談夏至草醇提物對(duì)休克大鼠自由基損傷的影響

1、談夏至草醇提物對(duì)休克大鼠自由基損傷的影響    摘要：目的觀察夏至草醇提物對(duì)失血性休克大鼠多器官自由基損傷的影響。方法Wistar雄性大鼠18只，隨機(jī)分為夏至草組、模型組和對(duì)照組（均n=6）。夏至草組和模型組復(fù)制失血性休克模型，維持90 min，對(duì)照組僅手術(shù)。夏至草組自頸靜脈緩慢推注夏至草醇提物（5 g/ml，6 g/kg·bw），其它兩組以等量生理鹽水代替。40 min后，制備肝、腎、心肌、肺組織勻漿，觀察組織勻漿自由基指標(biāo)的變化。結(jié)果與對(duì)照組相比，模型組肝、腎、心肌、肺組織勻漿MDA含量顯著升高，SOD活性降低；夏至草組各器官組織勻漿MDA

2、含量顯著低于模型組，SOD活性升高，除心肌組織勻漿SOD活性低于對(duì)照組外，其它各指標(biāo)與對(duì)照組均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論夏至草醇提物能明顯減輕大鼠重癥失血性休克后各器官的自由基損傷。 關(guān)鍵詞： 夏至草 失血性休克 器官 自由基淋巴循環(huán)是循環(huán)系統(tǒng)的重要組成部分，近年來(lái)，淋巴循環(huán)維持機(jī)體穩(wěn)態(tài)和疾病中的作用逐漸受到重視1。失血性休克（hemorrhagic shock）致組織微循環(huán)低灌注是引起肺、心、腎、肝等多個(gè)器官的功能障礙、誘發(fā)多器官功能障礙綜合征（multiple organ dysfunction syndrome, MODS）的主要因素之一。我室研究表明，淋巴微循環(huán)與休克的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸關(guān)系密切

3、2，良好的淋巴微循環(huán)有利于休克的代償，淋巴微循環(huán)障礙可促進(jìn)休克的惡化3。夏至草具有利水消腫、活血化淤作用4，夏至草醇提物可明顯改善大鼠的淋巴微循環(huán)障礙5。本研究觀察了夏至草醇提物對(duì)失血性休克大鼠多器官自由基損傷的影響，旨在闡明夏至草對(duì)失血性休克以及淋巴微循環(huán)的藥理學(xué)作用。1  材料與儀器1.1  動(dòng)物與分組18只健康清潔級(jí)Wistar雄性大鼠（中國(guó)醫(yī)科院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育中心提供），體質(zhì)量220300 g。隨機(jī)均分為3組（均n=6）：對(duì)照組（僅行手術(shù)）、模型組（復(fù)制失血性休克模型，輸血加生理鹽水進(jìn)行治療）、夏至草組（復(fù)制失血性休克模型，輸血加夏至草醇提物進(jìn)行治療，MI）。實(shí)驗(yàn)前大

4、鼠禁食12 h，自由飲水。1.2  藥品與儀器唇形科夏至草屬植物夏至草 Mrrubium incisum Benth 的全草（內(nèi)蒙古駐張家口醫(yī)藥站提供，經(jīng)河北北方學(xué)院中醫(yī)系姜希強(qiáng)教授鑒定），按文獻(xiàn)6報(bào)道方法，制備夏至草醇提物，經(jīng)水煎醇沉，再經(jīng)活性炭脫色、滅菌制成原生藥含量為5 g·ml-1的注射液（pH、澄清度、溶血實(shí)驗(yàn)檢測(cè)均為合格）；戊巴比妥鈉（北京化學(xué)試劑廠生產(chǎn)，批號(hào)20000919）；肝素鈉（北京奧博星生物技術(shù)責(zé)任有限公司生產(chǎn)，批號(hào)001218），F(xiàn)J-200型高速分散均質(zhì)機(jī)（上海標(biāo)本模具廠），自動(dòng)抽注機(jī)（浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)儀器廠）。2  方法2.1 

5、失血性休克模型的復(fù)制及液體復(fù)蘇所有大鼠肌注質(zhì)量分?jǐn)?shù)2的戊巴比妥鈉（50 mg/kg）全身麻醉，無(wú)菌手術(shù)，行右側(cè)頸總動(dòng)脈和左側(cè)頸靜脈插管，備放血及輸液用。舌靜脈注射質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%肝素（1 ml/kg，700 U/ml），全身抗凝。穩(wěn)定10 min后，經(jīng)自動(dòng)抽注機(jī)自頸總動(dòng)脈緩慢放血（失血量以全血量的1/5計(jì)，全血量以體重1/13計(jì)），3 min完成，保留備回輸用。以無(wú)菌林格式液瓶作為L(zhǎng)amson瓶，連接無(wú)菌輸液器，將液面調(diào)整至固定高度，維持低血壓（40 mmHg）90 min，復(fù)制大鼠重癥失血性休克模型7。然后，模型組、夏至草組以自動(dòng)推注機(jī)自左側(cè)頸靜脈緩慢回輸放出之血液；輸血完畢后，夏至草組輸入

6、6 g·kg-1劑量（生藥）的夏至草醇提物（輸前用生理鹽水等倍稀釋?zhuān)?，模型組輸入等量的生理鹽水。對(duì)照組僅麻醉及頸部手術(shù)，不放血及輸液復(fù)蘇。2.2  組織勻漿標(biāo)本的制備行液體復(fù)蘇后（或相當(dāng)）3 h，分別處死動(dòng)物。選擇固定的肝、腎、心、肺組織各0.81.0 g，加9倍的4無(wú)菌生理鹽水，應(yīng)用FJ-200型高速分散均質(zhì)機(jī)低溫制備10%組織勻漿，應(yīng)用高速低溫離心機(jī)以2 500 r/min離心10 min（離心半徑8 cm），取上清液置于-26冰箱內(nèi)。2.3  組織勻漿MDA,SOD測(cè)定應(yīng)用改良硫代巴比妥酸（TBA）微量法測(cè)定各臟器組織勻漿MDA含量、黃嘌呤氧化酶法測(cè)定SOD

7、活性（試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所），嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行操作。組織勻漿蛋白以考馬斯亮藍(lán)法進(jìn)行定量。2.4  統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)以±s表示，經(jīng)SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行單因素方差分析，兩組間比較用兩樣本均數(shù)t檢驗(yàn)，P<0.05為具有顯著性差異。3  結(jié)果3.1  夏至草醇提物對(duì)失血性休克大鼠各器官組織勻漿MDA含量的影響模型組肝、腎、心肌、肺組織勻漿MDA含量均顯著高于夏至草組和對(duì)照組（P<0.01），而夏至草組肝、肺組織勻漿MDA含量與對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表1。3.2  夏至草醇提物對(duì)

8、失血性休克大鼠各器官組織勻漿SOD活性的影響模型組肝、腎、心肌、肺組織勻漿SOD活性均顯著低于對(duì)照組（P<0.01）；夏至草組除腎勻漿SOD活性低于對(duì)照組外（P<0.05），肝、心肌、肺組織勻漿SOD活性與對(duì)照組均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），且各器官組織勻漿SOD活性高于模型組（P<0.01）。見(jiàn)表2。表1  夏至草醇提物對(duì)休克大鼠各器官組織勻漿MDA含量的影響（略）表2  夏至草醇提物對(duì)休克大鼠各器官組織勻漿SOD活性的影響（略）4  討論失血性休克是臨床急癥，微循環(huán)障礙以及凝血功能紊亂是引起大鼠肺、腎、肝等多個(gè)器官的功能障礙、誘發(fā)多器

9、官功能障礙綜合征（multiple organ dysfunction syndrome, MODS）的主要因素之一1。因此，從改善微循環(huán)障礙以及血液流變性異常來(lái)尋找藥物和其他有效措施正成為醫(yī)學(xué)研究的重要課題之一。夏至草具有利水消腫、活血化淤作用6，前期工作研究表明5，靜脈推注不同劑量的夏至草醇提物可改善大鼠的淋巴微循環(huán)障礙，增強(qiáng)腸系膜淋巴管收縮頻率及幅度，腸淋巴流量、蛋白輸出量明顯升高，該作用在6 g/kg劑量時(shí)最顯著，1 g/kg劑量則對(duì)淋巴循環(huán)未發(fā)生影響，在一定范圍內(nèi)呈劑量效應(yīng)關(guān)系。為此，本研究選擇了應(yīng)用6 g/kg的劑量，從自由基損傷角度觀察夏至草醇提物對(duì)急性微循環(huán)障礙大鼠器官損傷的影響，闡明夏至草的藥理學(xué)作用，并為器官損傷的藥物治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。自由基損傷在細(xì)胞損傷乃至器官