革蘭氏染色法的過程及原理

1、精選文檔革蘭氏染色法的過程及原理一，過程1 涂片將培養(yǎng)的不同菌分別作涂片（注意涂片切不可過于濃厚），干燥、固定。固定時通過火焰l 一2 次即可，不可過熱，以載玻片不燙手為宜。2 染色( 1 ）初染加草酸鉸結(jié)晶紫一滴，約一分鐘，水洗。( 2 ）媒染滴加碘液沖去殘水，并覆蓋約一分鐘，水洗。( 3 ）脫色將載玻片上面的水甩凈，并襯以白背景，用95 酒精滴洗至流出酒精剛剛不出現(xiàn)紫色時為止，約20 一30 秒鐘，立即用水沖凈酒精。( 4 ）復(fù)染用番紅液染1 一2 分鐘，水洗。( 5 ）鏡檢干燥后，置油鏡觀察革蘭氏陰性菌呈紅色，革蘭氏陽性菌呈紫色。以分散開的細(xì)菌的革蘭氏染色反應(yīng)為準(zhǔn)，過于密集的細(xì)菌，常常呈

2、假陽性。( 6 ) 同法在一載玻片上以大腸桿菌與枯草芽孢桿菌混合制片，作革蘭氏染色對比。二，原理革蘭氏染色法（Gram stain ）不僅能觀察到細(xì)菌的形態(tài)而且還可將所有細(xì)菌區(qū)分為兩大類：染色反應(yīng)呈藍(lán)紫色的稱為革蘭氏陽性細(xì)菌，用G表示：染色反應(yīng)呈紅色（復(fù)染顏色）的稱為革蘭氏陰性細(xì)菌，用G 一表示。細(xì)菌對于革蘭氏染色的不同反應(yīng)，是由于它們細(xì)胞壁的成分和結(jié)構(gòu)不同而造成的。革蘭氏陽性細(xì)菌的細(xì)胞壁主要是由膚聚糖形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)組成的，在染色過程中，當(dāng)用乙醇處理時，由于脫水而引起網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中的孔徑變小，通透性降低，使結(jié)晶紫一碘復(fù)合物被保留在細(xì)胞內(nèi)而不易脫色，因此，呈現(xiàn)藍(lán)紫色；革蘭氏陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁中膚聚糖含

3、量低，而脂類物質(zhì)含量高，當(dāng)用乙醇處理時，脂類物質(zhì)溶解，細(xì)胞壁的通透性增加，使結(jié)晶紫一碘復(fù)合物易被乙醇抽出而脫色，然后又被染上了復(fù)染液（番紅）的顏色，因此呈現(xiàn)紅色。革蘭氏染色的關(guān)鍵在于嚴(yán)格掌握酒精脫色程度，如脫色過度，則陽性菌可被誤染為陰性菌：而脫色，不夠時，陰性菌可被誤染為陽性菌。此外，菌齡也影響染色結(jié)果，如陽性菌培養(yǎng)時間過長，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈陰性反應(yīng)。青霉素作用機制干擾細(xì)菌細(xì)胞壁的合成。青霉素你的結(jié)果與細(xì)胞壁的成分粘肽結(jié)構(gòu)中德D-丙氨酰-D-丙氨酸近似，可與后者競爭轉(zhuǎn)肽酶，阻礙你粘肽的形成，造成細(xì)胞壁的缺損，使細(xì)菌失去細(xì)胞壁的滲透屏障，對細(xì)菌起到殺滅作用。溶菌酶與青霉素對細(xì)

4、菌細(xì)胞壁的作用溶菌酶作用機制：是一種能水解致病菌種黏多糖的堿性酶，只要通過破壞細(xì)胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖之間的B-1，4糖苷鍵，使細(xì)胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，導(dǎo)致細(xì)胞壁破裂內(nèi)容物流出而使細(xì)菌溶解，溶菌酶還可以和帶負(fù)電荷的病毒蛋白直接結(jié)合，與DNA，RNA，脫輔基蛋白形成復(fù)鹽，使病毒失活，因此該酶具有抗菌消炎，抗病毒等作用判斷細(xì)菌有無鞭毛的方法電鏡觀察，鞭毛染色，半固體穿刺培養(yǎng)，菌落形態(tài)觀察描述細(xì)菌與古細(xì)菌在細(xì)胞膜上的主要化學(xué)區(qū)別在革蘭氏陰性菌的表層，有由肽葡聚糖形成的細(xì)胞壁，在壁的外面，又有由蛋白質(zhì)、磷脂質(zhì)、脂多糖形成的膜層，與里面的細(xì)胞質(zhì)膜相對應(yīng)，特稱此層為細(xì)菌外膜

5、。外膜比細(xì)胞質(zhì)膜的磷脂質(zhì)含量低，但脂多糖的含量則比較高。外膜的蛋白質(zhì)與細(xì)胞質(zhì)膜不同，主要部分為數(shù)種蛋白質(zhì)所構(gòu)成。其主要蛋白質(zhì)的部分與特異的內(nèi)面的肽葡聚糖以共價鍵結(jié)合。脂多糖存在于外膜的最外層。在外膜中僅知有磷脂酶，在細(xì)胞與外界的聯(lián)系中，已看到有許多功能的蛋白質(zhì)，即有各種噬菌體、維生素B12、大腸桿菌素等的受體存在，而其一部分蛋白質(zhì)則與DNA的復(fù)制、細(xì)胞分裂有關(guān)，此外，外膜對水溶性低分子物質(zhì)容易透過，但對抗菌物質(zhì)則是透過的屏障，它對革蘭氏陰性菌間的透過性帶來很大的差異。對于古細(xì)菌來說，細(xì)胞壁不含肽聚糖，有的以蛋白質(zhì)為主，有的含雜多糖，有的類似于肽聚糖，但都不含胞壁酸、D型氨基酸和二氨基庚二酸。缺

6、乏細(xì)胞壁的原核生物，除了自然界天然存在的缺壁細(xì)胞，比如支原體外，實驗室菌種的突變、人為抑制新細(xì)胞壁合成、和對現(xiàn)成細(xì)胞壁進(jìn)行酶解都可以得到缺壁細(xì)胞。 缺壁細(xì)胞主要有四類：型細(xì)菌，原生質(zhì)體，球狀體，以及支原體。型細(xì)菌；形成；實驗室或宿主體內(nèi)通過自發(fā)性突變而形成的遺傳性穩(wěn)定的細(xì)胞壁缺陷菌株特點；細(xì)胞膨大，對滲透敏感，在培養(yǎng)基上可形成油煎蛋狀菌落，具有正常的繁殖能力 實踐意義；沒有了細(xì)胞壁的機械固定，細(xì)胞及其柔韌，呈多樣性，成為“濾過型細(xì)菌”。原生質(zhì)體，球狀體；形成；用溶菌酶除盡原有的細(xì)胞壁，再用青霉素抑制新生細(xì)胞壁的合成，最后得到一層僅有細(xì)胞膜包裹的圓球狀滲透敏感細(xì)胞特點；無完整的細(xì)胞壁，細(xì)胞呈球狀，對滲透壓極其敏感，革蘭氏染色陰性，細(xì)胞不能分裂，對相應(yīng)噬菌體不敏感，無繁殖能力實踐意義；比正常有細(xì)胞壁的細(xì)菌更容易導(dǎo)入外源遺傳物質(zhì)，是研究遺傳規(guī)律和進(jìn)行原生質(zhì)體融合育種的良好材料支原體；形成；在長期進(jìn)化中形成，適應(yīng)自然生活條件特