腦憶清膠囊對(duì)老年小鼠和擬癡呆大鼠記憶功能的影響

1、    腦憶清膠囊對(duì)老年小鼠和擬癡呆大鼠記憶功能的影響黃世福梁?jiǎn)⒂玛惽谙淖谇?摘要：選用老年小鼠和 A1C13溶液制備的擬癡呆大鼠動(dòng)物模型(DMR )，研究腦憶清膠囊(NYQ)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物記憶功能的影響及其作用機(jī)理。結(jié)果表明，DMR 大腦 皮層組織(Cer)中膽堿酯酶(AchE)活性比正常大鼠提高(P0.01)，而老年小鼠 Cer 中 M-受體Rt值比正常青年小鼠降低(P HT5"K0.01)，NYQ 可顯著降低實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 Cer 中 AchE 活性(P 0.050.01)，增加M-受體Rt值(P0.050.01)。提示 NYQ 可通過(guò)降低實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

2、Cer中AchE活性，增加M-受體Rt值而明顯提高記憶能力，對(duì)老年癡呆有一定的治療作用。 關(guān)鍵詞：腦憶清膠囊/藥理學(xué)；記憶/藥物作用；膽堿酯酶類(lèi)/分析；受體，膽堿能/分析； 癡呆，老年性/中藥療法 中圖分類(lèi)號(hào)：R285.5；R338.64文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1003-9783(1999)03-0153-03 腦憶清膠囊系根據(jù)明代古方改劑型而研制的中藥新制劑。具有補(bǔ)腎益精、養(yǎng)心安神、健腦益智的功效。臨床多用于主治中老年人記憶力減退、失眠、多夢(mèng)以及神經(jīng)衰弱、小兒智力發(fā)育不全等癥。我們利用老年小鼠和模擬老年癡呆的病理模型大鼠來(lái)研究NYQ對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)的影響，以探討其延緩腦功能衰老和促進(jìn)

3、記憶的機(jī)理。 1材料與方法 1.1材料 1.1.1藥物與試劑腦憶清膠囊為本所自制，由制首烏、熟地、枸杞子、酸棗仁、柏子仁、石菖蒲、茯神、山藥等藥味組成，批號(hào)：961015。腦復(fù)康片由合肥制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)：960422。柳酸毒扁豆堿、乙酰硫代膽堿(AThch)、5，5'-聯(lián)硫代-雙-(2-硝基苯甲酸)(DTNB)，均由上?；瘜W(xué)試劑采購(gòu)供應(yīng)站提供，進(jìn)口分裝。谷胱甘肽，由上?；瘜W(xué)試劑分裝廠提供，批號(hào)：950810。3H-QNB，英國(guó)Amersharm產(chǎn)品，比活度1.5TBq(42Ci).mmo1-1。其他均為分析純?cè)噭?1.1.2動(dòng)物及分組Wistar大鼠(180220g)，老年小鼠(24

4、月齡)，青年小鼠(4月齡)，均由安徽醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。大鼠60只，雌雄各半，隨機(jī)分為6組：即正常組、癡呆模型組、模型加腦復(fù)康組、模型加NYQ小、中、大劑量組，除正常組外，其余每鼠投以AlCl320mg.d-1，共飼養(yǎng)90d，給藥及劑量見(jiàn)表1。老年小鼠50只，隨機(jī)分5組，即老年組、腦復(fù)康組、NYQ小、中、大劑量組，另設(shè)青年對(duì)照組10只，給藥90d，給藥及劑量見(jiàn)表2。 表1NYQ對(duì)癡呆大鼠記憶能力的影響(±s) 組別 劑量 /(g.kg-1) 潛伏期/s 5min錯(cuò)誤 百分率/% 正常組 N.S 221.50±114.57 30 模型組 N.S 100.63±

5、96.72 80 腦復(fù)康組 0.15 210.69±122.79* 40 NYQ小劑量組 0.88 236.40±108.50* 30 NYQ中劑量組 1.75 256.80±80.87* 40 NYQ大劑量組 3.50 227.69±118.88* 30 注：與正常組比較，P0.01；與模型組比較，*P0.01；N=10。 表2NYQ對(duì)擬癡呆大鼠腦AchE的影響(±s) 組別 劑量/(g.kg-1) 每克腦組織AchE 含量/g 正常組 N.S 107.63±13.82 模型組 N.S 127.63±10.14 腦復(fù)康組

6、0.15 115.20±9.92* NYQ小劑量組 0.88 117.49±15.03* NYQ中劑量組 1.75 113.18±11.52* NYQ大劑量組 3.50 114.17±10.22* 注：與正常組比較，P0.001；與模型組比較，*P0.05，*P0.01；N=10。 1.2方法 1.2.1大鼠記憶能力檢測(cè)采用跳臺(tái)法1略加改進(jìn)。實(shí)驗(yàn)裝置為30×30×30cm的反射箱，箱底鋪以銅柵，通50V電流，箱內(nèi)放一高達(dá)10cm的絕緣跳臺(tái)。非條件刺激為足底受電法。訓(xùn)練時(shí)，電擊10s，間歇20s，直至大鼠跳上跳臺(tái)為止。記錄5min內(nèi)的觸

7、電次數(shù)及從電擊區(qū)跳到跳臺(tái)安全區(qū)后第一次重新觸電的潛伏期(大于5min按5min計(jì))和5min錯(cuò)誤百分率。第1天訓(xùn)練，讓每只大鼠均遭電擊然后跳上跳臺(tái)一次，第2天測(cè)驗(yàn)。 1.2.2大鼠腦膽堿酯酶的測(cè)定2將大鼠斷頭，冰臺(tái)上分離出腦組織，精密稱(chēng)取約100mgCer,加0.1mol.L-1pH7.4PBS10mL勻漿。再取腦勻漿0.2mL(對(duì)照管加0.1%柳酸毒?扁?豆?堿1滴)，再加0.1mol.L-1pH7.4PBS1.3mL,37水浴5min，加入2.5mmol.L-1ATHch0.5mL，繼續(xù)水浴15min，反應(yīng)結(jié)束后測(cè)定管加0.1%柳酸毒扁豆堿1滴。取出加1.5mol.L-1DTNB0.5mL

8、，混勻，4000r.min-1離心15min，取上清液，在412nm波長(zhǎng)處測(cè)光密度。標(biāo)準(zhǔn)曲線用不同濃度的谷胱甘肽液加入DTNB制成。 1.2.3小鼠記憶能力檢測(cè)采用跳臺(tái)法和避暗法，分別記錄每組動(dòng)物5min內(nèi)的錯(cuò)誤次數(shù)及潛伏期，詳見(jiàn)文獻(xiàn)3。 1.2.4M受體測(cè)定4先將小鼠斷頭，迅速取出大腦，冰浴上制備腦膜受體蛋白標(biāo)本。再根據(jù)3H-QNB與腦膜蛋白結(jié)合的特性，使用單點(diǎn)法，完成放射配基結(jié)合反應(yīng)系統(tǒng)。采用微量Lowry法，測(cè)量蛋白質(zhì)濃度。然后根據(jù)配基的比活度和復(fù)合物的放射性求得受體結(jié)合點(diǎn)數(shù)，單點(diǎn)法Rt值計(jì)算如下： 2結(jié)果 2.1對(duì)擬癡呆大鼠記憶能力的影響從一次被動(dòng)回避試驗(yàn)結(jié)果看，模型組動(dòng)物潛伏期比正常

9、組縮短(P0.01)，而且錯(cuò)誤百分率也比正常組高出50%，說(shuō)明大鼠投以AlCl390d后已造成實(shí)驗(yàn)性癡呆模型。腦復(fù)康及NYQ各劑量組大鼠的潛伏期比模型組明顯延長(zhǎng)(P0.01)，而且5min內(nèi)的錯(cuò)誤百分率亦比模型組低得多，提示腦復(fù)康和NYQ各劑量組對(duì)實(shí)驗(yàn)性癡呆模型有一定的治療作用，均可改善大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能，基本上達(dá)到正常組水平。見(jiàn)表1。 2.2對(duì)實(shí)驗(yàn)性癡呆大鼠AchE活性的影響測(cè)定各組動(dòng)物Cer中AchE含量，結(jié)果表明：模型組與正常組比較有極顯著性差異(P0.001)，說(shuō)明投以AlCl3已造成大鼠腦AchE的含量升高，進(jìn)而造成實(shí)驗(yàn)性癡呆模型，與其學(xué)習(xí)記憶功能低下相一致。腦復(fù)康及NYQ各劑量組與

10、模型組相比較，有非常顯著性差異(P0.050.01)，提示腦復(fù)康與NYQ各劑量均能夠?qū)勾笫笠蜷L(zhǎng)期服用AlCl3所引起的腦AchE的升高，二者具有同等的藥理作用，說(shuō)明NYQ對(duì)實(shí)驗(yàn)性癡呆模型大鼠具有一定的治療作用。見(jiàn)表2。 2.3對(duì)老年小鼠記憶能力的影響老年小鼠隨著增齡，其學(xué)習(xí)記憶能力明顯低于青年小鼠(P0.050.01)，而連續(xù)灌服NYQ90d后，可使衰退的學(xué)習(xí)記憶功能明顯得到改善，跳臺(tái)反應(yīng)和避暗反應(yīng)的潛伏期延長(zhǎng)(P0.050.01)，5min錯(cuò)誤反應(yīng)次數(shù)減少(P0.050.01)。結(jié)果見(jiàn)表3。 表3NYQ對(duì)老年小鼠記憶能力的影響(±s) 組別 劑量 /(g.kg-1) 跳臺(tái)法 避暗

11、法 潛伏期/s 5min錯(cuò)誤次數(shù)/次 潛伏期/s 5min錯(cuò)誤次數(shù)/次 青年組 N.S 230.50±68.70 0.33±0.52 203.27±67.52 0.85±0.77 老年組 N.S 137.50±108.31 1.50±1.08 108.00±89.16 2.40±1.58 腦復(fù)康組 0.30 247.00±101.55* 0.40±0.70* 226.67±87.86* 0.78±0.83* NYQ小劑量組 1.75 253.18±81.56* 0.

12、36±0.50* 201.82±90.61* 0.82±0.75* NYQ中劑量組 3.50 236.25±99.62* 0.42±0.67* 207.08±88.27* 0.83±0.58* NYQ大劑量組 7.00 250.00±87.78* 0.63±0.49* 198.75±83.53* 1.08±0.99* 注：與青年組比較，P0.05，P0.01；與老年組比較，*P0.05，*P0.01;N=10。 2.4對(duì)老年小鼠腦M受體的影響由表4可看出，老年模型小鼠Cer中M-受體R

13、t值比正常青年小鼠明顯降低，差異有非常顯著性意義(P0.01)，而NYQ可提高老年小鼠腦M-受體Rt值，與老年對(duì)照小鼠比較，差異有顯著性(P0.05)。 表4NYQ對(duì)老年小鼠腦M-受體Rt值的影響(±s) 組別 劑量 /(g.kg-1) N/只 每毫克膜蛋白中 M-受體Rt值/fmol 青年組 N.S 9 1130±174 老年組 N.S 9 946±320 腦復(fù)康組 0.30 9 1132±120* NYQ小劑量組 1.75 8 1044±810* NYQ中劑量組 3.50 9 1085±124* NYQ大劑量組 7.00 9 11

14、06±163* 注：與青年組比較，P0.01；與老年組比較，*P0.05，*P0.01。 3討論 膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)的變化與學(xué)習(xí)記憶功能密切相關(guān)。癡呆模型動(dòng)物，其大腦組織中M-受體Rt值明顯低于正常青年動(dòng)物，而腦AchE活性則升高，并伴有明顯的行動(dòng)遲緩、學(xué)習(xí)記憶功能減退等一系列腦功能減退現(xiàn)象5。我們用AlCl3造成了動(dòng)物記憶功能障礙，腦組織Cer中AchE含量增高的擬癡呆大鼠動(dòng)物模型，用中藥NYQ進(jìn)行治療，從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可看出NYQ可改善癡呆大鼠的記憶功能，并可對(duì)抗因AlCl3引起的腦AchE含量升高，進(jìn)而改善癡呆大鼠膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)功能低下的癥狀；老年小鼠服用NYQ后，動(dòng)物的學(xué)習(xí)記憶功能明顯

15、改善，腦Cer中M-受體Rt值明顯升高。文獻(xiàn)報(bào)道中藥益智作用機(jī)理主要與提高老年小鼠腦M受體Rt值、衰老模型小鼠Cer中單胺類(lèi)遞質(zhì)含量6及降低擬癡呆大鼠Cer中AchE活性、衰老模型小鼠腦MAO-B活性7有關(guān)，從而達(dá)到改善腦功能，延緩腦細(xì)胞衰老，增強(qiáng)記憶的目的，與中藥NYQ具有健腦益智作用相吻合。 基金項(xiàng)目：國(guó)家醫(yī)藥管理局青年科研基金資助課題(95-Q-09) 作者單位：黃世福梁?jiǎn)⒂拢喊不帐∷幬镅芯克?，合?30022；陳勤夏宗勤：上海第二醫(yī)科大學(xué)細(xì)胞調(diào)控研究室，上海200025 參考文獻(xiàn)： 1李儀奎.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)M.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1991.173. 2倪正新.腦膽堿酯酶Ellman測(cè)定法的改良J.南通醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1990；10(3)：235. 3張均田，齋藤洋.十二種化學(xué)藥品破壞小鼠被動(dòng)回避性行為跳臺(tái)試驗(yàn)和避暗試驗(yàn)作用的比較觀察J.藥學(xué)學(xué)報(bào)，1986；21(1)：12. 4胡雅兒，易寧育，夏宗勤，等.用放射配基