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1、課時(shí)作業(yè) 41 細(xì)胞工程時(shí)間:30 分鐘滿(mǎn)分:75 分1.1. (15(15 分)()(正定模擬)葉綠體轉(zhuǎn)基因技術(shù)是將外源基因整合到葉綠體基因組中,該技術(shù)能有效改良植物的品質(zhì)。請(qǐng)回答:(1)(1)轉(zhuǎn)基因技術(shù)的核心步驟是構(gòu)建基因表達(dá)載體, 完成該步驟所需要的酶有限制酶和 DNADNA 連接酶 o o(2)(2)將植物體細(xì)胞處理得到原生質(zhì)體, 再通過(guò)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法或基因槍法,將目的基因?qū)朐|(zhì)體,使原生質(zhì)體再生細(xì)胞壁之后,通過(guò)植物組織培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)可得到相應(yīng)的轉(zhuǎn)基因幼苗。(3)(3)原核生物中有重要價(jià)值的外源基因不需要改造和修飾就可在葉綠體中高效表達(dá),據(jù)此分析,原因是葉綠體 DNADNA 與原核生物
2、 DNADNA 結(jié)構(gòu)類(lèi)似。(4)(4)對(duì)大多數(shù)高等植物而言,與傳統(tǒng)的細(xì)胞核轉(zhuǎn)基因相比,葉綠體轉(zhuǎn)基因更穩(wěn)定,其遺傳方式不遵循(填“遵循”或“不遵循”)分離定律,不會(huì)隨花粉(填“花粉”或“卵細(xì)胞”)傳給后代,從而保持了母本(填“父本”或“母本”)的遺傳特性。解析: (1)(1)轉(zhuǎn)基因技術(shù)的操作分四步: 獲取目的基因、 構(gòu)建基因表達(dá)載體、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)和鑒定,其中構(gòu)建基因表達(dá)載體是核心,需要用到限制酶和 DNADNA 連接酶。(2)(2)將目的基因?qū)朐|(zhì)體,可以用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法。原生質(zhì)體再生細(xì)胞壁之后,通過(guò)植物組織培養(yǎng)技術(shù)可得到相應(yīng)的轉(zhuǎn)基因幼苗。(3
3、)(3)外源基因不需要改造和修飾就可在葉綠體中高效表達(dá), 原因是葉綠體DNADNA 與原核生物 DNADNA 結(jié)構(gòu)類(lèi)似。(4 4)葉綠體轉(zhuǎn)基因?qū)儆诩?xì)胞質(zhì)基因,不遵循分離定律,受精卵的細(xì)胞質(zhì)幾乎全部來(lái)自卵細(xì)胞,所以葉綠體轉(zhuǎn)基因不會(huì)隨花粉傳給后代,從而保持了母本的遺傳特性。2.2. (1515 分)現(xiàn)有兩種不同屬的農(nóng)作物,甲植物高產(chǎn)不耐鹽,乙植物低產(chǎn)但耐鹽;欲培育出既高產(chǎn)又耐鹽的植株,以適應(yīng)鹽堿地栽培。請(qǐng)回答:(1 1)采用轉(zhuǎn)基因(雜交、嫁接,轉(zhuǎn)基因)方法可以達(dá)到上述目的,這種育種方法的優(yōu)點(diǎn)是按照人們的意愿打破種屬的界限, 在分子水平上定向地改造生物的性狀(遺傳特性)。(2 2)如采用細(xì)胞工程育種
4、,做法如下:目的植株甲、乙原生質(zhì)體經(jīng)誘導(dǎo)融合完成的標(biāo)志是再生出細(xì)胞壁以胚狀體為材料經(jīng)過(guò)人工薄膜包裝得到的人工種子,在適宜條件下,同樣得到萌發(fā)幼苗,與天然種子相比,人工種子具有哪些顯著的優(yōu)點(diǎn)?(列舉 2 2 條)不發(fā)生性狀分離,保持親本的優(yōu)良性狀;生產(chǎn)上不受季節(jié)的限制。動(dòng)物細(xì)胞工程應(yīng)用較廣泛的是單克隆抗體的制備,單克隆抗體最主要的優(yōu)點(diǎn)是具有特異性強(qiáng)、靈敏度高的特點(diǎn),原因是單克隆抗體是單個(gè) B B 淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合、增殖后產(chǎn)生的抗體。解析:因?yàn)閮煞N植物之間存在著遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙,而嫁接則不適于高產(chǎn)量、抗逆性等性狀的組合,所以只能選擇轉(zhuǎn)基因的方法,因?yàn)檗D(zhuǎn)基因的方法可以打破遠(yuǎn)緣雜交不親和的
5、障礙,定向改造生物的性狀。采用細(xì)胞工程育種,即采用植物體細(xì)胞雜交的手段,先將兩個(gè)物種的細(xì)胞用酶水解的方法去掉細(xì)胞壁獲得原生質(zhì)體,然后誘導(dǎo)兩種原生質(zhì)體融合,當(dāng)融合的細(xì)胞再生中原生質(zhì)體_乙原生質(zhì)體)誘軍,愈傷組織六胚狀出細(xì)胞壁,即標(biāo)志著融合成功;然后再將融合細(xì)胞培養(yǎng)成目的植株。人工種子是經(jīng)植物組織培養(yǎng)得到的,因此可以使后代植株保持親本的優(yōu)良性狀,不發(fā)生性狀分離,而且還有生產(chǎn)上不受季節(jié)限制、易于保存和運(yùn)輸?shù)葍?yōu)點(diǎn);單克隆抗體是由單個(gè) B B 淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合產(chǎn)生的,化學(xué)性質(zhì)單一,因此特異性強(qiáng)、靈敏度高。3.3. (15(15 分)()(湖南永州三校聯(lián)考) )下圖為單克隆抗體制備流程示意圖。(1
6、)(1)圖中過(guò)程是向老鼠中注射特定抗原。對(duì)動(dòng)物細(xì)胞來(lái)說(shuō),過(guò)程獨(dú)有的方法是滅活的病毒處理。過(guò)程的目的是篩詵雜交瘤細(xì)胞。過(guò)程的目的是獲得能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞。(2)(2)在培養(yǎng)過(guò)程中為防止雜菌感染,應(yīng)向培養(yǎng)液中添加抗生差_其體外培養(yǎng)需用 COCO2培養(yǎng)箱,其中 COCO2的培要作用是維持培養(yǎng)液的 pH.pH.o o(3)(3)若要大量制備抗該蛋白的單克隆抗體, 可將該雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠的腹水中使其增殖。(4 4)單克隆抗體與傳統(tǒng)抗體相比,其優(yōu)點(diǎn)是特異性強(qiáng),靈敏度高,可大量制備。解析:(1 1)過(guò)程表示誘導(dǎo)漿細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合,動(dòng)物細(xì)胞特有的誘導(dǎo)融合方法是用滅活的病毒處理。單克隆抗體制備
7、過(guò)程中需兩步篩選:是利用選擇培養(yǎng)基篩選雜交瘤細(xì)胞, 過(guò)程是利用克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)篩選能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞。(2 2)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要提供無(wú)菌、無(wú)毒條件,還需要一定的氣體環(huán)境。(3 3)雜交瘤細(xì)胞可在小鼠腹水中進(jìn)行體內(nèi)培養(yǎng)。4.4. (1515 分)(陜西寶雞一檢) 現(xiàn)有甲、 乙兩個(gè)番茄品種 (染色體數(shù) 2n2n=24=24) , ,其基因型分別為 AAbbAAbb 和 aaBB,aaBB,這兩對(duì)基因位于非同源染色體上,且在光照強(qiáng)度大于 500500 勒克斯時(shí),都不能生長(zhǎng),這是由于它們中的一對(duì)隱性純合基因(a aa a或 bbbb)作用的結(jié)果。取甲乙兩品種的花粉分別培養(yǎng)成植株,將它們的
8、葉肉細(xì)胞制成原生質(zhì)體,并將兩者相混,使之融合,誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞團(tuán)。然后,放到大于 500500 勒克斯光照下培養(yǎng), 結(jié)果有的細(xì)胞團(tuán)不能分化, 有的能分化發(fā)育成植株。請(qǐng)回答下列問(wèn)題:(1 1)甲、乙兩番茄品種花粉經(jīng)過(guò)花藥離體培養(yǎng)技術(shù)而形成的植株是里倍體。(2 2)將葉肉細(xì)胞制成原生質(zhì)體時(shí),使用纖維素酶和果膠酶破除細(xì)胞壁。(3 3)在細(xì)胞融合技術(shù)中,常用的化學(xué)試劑是 PEGPEG。融合后形成的細(xì)胞類(lèi)型有 3_3_種(這里僅考慮 2 2 個(gè)原生質(zhì)體的相互融合)。(4 4)細(xì)胞融合成功的標(biāo)志是再牛出細(xì)胞壁。(5 5)細(xì)胞融合后誘導(dǎo)產(chǎn)生的細(xì)胞團(tuán)叫愈傷組織。(6 6)在大于 500500 勒克斯光照下培養(yǎng),能
9、分化的細(xì)胞團(tuán)的基因型是 AaBbAaBb(這里只考慮 2 2 個(gè)原生質(zhì)體的相互融合)。由該細(xì)胞團(tuán)分化發(fā)育成的植株,其染色體數(shù)是 2424解析:(1 1)由配子直接發(fā)育來(lái)的植株是單倍體。(2 2)葉肉細(xì)胞有細(xì)胞壁,因此要制成原生質(zhì)體時(shí),先要把細(xì)胞壁分解掉,細(xì)胞壁的成分主要為纖維素和果膠,因此要用纖維素酶和果膠酶破除細(xì)胞壁。(3 3)人工誘導(dǎo)植物細(xì)胞融合的方法有物理法和化學(xué)法,常用的化學(xué)試劑是聚乙二醇(PEGPEG), ,可用的物理方法是離心、振動(dòng)、電激。若只考慮兩兩結(jié)合的情況,會(huì)出現(xiàn) 3 3 種類(lèi)型的融合細(xì)胞,即甲細(xì)胞自身融合形成的細(xì)胞,乙細(xì)胞自身融合形成的細(xì)胞及甲和乙細(xì)胞相融合形成的雜種細(xì)胞。
10、(4 4)原生質(zhì)體長(zhǎng)出了新的細(xì)胞壁,說(shuō)明細(xì)胞融合成功。(5 5)細(xì)胞融合后形成雜種細(xì)胞,雜種細(xì)胞經(jīng)過(guò)脫分化形成愈傷組織。(6 6)大于500500 勒克斯光照下培養(yǎng),隱性純合基因(aaaa 或 bbbb)有致死作用,只有雜種細(xì)胞才能存活,即基因型為 AaBbAaBb 的細(xì)胞團(tuán)存活。由雜種細(xì)胞發(fā)育成的植株,其染色體數(shù)是 2424 條。5.5.(1515 分)()(遼寧大連雙基測(cè)試)根據(jù)資料請(qǐng)回答下列問(wèn)題:資料甲:某種細(xì)菌體內(nèi)有抗蟲(chóng)基因,該基因能指導(dǎo)抗蟲(chóng)毒蛋白的合成。我國(guó)科學(xué)家成功地將該抗蟲(chóng)基因?qū)朊藁?xì)胞中, 培育出了抗蟲(chóng)效果好的棉花新品種。資料乙:研究表明,抗 H H 蛋白單克隆抗體能抑制過(guò)量
11、表達(dá) H H 蛋白的乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng),科學(xué)家利用小鼠制備出了抗 H H 蛋白的單克隆抗體。(1 1)資料甲中,獲取抗蟲(chóng)基因時(shí)可使用 EcoRIEcoRI, ,其原因是含抗蟲(chóng)基因的DNADNA 片段中含有 EcoREcoRI I 能夠識(shí)別的特定的核昔酸序列 (答 GAATTCGAATTC 或 EcoR_IEcoR_I 的切割位點(diǎn)給滿(mǎn)分,其他合理答案可酌情給力。向棉花細(xì)胞導(dǎo)入抗蟲(chóng)基因時(shí),我國(guó)科學(xué)家采用了花粉管通道法??瓜x(chóng)基因?qū)朊藁?xì)胞后,為確定棉花植株是否具有抗蟲(chóng)特性以及抗性的程度如何,需要做抗蟲(chóng)的接種實(shí)驗(yàn)進(jìn)行個(gè)體水平的鑒定。(2 2)資料乙中,選擇 H H 蛋白作為單克隆抗體的作用靶點(diǎn),是因?yàn)?/p>
12、 H H 蛋白在成年個(gè)體的正常組織細(xì)胞中低表達(dá)(填“低表達(dá)”或“高表達(dá)”)。將 H H蛋白注射到小鼠體內(nèi),從該小鼠的脾臟中獲得相應(yīng)的 B B淋巴細(xì)胞,將其與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合,細(xì)胞融合利用的原理是細(xì)胞膜具有流動(dòng)性。與植物原生質(zhì)體融合過(guò)程相比,該融合過(guò)程特有的誘導(dǎo)方法是用滅活的病毒處理。在雜交瘤細(xì)胞的體外培養(yǎng)過(guò)程中,培養(yǎng)液中是否需要添加血清常貴(填“需要”或“不需要”);培養(yǎng)箱中充入 5%CO5%CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液(適宜)的 pHpH。為避免培養(yǎng)過(guò)程中代謝產(chǎn)物對(duì)雜交瘤細(xì)胞的毒害,常采取的措施是定期更換培養(yǎng)液(基)。解析: (1 1)EcoREcoRI I 為一種限制酶,能夠識(shí)別特定的核甘酸序列(GAATTCGAATTC)并在特定的位點(diǎn)上進(jìn)行切割,而含抗蟲(chóng)基因的 DNADNA 片段中含有 EcoREcoRI I 的識(shí)別序列和切割位點(diǎn),因此獲取抗蟲(chóng)基因時(shí)可使用 EcoREcoRI I。向棉花細(xì)胞導(dǎo)入抗蟲(chóng)基因時(shí),我國(guó)科學(xué)家采用了花粉管通道法。為確定棉花植株是否具有抗蟲(chóng)特性以及抗性的程度如何,在個(gè)體水平上需進(jìn)行抗蟲(chóng)的接種實(shí)驗(yàn)。(2 2)由題意“抗 H H 蛋白單克隆抗體能抑制過(guò)量表達(dá) H H 蛋白的乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)”可推知:H H 蛋白在成年個(gè)體的正常組織細(xì)胞中低表達(dá)。動(dòng)物細(xì)
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