±0.70bed6.4±0.69c7.7±O.67b6.4±0.51be5.7±0.67d5.6±0.69cd6.2±0.79cd6.8士0.63de6.2±0.78bed5.6士0.51de6.0±0.66bed6.5士0.84c7.0士0.67cde6.6士0.69b6.1士0.73cd6;2±0.42abc6.6士0.5】c7.8+0.42b6.7±0.48b6.3士0.67be6.1±

26、;0.56abed6.7士0.67be7.4士0.84bed5.9±0.73cd5.6±0.51de5.6±0.70cd5.8士0.42d6.8士0.78de5.6±0.69d5.0±0.47e2.9士0.32c2.9士0.57e2.8士0.422.7±0.67e2.6±0.42f日嶺/dDayage2.3 （）M、ASP和OAP對雞免疫器官指數(shù)的影響2.3.I法氏囊指數(shù)的變化由表3可知.OAP-OMH、OMl、免疫對照組和空白對照叩的法氏囊指數(shù)在21日齡達到峰值,其他各組在28日齡達到峰值；各藥物絹及免疫對照組法氏卷指數(shù)均

27、顯著高于空白對照（FV（）.05）；OAPh、（）APm、OMm.OML、APSh、APSm、APSl在各時間點,OMH在21和28日齡及OAPl在14.21和28日齡法氏囊指數(shù)顯著高于免疫對照組（P<0.05）o（）APh的法氏囊指數(shù)在各時間點均顯著高于（）Mh.在28和35日齡顯著高于APSh.（）APm的法氏囊指數(shù)在35日齡顯著高于OMm和APSm（PV0.05）°表3（）M、ASP和CAP高，中、低劑量對雞法氏it指數(shù)的影響Table3InfluenceofOM.ASPandOAPathigh,mediumandlowdoesonbursaindex%組別Group日齡

28、/dDayage14212835OAPh0.56士0.030a0.58士0.041a0.63士0.021a0.52±0.035aOAPm0.54±0.012ab0.55士0.037ab0.58士0.014b0.50士0.011abOAPl0.45±0.022d0.50±0.020cd0.48士0.024cd0.36±0.040d()Mh0.43±0.018de0.48士0.024d0.46±0.024d0.34±0.019dOMm0.52士0.037abc0.54±0.033alx-0.56±0

29、.028b0.46±0.038beOM,.0.50士0.035c0.54士0.015be0.51±0.029c0.44±0.017cAPSh0.53±0.024abc0.55士0.031abc0.57=0.009b0.47士0.031beAPSm0.54士0.035ab0.56士0.034abO.57±O.O11b0.45±0.042cAPSl0.51±0.026be0.53±O.025al)c0.57±0.036b0.44±0.022c免疫對照Vaccinationcontrol0.40士0.

30、013e0.43±0.024e0.42±0.036e0.33±0.020d空白對照Blankcontrol0.36±0.028f0.38±0.030f0.34士0.040(0.26士0.015e2.3.2脾指數(shù)的變化山表4可知.OAP各劑量組、0Mm、APSh、APSm在各時間點J）MH在14和35日齡、OMl和APSl在14.21和35日齡脾指數(shù)顯著高于空白對照組<P<0.05）；OAP各劑量組、OMm.APSh、APSm在各時間點及OMl在21日齡和APSl在14和21日齡的脾指數(shù)均顯著高于免疫對照組（PV0.05）。（）APh

31、在各時間點的脾指數(shù)均顯著高于（）Mh；OAPm在21.28和35日齡的牌指數(shù)顯著高于3討論1中藥成分復方及其組分藥對淋巴細胞增殖的影響淋巳細胞增殖是反映機體細胞免疫水平的一個章要指標細胞免疫是通過致敏淋巴細胞與相應抗原作用而發(fā)揮抗病原休感染、抗腫瘤、幫助B淋巴細胞產生抗休等作用。本試驗結果表明.9個試驗藥物組中.除（）APl、（）Ml、APSl在II日齡，OAPh的效果最好。fflo提示（）AP、APS和OM在合適的劑量均能刺激淋巴細胞增殖.促進細胞免疫.且以OAPm、表4（）M、ASP和CAP高、中、低劑量對雞脾指數(shù)的影響Table4InfluenceofOM.ASPandOAPathigh

32、.mediumandlowdoesonspleenindex%組別Group日齡/dDayage14212835OAPh0.19士0.017ab0.21±0.014ab0.22士0.015ab0.20士0.015abOAPm0.20±0.011a0.23±0.014a0.24±0.017a0.22士0.014aOAPl0.18士0.016ab0.20±0.034abc0.20±0.016be0.18±0.027beOMh0.14±0.019d0.14±0.024d0.17±0.015d0.】6士

33、0.015cdOMm0.19±0.018ah0.19±0.023be0.20士0.012be0.18士0.016beOM,.0.15±0.010cd0.18士().023c0.16士0.009d0.】6士0.020cdAPSh0.18士0.022ab0.20士0.016abc0.21士0.0151)0.18士0.026beAPSm0.19士0.019ab0.21士0.019ab0.21±0.019b0.20±0.020abAPSl0.17±0.019be0.18二0.017be0.18±0.013cd0.17±0.

34、013cd免疫對照Vaccinationcontrol0.13士0.020de0.14*0.012d0.16士0.013d0.】4±0.012d空口對照Blankcontrol0.H±0.013c0.14±0.021d0.】4士0.0J4d0.12±0.0)7e3.2中藥成分復方及其組分藥對新城疫苗免疫應答的影響血清抗體效價反映機體體液免疫狀態(tài).體液免疫是機體抗御感染的主要因素之.通過抗原-抗休結合反應而起到抗菌、抗病毒、抗外毒素等多種作用。本試驗結果表明.OAPh、（）APm在5個時間點、（）Mm和APSm在4個時間點、CAPl和APSh在3個時間點、

35、（）Mh和APSl在I個時間點的抗休效價均顯著高于免疫對照組。表明OAIAPS和OM在合適的劑量均能刺激抗體產生,提高機體體液免疫水平.其中以OAPh、（）APm和AP%的作用較強。3.3中藥成分復方及其組分藥對免疫器官指數(shù)的影響一般認為.免疫器官指數(shù)降低為免疫抑制所致.而免疫器官指數(shù)增加則為免疫增強的表現(xiàn)M。本試驗中（）APh、OAPm在各時間點的法氏囊指數(shù)、牌指數(shù)均顯著高于免疫對照和空II對照m.（）APl在14,21和28日齡的法氏囊指數(shù)和各時間點的脾指數(shù)顯著高于免疫對照組。除（）Mh在14和35日齡以及OAPl在35日齡的法氏囊指數(shù)高于免疫對照叩但差異不顯著外.其余各藥物組法氏囊指數(shù)均

36、顯著高于免疫對照組。在脾指數(shù)方-面.（_）Mh在各時間點.OMl在14.28和35日齡.APSl在28和35日齡與免疫對照組無顯著差異.其余各絹、各時間點均顯著高于免疫對照叩。表明中藥成分復方及其叩分藥能增加免疫糖官質量.從而增強機休的免疫功能。3.4中藥成分復方及其組分藥增強免疫作用的量關系。在促進T淋巴細胞增殖方面,OAPh、OAPm在各時間點均顯著高于免疫對照組，而OAPl在14日齡與免疫對照組無顯著差異。（）M和APS的高、中劑量緝各時間點的A570值與免疫對照組相比較差異顯著.而低劑量組在14日齡與免疫對照組無顯著差異.這可能是因為劑最過小.不足以刺激機休產牛.致敏淋巳細胞所致，具體

37、原因還有待于進-步研究；在提高血清抗體效價方面,（）APh、（）APm在各個時間點均顯著高于免疫對照組；OAPl在21,28和35日齡顯著高于免疫對照組。在提高法氏囊指數(shù)方面.OAPh、OAPm各時間點的法氏囊指數(shù)顯著高于免疫對照組;OAPl在14.21和28日齡顯著高于免疫對照組.在35日齡與免疫對照組相比較差異不顯著。Kong等皿在觀察9種中藥成分對新城疫|系疫苗免疫雛雞血清中血凝抑制抗體水平影響的研究中.也得到了類似結果。3.5中藥成分復方與其單味組分藥增強免疫作用的比較在促進T淋巴細胞增殖方面,OAPh的板值顯著商于C）Mh和APSh;在提高血清抗體效價方面-OAPh抗體效價顯著高于O

38、Mh和APSh:在提商免疫器官指數(shù)方面.OAPh的法氏囊指數(shù)顯著高于OM-OAP是由（_）M和APS組成的復方.其增強免疫作用優(yōu)于單味組分藥，表明兩種組分藥有協(xié)同作用。王德云等KN在研究當歸多糖、黃此多糖、淫羊覆多糖、蜂膠黃酮等提高免疫調節(jié)作用時亦發(fā)現(xiàn).中藥成分幼萬的免疫活性優(yōu)于其單味叩分。綜合以上結果可見（）AP能顯著增強箱雞對新參考文獻IU沈留紅鄧崽丹,鄧俊良等.“禽康散”對人T.感染NDV肉對紅細胞免疫功能的影響J.揚州大學學報：農業(yè)與生命科學版.2013,34(2)：16-19.ShenLM,DengHI).DengJL,etal.I'hechangesofredbloodce

39、llimmunefunctionbycomplexChinesecrudedrug"Qinkan-gsan"onchickenartificiallychallengedbyNDV*J.JournalofYangzhouUniversity：AgriculturalandLifeScienceEdition，2013.34(2),1619.(inI'hinexe)2張寶康.王德云.孔祥峰.等.蜂膠黃酮增強免疫作用的研究口.揚州大學學報:農業(yè)與生命科學版.2006,27(3):20-22.ZhangBK.WangDY.KongXF.etal.Studiesonimmu

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