雙波長(zhǎng)分光光度法同時(shí)測(cè)定藥物中維生素C和維生素E

1、雙波長(zhǎng)分光光度法同時(shí)測(cè)定藥物中雙波長(zhǎng)分光光度法同時(shí)測(cè)定藥物中維生素維生素C和維生素和維生素E 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊弧?shí)驗(yàn)?zāi)康?1 1、掌握紫外、掌握紫外可見分光光度計(jì)的使用方法。可見分光光度計(jì)的使用方法。 2 2、學(xué)習(xí)在紫外光譜區(qū)同時(shí)測(cè)定雙組分體系、學(xué)習(xí)在紫外光譜區(qū)同時(shí)測(cè)定雙組分體系 維生素維生素C C和維生素和維生素E E的方法。的方法。 雙波長(zhǎng)分光光度法同時(shí)測(cè)定藥物中雙波長(zhǎng)分光光度法同時(shí)測(cè)定藥物中維生素維生素C和維生素和維生素E 二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理 維生素維生素C和維生素和維生素E在紫外光區(qū)具有不同的最在紫外光區(qū)具有不同的最大吸收波長(zhǎng)，維生素大吸收波長(zhǎng)，維生素C是水溶性的，維生素是水溶性的

2、，維生素E是脂溶性的，但它們都能溶于無(wú)水乙醇，可在是脂溶性的，但它們都能溶于無(wú)水乙醇，可在同一溶液中利用雙組分測(cè)定原理同時(shí)測(cè)定。同一溶液中利用雙組分測(cè)定原理同時(shí)測(cè)定。 雙波長(zhǎng)分光光度法同時(shí)測(cè)定藥物中雙波長(zhǎng)分光光度法同時(shí)測(cè)定藥物中維生素維生素C和維生素和維生素E 二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理 朗伯朗伯-比耳定律應(yīng)用于雙組分體系，可得到下列比耳定律應(yīng)用于雙組分體系，可得到下列聯(lián)立方程式：聯(lián)立方程式： EECCcckkA111總EECCcckkA222總上下兩個(gè)方程式分別為波長(zhǎng)上下兩個(gè)方程式分別為波長(zhǎng) 1、波長(zhǎng)、波長(zhǎng) 2下總吸下總吸光度、與維生素光度、與維生素C濃度及維生濃度及維生E濃度的關(guān)系式。濃度的

3、關(guān)系式。解上述方程即可求維生素解上述方程即可求維生素C濃度及維生濃度及維生E濃度濃度雙波長(zhǎng)分光光度法同時(shí)測(cè)定藥物中雙波長(zhǎng)分光光度法同時(shí)測(cè)定藥物中維生素維生素C和維生素和維生素E 三、儀器與試劑三、儀器與試劑 UNICO-2000紫外紫外可見分光光度計(jì)及相應(yīng)的配套可見分光光度計(jì)及相應(yīng)的配套軟件，軟件，石英比色皿石英比色皿(1cm)，容量瓶容量瓶(25ml)，容量瓶容量瓶(10ml )，吸量管吸量管(10 ml ) 移液管移液管(1ml )。維生素維生素C儲(chǔ)備液（儲(chǔ)備液（3.00 molL-1）維生素維生素E儲(chǔ)備液儲(chǔ)備液（4.52molL-1） 雙波長(zhǎng)分光光度法同時(shí)測(cè)定藥物中雙波長(zhǎng)分光光度法同時(shí)測(cè)

4、定藥物中維生素維生素C和維生素和維生素E 四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟 (一一) 配置標(biāo)準(zhǔn)溶液配置標(biāo)準(zhǔn)溶液1、分別準(zhǔn)確取維生素、分別準(zhǔn)確取維生素C儲(chǔ)備液儲(chǔ)備液4.00ml、6.00ml、8.00ml、10.00ml于于4個(gè)個(gè)25ml容量瓶中，用無(wú)水容量瓶中，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻。乙醇稀釋至刻度，搖勻。 2、分別準(zhǔn)確取維生素、分別準(zhǔn)確取維生素E儲(chǔ)備液儲(chǔ)備液4.00ml、6.00ml、8.00ml、10.00ml于于4個(gè)個(gè)25ml容量瓶中，用無(wú)水容量瓶中，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻。乙醇稀釋至刻度，搖勻。 雙波長(zhǎng)分光光度法同時(shí)測(cè)定藥物中雙波長(zhǎng)分光光度法同時(shí)測(cè)定藥物中維生素維生素C和維生素和維生素

5、E 四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟 (二二) 掃描吸收光譜掃描吸收光譜以無(wú)水乙醇為參比，取以無(wú)水乙醇為參比，取6.00ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在200300nm范圍掃描出維生素范圍掃描出維生素C和維生素和維生素E的的吸收光譜，并確定吸收光譜，并確定 1和和 2，打印譜圖。，打印譜圖。 (三三) 建立工作曲線建立工作曲線以無(wú)水乙醇為參比，在波長(zhǎng)以無(wú)水乙醇為參比，在波長(zhǎng) 1和和 2處分別測(cè)定步處分別測(cè)定步驟驟1配制的配制的8個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度。運(yùn)用個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度。運(yùn)用UNICO-2000數(shù)據(jù)處理軟件系統(tǒng)，分別建立并打印數(shù)據(jù)處理軟件系統(tǒng)，分別建立并打印4條工條工作曲線。作曲線。 雙波長(zhǎng)分光光度法

6、同時(shí)測(cè)定藥物中雙波長(zhǎng)分光光度法同時(shí)測(cè)定藥物中維生素維生素C和維生素和維生素E 四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟 (四四) 藥物中維生素藥物中維生素C和維生素和維生素E的測(cè)定的測(cè)定準(zhǔn)確稱取準(zhǔn)確稱取0.01500.0200g的含有維生素的含有維生素C（抗抗壞血酸）和維生素壞血酸）和維生素E（生育酚）的藥物，溶生育酚）的藥物，溶于無(wú)水乙醇中，并用無(wú)水乙醇定溶于于無(wú)水乙醇中，并用無(wú)水乙醇定溶于25ml容量容量瓶中。瓶中。用用1ml移液管吸取上述溶液于移液管吸取上述溶液于10ml容量瓶，用容量瓶，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻。在波長(zhǎng)無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻。在波長(zhǎng) 1和和 2處處分別測(cè)定其吸光度。分別測(cè)定其吸光度

7、。 五五、操作要點(diǎn)和注意事項(xiàng)操作要點(diǎn)和注意事項(xiàng) 雙波長(zhǎng)分光光度法同時(shí)測(cè)定藥物中雙波長(zhǎng)分光光度法同時(shí)測(cè)定藥物中維生素維生素C和維生素和維生素E 1 1、正確使用參比溶液校正儀器。、正確使用參比溶液校正儀器。 2 2、每變換一次波長(zhǎng)就需用參比溶液校正儀器。、每變換一次波長(zhǎng)就需用參比溶液校正儀器。 雙波長(zhǎng)分光光度法同時(shí)測(cè)定藥物中雙波長(zhǎng)分光光度法同時(shí)測(cè)定藥物中維生素維生素C和維生素和維生素E 六六、數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)處理 1、打印維生素、打印維生素C和維生素和維生素E的吸收光譜圖，確定的吸收光譜圖，確定 1 和和 2。 2、分別打印維生素、分別打印維生素C和維生素和維生素E在在 1和和 2時(shí)的時(shí)的4條條 工作曲線，求出工作曲線，求出4條曲線的斜率條曲線的斜率 3、計(jì)算藥物未知液中的維生素、計(jì)算藥物未知液中的維生素C和維生素和維生素E的濃度。的濃度。 雙波長(zhǎng)分光光度法同時(shí)測(cè)定藥物中雙波長(zhǎng)分光光度法同時(shí)測(cè)定藥物中維生素維生素C和維生素和維生素E 七七、思考題思考題 1 1、從維生素從維生素C