蛋白表達(dá)不同檢測(cè)方式的比較和分析

1、蛋白表達(dá)不同檢測(cè)方式的比較和分析免疫組化法(immunohistochemistry)原理：免疫組化，是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理抗原抗體反應(yīng)，即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對(duì)其進(jìn)行定位、定性及定量的研究，稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemistry)或免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)(immunocytochemistry)。特點(diǎn)：是融合了免疫學(xué)原理（抗原抗體特異性結(jié)合）和組織學(xué)技術(shù)（組織的取材、固定、包埋、切片、脫蠟、水化等），通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色

2、，來對(duì)組織（細(xì)胞）內(nèi)抗原進(jìn)行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。樣本是細(xì)胞或組織，要在顯微鏡下觀察結(jié)果，可能出現(xiàn)膜陽性、質(zhì)陽性和核陽性。蛋白免疫印跡( Western Blot)原理：蛋白質(zhì)印跡法是將電泳分離后的細(xì)胞或組織總蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到固相支持物NC膜或PVDF膜上，然后用特異性抗體檢測(cè)某特定抗原的一種蛋白質(zhì)檢測(cè)技術(shù)。特點(diǎn)：先要進(jìn)行SDS-PAGE，然后將分離開的蛋白質(zhì)樣品用電轉(zhuǎn)儀轉(zhuǎn)移到固相載體上，而后利用抗原-抗體-標(biāo)記物顯色來檢測(cè)樣品，可以用于定性和半定量。ELISA檢測(cè)原理：酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定法，簡(jiǎn)稱酶聯(lián)免疫法，或者ELISA法，它的中心就是讓抗體與酶復(fù)合物結(jié)合，然后通過顯色來檢

3、測(cè)。特點(diǎn)：用到了免疫學(xué)原理和化學(xué)反應(yīng)顯色，待測(cè)的樣品多是血清、血漿、尿液、細(xì)胞或組織培養(yǎng)上清液，因而沒有用到組織包埋、切片等技術(shù)，這是與免疫組化的主要區(qū)別，操作上 開始需要將抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面，從而使后來形成的抗原-抗體-酶-底物復(fù)合物粘附在載體上，這就是“吸附”的含義。 免疫組化和elisa所用到的原理 大致相同，只是因?yàn)樗鶛z測(cè)的樣品不同，從而在操作方法上有所不同。Elisa多用于定量分析，其靈敏度非常高。3種蛋白檢測(cè)水平的比較蛋白檢測(cè)方式免疫組化法Western blot法ELISA試劑盒法相同點(diǎn)原理：抗體-抗原結(jié)合反應(yīng)不同點(diǎn)樣品類型組織或細(xì)胞組織或細(xì)胞血清、血漿、尿液、細(xì)胞或組

4、織培養(yǎng)上清液分析方式定位、定性及定量的研究(主要是定位，定位敏感性遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于Western blot法)可以用于定性和半定量，定量較免疫組化法準(zhǔn)確多用于定量分析，其靈敏度非常高觀察結(jié)果免疫組化圖（膜陽性、質(zhì)陽性和核陽性）電泳圖（著色的位置和著色深度）蛋白濃度優(yōu)點(diǎn)特異性強(qiáng)、敏感性高、定位準(zhǔn)確、形態(tài)與功能相結(jié)合分析容量大、敏感度高、特異性強(qiáng)靈敏、特異、簡(jiǎn)單、快速、穩(wěn)定、易于自動(dòng)化操作及節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)應(yīng)用范圍惡性腫瘤的診斷與鑒別診斷；確定轉(zhuǎn)移性惡性腫瘤的原發(fā)部位；對(duì)某類腫瘤進(jìn)行進(jìn)一步的病理分型；軟組織腫瘤的治療一般需根據(jù)正確的組織學(xué)分類，因其種類多、組織形態(tài)相像，有時(shí)難以區(qū)分其組織來源，應(yīng)用多種標(biāo)志進(jìn)行

5、免疫組化研究對(duì)軟組織腫瘤的診斷是不可缺少的；發(fā)現(xiàn)微小轉(zhuǎn)移灶，有助于臨床治療方案的確定，包括手術(shù)范圍的確定。為臨床提供治療方案的選擇。是檢測(cè)蛋白質(zhì)特性、表達(dá)與分布的一種最常用的方法。組織抗原的定性定量檢測(cè)；多肽分子的質(zhì)量測(cè)定；病毒的抗體（或抗原）檢測(cè)；疾病早期診斷是分泌性蛋白檢測(cè)首選方法之一。免疫酶染色各種細(xì)胞內(nèi)成份的定位；研究抗酶抗體的合成；顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng)。定量檢測(cè)體液中抗原或抗體成份?！径喾N病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷】各組檢測(cè)方法之間的差別及特點(diǎn)：以下是western和ELISA的區(qū)別：1. western blotting 可以看到特異性的條帶，但

6、是定量比較煩2. ELISA可以直接讀出濃度，但是如果抗體有非特異性結(jié)合，那得到的數(shù)值就不可信。3. WB只能半定量,但是可以檢測(cè)細(xì)胞膜蛋白,這點(diǎn)ELISA做不到4. ELISA可用定量方法檢測(cè)蛋白,也就是說可以觀察不同濃度刺激物對(duì)目的蛋白的影響 5. WB所檢測(cè)的一般是抗原，而ELISA抗原抗體都可以檢測(cè)。6. WB所檢測(cè)的抗原可以知道其分子量的大小，或是否是多聚體、降解產(chǎn)物等，一句話，WB可以確定所用抗體是與那種蛋白起作用的；而ELISA無能為力。7. WB所適用的一抗一般是線性位點(diǎn)的，ELISA線性或構(gòu)象型抗體都可以使用。從另一個(gè)意義上講，WB可以做抗體是線性位點(diǎn)還是構(gòu)象型位點(diǎn)

7、的補(bǔ)充判定，而ELISA不行。8. WB一次處理量就是一塊膠版，10-20個(gè)樣品最多了。ELISA一塊96孔板一次可以處理96個(gè)樣本，可以設(shè)置多個(gè)復(fù)孔、對(duì)照、梯度樣等來提高檢測(cè)的可信度。9. WB操作常見的非特異性條帶，膜本底差，顯色不好等缺點(diǎn)在ELISA上表現(xiàn)得要好得多。 HMGB1、MMP-9和CEA在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)及臨床意義中英文實(shí)例分析：一、免疫組化（免疫組化圖陽性表達(dá)率） 二、western blotting三、ELISAImplication of Leptin-Signaling Proteins and Epstein-Barr Virus in Gastric Carcinomas一、免疫組化（免疫組化圖陽性表達(dá)率）二、western blottingeffect of varying doses of tamoxifen on ovarian his