雙波長分光光度法同時測定藥物中維生素C和維生素E

1、雙波長分光光度法同時測定藥物中雙波長分光光度法同時測定藥物中維生素維生素C和維生素和維生素E 一、實驗目的一、實驗目的 1 1、掌握紫外、掌握紫外可見分光光度計的使用方法?？梢姺止夤舛扔嫷氖褂梅椒?。 2 2、學習在紫外光譜區(qū)同時測定雙組分體系、學習在紫外光譜區(qū)同時測定雙組分體系 維生素維生素C C和維生素和維生素E E的方法。的方法。 雙波長分光光度法同時測定藥物中雙波長分光光度法同時測定藥物中維生素維生素C和維生素和維生素E 二、實驗原理二、實驗原理 維生素維生素C和維生素和維生素E在紫外光區(qū)具有不同的最在紫外光區(qū)具有不同的最大吸收波長，維生素大吸收波長，維生素C是水溶性的，維生素是水溶性的

2、，維生素E是脂溶性的，但它們都能溶于無水乙醇，可在是脂溶性的，但它們都能溶于無水乙醇，可在同一溶液中利用雙組分測定原理同時測定。同一溶液中利用雙組分測定原理同時測定。 雙波長分光光度法同時測定藥物中雙波長分光光度法同時測定藥物中維生素維生素C和維生素和維生素E 二、實驗原理二、實驗原理 朗伯朗伯-比耳定律應用于雙組分體系，可得到下列比耳定律應用于雙組分體系，可得到下列聯(lián)立方程式：聯(lián)立方程式： EECCcckkA111總EECCcckkA222總上下兩個方程式分別為波長上下兩個方程式分別為波長 1、波長、波長 2下總吸下總吸光度、與維生素光度、與維生素C濃度及維生濃度及維生E濃度的關系式。濃度的

3、關系式。解上述方程即可求維生素解上述方程即可求維生素C濃度及維生濃度及維生E濃度濃度雙波長分光光度法同時測定藥物中雙波長分光光度法同時測定藥物中維生素維生素C和維生素和維生素E 三、儀器與試劑三、儀器與試劑 UNICO-2000紫外紫外可見分光光度計及相應的配套可見分光光度計及相應的配套軟件，軟件，石英比色皿石英比色皿(1cm)，容量瓶容量瓶(25ml)，容量瓶容量瓶(10ml )，吸量管吸量管(10 ml ) 移液管移液管(1ml )。維生素維生素C儲備液（儲備液（3.00 molL-1）維生素維生素E儲備液儲備液（4.52molL-1） 雙波長分光光度法同時測定藥物中雙波長分光光度法同時測

4、定藥物中維生素維生素C和維生素和維生素E 四、實驗步驟四、實驗步驟 (一一) 配置標準溶液配置標準溶液1、分別準確取維生素、分別準確取維生素C儲備液儲備液4.00ml、6.00ml、8.00ml、10.00ml于于4個個25ml容量瓶中，用無水容量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻。乙醇稀釋至刻度，搖勻。 2、分別準確取維生素、分別準確取維生素E儲備液儲備液4.00ml、6.00ml、8.00ml、10.00ml于于4個個25ml容量瓶中，用無水容量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻。乙醇稀釋至刻度，搖勻。 雙波長分光光度法同時測定藥物中雙波長分光光度法同時測定藥物中維生素維生素C和維生素和維生素

5、E 四、實驗步驟四、實驗步驟 (二二) 掃描吸收光譜掃描吸收光譜以無水乙醇為參比，取以無水乙醇為參比，取6.00ml的標準溶液，在的標準溶液，在200300nm范圍掃描出維生素范圍掃描出維生素C和維生素和維生素E的的吸收光譜，并確定吸收光譜，并確定 1和和 2，打印譜圖。，打印譜圖。 (三三) 建立工作曲線建立工作曲線以無水乙醇為參比，在波長以無水乙醇為參比，在波長 1和和 2處分別測定步處分別測定步驟驟1配制的配制的8個標準溶液的吸光度。運用個標準溶液的吸光度。運用UNICO-2000數(shù)據(jù)處理軟件系統(tǒng)，分別建立并打印數(shù)據(jù)處理軟件系統(tǒng)，分別建立并打印4條工條工作曲線。作曲線。 雙波長分光光度法

6、同時測定藥物中雙波長分光光度法同時測定藥物中維生素維生素C和維生素和維生素E 四、實驗步驟四、實驗步驟 (四四) 藥物中維生素藥物中維生素C和維生素和維生素E的測定的測定準確稱取準確稱取0.01500.0200g的含有維生素的含有維生素C（抗抗壞血酸）和維生素壞血酸）和維生素E（生育酚）的藥物，溶生育酚）的藥物，溶于無水乙醇中，并用無水乙醇定溶于于無水乙醇中，并用無水乙醇定溶于25ml容量容量瓶中。瓶中。用用1ml移液管吸取上述溶液于移液管吸取上述溶液于10ml容量瓶，用容量瓶，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻。在波長無水乙醇稀釋至刻度，搖勻。在波長 1和和 2處處分別測定其吸光度。分別測定其吸光度

7、。 五五、操作要點和注意事項操作要點和注意事項 雙波長分光光度法同時測定藥物中雙波長分光光度法同時測定藥物中維生素維生素C和維生素和維生素E 1 1、正確使用參比溶液校正儀器。、正確使用參比溶液校正儀器。 2 2、每變換一次波長就需用參比溶液校正儀器。、每變換一次波長就需用參比溶液校正儀器。 雙波長分光光度法同時測定藥物中雙波長分光光度法同時測定藥物中維生素維生素C和維生素和維生素E 六六、數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)處理 1、打印維生素、打印維生素C和維生素和維生素E的吸收光譜圖，確定的吸收光譜圖，確定 1 和和 2。 2、分別打印維生素、分別打印維生素C和維生素和維生素E在在 1和和 2時的時的4條條 工作曲線，求出工作曲線，求出4條曲線的斜率條曲線的斜率 3、計算藥物未知液中的維生素、計算藥物未知液中的維生素C和維生素和維生素E的濃度。的濃度。 雙波長分光光度法同時測定藥物中雙波長分光光度法同時測定藥物中維生素維生素C和維生素和維生素E 七七、思考題思考題 1 1、從維生素從維生素C