論美曲磷酯對血管性癡呆大鼠學習記憶的影響

1、論美曲磷酯對血管性癡呆大鼠學習記憶的影響    摘要：目的探討美曲磷酯對血管性癡呆大鼠學習記憶的影響。方法采用兩血管阻斷法制作大鼠血管性癡呆模型，大鼠隨機分為假手術(shù)組、血管性癡呆模型組、腦復康(100 mg·kg-1·d-1，ig×60)陽性藥物對照組、美曲磷酯(7 mg·kg-1·d-1，ig×60)治療組。Morris水迷宮檢測大鼠學習記憶能力，定位航行實驗以逃避潛伏期及游泳總路程反映其學習成績，空間探索實驗以大鼠穿越平臺次數(shù)、有效區(qū)停留時間及游泳總路程反映其空間記憶成績;顯微鏡觀察大鼠海馬

2、腦區(qū)組織結(jié)構(gòu)改變。結(jié)果模型組大鼠逃避潛伏期、游泳總路程均明顯大于假手術(shù)組(P<0.05)，有效區(qū)停留時間和穿越平臺次數(shù)顯著減少(P<0.05)。美曲磷酯能顯著縮短血管性癡呆大鼠逃避潛伏期、游泳總路程(P<0.05)，與腦復康效果相似而與假手術(shù)組處于同一水平;同時使血管性癡呆大鼠穿越平臺的次數(shù)增加及有效區(qū)停留時間延長(P<0.05)而與假手術(shù)組接近，腦復康則對血管性癡呆大鼠穿越平臺的次數(shù)及有效區(qū)停留時間無明顯影響。病理學觀察顯示模型組大鼠海馬各區(qū)細胞排列疏松、紊亂，細胞層及細胞數(shù)明顯減少，細胞變性嚴重;美曲磷酯組則細胞排列緊密、均勻，細胞層及細胞數(shù)明顯增多，細胞變性減輕與

3、腦復康組形態(tài)變化相似。結(jié)論美曲磷酯可改善血管性癡呆大鼠的學習記憶能力，且改善空間記憶能力優(yōu)于腦復康。 關(guān)鍵詞：  血管性癡呆; 美曲磷酯; Morris水迷宮; 海馬; 學習記憶血管性癡呆 (Vascular Dementia，VD)是老年性癡呆的常見類型之一，系由于缺血性或出血性腦血管病以及急、慢性缺氧性腦血管疾病引起。隨著人口老齡化程度的加大，VD發(fā)病率呈上升趨勢1，該病嚴重影響老年人生活質(zhì)量，給社會和家庭帶來沉重的負擔，因而，進一步探討其發(fā)病機制并尋求有效的藥物日益受到關(guān)注。腦內(nèi)膽堿能神經(jīng)遞質(zhì)在人類學習和記憶過程中起重要作用，近來研究表明VD存在膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)失調(diào)紊亂2,可能是

4、導致癡呆的重要因素。美曲磷酯是目前用于老年癡呆(Alzheimer's Disease,AD)治療的唯一以無活性前體藥物形式存在的AchE抑制藥，對AD病人的綜合能力和認知能力有很好的療效3;但對與AD發(fā)病機制上有一定相關(guān)性VD的研究和治療，目前尚未見文獻報道;本實驗則應用大鼠VD模型，通過行為學檢測，形態(tài)學觀察以探討美曲磷酯對血管性癡呆大鼠神經(jīng)功能的影響，并為其是否可以作用為抗VD藥物應用于臨床提供實驗和理論依據(jù)。1 材料與儀器1.1 動物選取健康年齡為912個月的雄性體質(zhì)量為360400 g的Wistar大鼠80只，由湖北省實驗動物研究中心提供,合格證號SCXK(鄂)2003-00

5、05。1.2 試劑與儀器美曲磷酯(北流市新正獸藥廠，批號20070612)，腦復康(湖北華中藥業(yè)有限公司提供,批號20070303)。Morris水迷宮(成都泰盟科技有限公司)。醫(yī)學圖像分析系統(tǒng)(BI2000型, 成都泰盟科技有限公司)，生物顯微鏡(XSZ-HS7型，重慶光電儀器有限公司),電子分析天平(AUW120D型，日本島津公司)。2 方法2.1 VD模型的制作、分組及給藥 采用“改良兩血管阻斷”4制作大鼠血管性癡呆模型。術(shù)前禁食12 h，10%水合氯醛按350 mg/kg腹腔麻醉后，仰臥位，頸部備皮，碘伏消毒，取頸部正中切口，分離一側(cè)頸總動脈，以4號絲線雙重結(jié)扎，術(shù)后縫合切口。假手術(shù)組

6、只分離一側(cè)頸總動脈，而不結(jié)扎。術(shù)后碘伏消毒傷口3 d，3 d后再對另一側(cè)頸總動脈進行相同的手術(shù)結(jié)扎。將造模成功的大鼠隨機分為美曲磷酯組，腦復康組，模型組，每組20只， 美曲磷酯組藥物劑量為7 mg/kg，腦復康組劑量100 mg/kg，模型組和假手術(shù)組給予等容積生理鹽水，以上各組均按 5 ml/kg灌胃,各組用藥60 d。2.2 行為學檢測術(shù)后56 d開始行Morris水迷宮檢測，歷時5 d，實驗開始前1 d，讓大鼠在Morris水迷宮裝置(撤去平臺)中自由游泳1 min，以熟悉環(huán)境。前四天做定位航行實驗，每次把大鼠依次從Morris水迷宮的4個象限的固定位置面向池壁投入水池中，每象限實驗時間

7、為120 s，記錄大鼠從入水到找到并爬上平臺的時間，這個時間稱為逃避潛伏期(ST)，讓其在平臺上休息60 s后再進行下一象限的檢測。如果在120 s內(nèi)仍未能找到平臺，則將其引導到平臺，逃避潛伏期記為120 s，以第4天逃避潛伏期及游泳總路程作為其學習成績(不同組大鼠選用任一相同象限成績進行比較)。實驗第5天行空間探索實驗，撤走安全平臺,將大鼠從某一固定象限如前操作投入水中,記錄大鼠30s 穿過平臺所在位置的次數(shù)和在水池中的游泳路徑，以大鼠穿越平臺次數(shù)、 有效區(qū)停留時間(以平臺中心為圓心、平臺半徑1.5倍長度為半徑的平臺以外的一個圓環(huán)區(qū)域所停留的時間)及游泳總路程作為其空間記憶成績。2.3 病理

8、學觀察行為學檢測完畢后斷頭處死大鼠，取大鼠海馬組織甲醛固定，然后作HE染色，光鏡觀察。2.4 統(tǒng)計方法Morris水迷宮實驗潛伏期、穿越目標次數(shù)、路徑等指標用SPSS13.0軟件進行Independent-samples T Test檢驗,P<0.05時為有差異，有統(tǒng)計學意義。3 結(jié)果3.1 水迷宮實驗模型組大鼠逃避潛伏期、游泳總路程均明顯大于假手術(shù)組(P<0.05)，穿越平臺次數(shù)和有效區(qū)停留時間顯著減少(P<0.05)。美曲磷酯能顯著縮短血管性癡呆大鼠逃避潛伏期、游泳總路程(P<0.05)，與腦復康效果相似而與假手術(shù)組處于同一水平;同時使血管性癡呆大鼠穿越平臺的次數(shù)增

9、加及有效區(qū)停留時間延長(P<0.05)而與假手術(shù)組接近，腦復康則對血管性癡呆大鼠穿越平臺的次數(shù)及有效區(qū)停留時間無明顯影響。見表12及圖1。表1 各組VD大鼠定位航行實驗的結(jié)果比較表2 各組VD大鼠30 s空間探索實驗的結(jié)果比較3.2 病理學觀察結(jié)果HE染色光鏡下模型組大鼠海馬CA1，CA2等各區(qū)細胞層層數(shù)較假手術(shù)組明顯減少，空泡細胞增多，細胞排列稀疏。美曲磷酯組較模型組海馬CA1，CA2區(qū)細胞層層數(shù)明顯增多，空泡細胞減少，細胞排列緊密、均勻、整齊，較陽性藥物腦復康組大鼠海馬CA1，CA2區(qū)細胞層層數(shù)稍多，細胞排列亦較之緊密、均勻，少見空泡細胞。見圖2。圖2 各組大鼠海馬組織(HE染色)結(jié)構(gòu)變化4 討論研究表明,乙酰膽堿與人類的學習記憶的關(guān)系非常密切,腦缺血可損傷腦部膽堿能神經(jīng)，使Ach含量減少5, 海馬CA1區(qū)神經(jīng)細胞嚴重水腫、變性，胞核固