植物生物技術(shù)復(fù)習(xí)題

1、4 花粉的二型性：在花藥/ 花粉培養(yǎng)時，由于對培養(yǎng)條件的反應(yīng)不同，花粉在形態(tài)上形成兩種類型，一類是具胚性的，在煙草和大麥中，花粉小，染色淺，為胚性的；另一類為花粉大，染色深，朝成熟花粉方向發(fā)展。這種現(xiàn)象即花粉的二型性。6 Ti 質(zhì)粒： Ti 質(zhì)粒是根癌農(nóng)桿菌染色體外的遺傳物質(zhì)，為雙股共價閉合的環(huán)狀DNA 分子。8 .分子標(biāo)記：指在分子水平上可標(biāo)識的遺傳多態(tài)性。主要也指DNA（或核甘酸序列）的多態(tài)性。9 植物細(xì)胞工程: 指以細(xì)胞為基本單位,在體外條件下進(jìn)行培養(yǎng)、繁殖， 或人為地使細(xì)胞某些生物學(xué)特性按人們的意愿生產(chǎn)某種物質(zhì)的過程。10 脫分化：一個成熟細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榉稚鸂顟B(tài)的過程11 體細(xì)胞胚胎發(fā)生：

2、指從體細(xì)胞進(jìn)行的類胚結(jié)構(gòu)的生產(chǎn)。12 雙單倍體：由單倍體加倍形成的純合系。13 體細(xì)胞雜交：指不同種類的原生質(zhì)體不經(jīng)過有性階段，在一定條件下融合創(chuàng)造雜種的過程。14 . T-DNA: T-DNA是農(nóng)桿菌侵染植物細(xì)胞時，從 Ti質(zhì)粒上導(dǎo)入植物細(xì)胞的一段DNA。16 遺傳標(biāo)記：指可以穩(wěn)定遺傳的、易于識別的特殊的遺傳多態(tài)性形式。21 原生質(zhì)體：指采用機(jī)械或酶解法去掉細(xì)胞壁的裸露細(xì)胞。22 植板率：即形成愈傷組織的原生質(zhì)體數(shù)量占所培養(yǎng)原生質(zhì)體總數(shù)的百分比。23 對稱雜種:指雜種中具有融合雙親全部的核遺傳物質(zhì)28 . CPW13M:分離原生質(zhì)體使用的含有13%甘露酉I的CPW鹽溶液29 對稱融合:是親本

3、原生質(zhì)體在融合前未進(jìn)行任何處理的一種融合方式。31. QTL： 數(shù)量性狀座位或者數(shù)量性狀基因座， 它指的是控制數(shù)量性狀的基因在基因組中的 位置32. 主效基因：貢獻(xiàn)率較大，顯著影響個體表型的基因33. 遺傳圖譜：某一物種的染色體圖譜，顯示所知的基因和/ 或遺傳標(biāo)記的相對位置，而不是在每條染色體上特殊的物理位置。34. DNA 限制性內(nèi)切酶：生物體內(nèi)能識別并切割特異的雙鏈DNA 序列的一種內(nèi)切核酸酶。35. 同尾酶：一類識別DNA 分子中不同核苷酸序列，但能酶切產(chǎn)生相同黏性末端的限制性內(nèi)切酶。、填空1 物理滅菌包括 : 高溫高壓滅菌; 干熱滅菌 ; 射線照射滅菌和 過濾滅菌 。2 任意寫出三種常

4、用的培養(yǎng)基： MS, B5, KM8P, N6 等3 胚培養(yǎng)的重要用途是克服種間雜交的不親和性,獲得種間或?qū)匍g雜種。4 外植體脫分化形成愈傷組織一般經(jīng)歷3 個時期， 分別是： 啟動期 ； 分裂期 和 形成期5 胚狀體具有兩個特點(diǎn)： 二極性 和 與母體植物或外植體的維管束系統(tǒng)無直接連系 。6 逆境處理對某些植物的小孢子胚胎發(fā)生具有誘導(dǎo)作用饑餓處理，高溫處理，低溫處理，7分離原生質(zhì)體時果膠酶的作用是8最常用的誘導(dǎo)細(xì)胞融合的方式是9 目前聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)常用到的,任意寫出 4 種常用的逆境處理方式射線，秋水仙素，重金屬脅迫等降解胞間聯(lián)絲。PEG 和 電誘導(dǎo) 融合法。DNA 聚合酶是 Taq 酶 。10

5、 利用分子標(biāo)記輔助選擇的重要條件是目標(biāo)基因與分子標(biāo)記存在緊密連鎖 （或共分離） 關(guān)系。11 種植轉(zhuǎn)基因作物面積最大的 4 個國家分別是美國 ； 阿根廷 ； 加拿大 和 中國2 培養(yǎng)基的成分可以分為三大類，分別是： 無機(jī)營養(yǎng)物 ； 有機(jī)營養(yǎng)物 和植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)。3 .培養(yǎng)條件下花粉的分裂增殖方式有4 種類型，分別是： 營養(yǎng)細(xì)胞發(fā)育途徑；生殖細(xì)胞發(fā)育途徑；營養(yǎng)細(xì)胞與生殖細(xì)胞并進(jìn)途徑和 花粉均等分裂途徑。4 分離原生質(zhì)體時纖維素酶的作用是 降解細(xì)胞壁的纖維素 。5 幼胚培養(yǎng)可以挽救種間雜種胚,但當(dāng)胚體很小時,往往采用 胚珠 培養(yǎng)獲得雜種胚。6 常用的原生質(zhì)體培養(yǎng)方法有： 液體淺層培養(yǎng)法； 固體平板

6、培養(yǎng)法和 液固雙層培養(yǎng)法。7 .Ti質(zhì)粒的T-DNA致瘤基因主要包括兩類基因，分別是 細(xì)胞分裂素合成和生長素合成基因。8 目前種植面積最大的 4 種轉(zhuǎn)基因作物是大豆 ； 棉花 ； 油菜 和 玉米 。9 在遺傳轉(zhuǎn)化中，目前廣泛使用的選擇標(biāo)記是NPTII 基因。10 .聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCRR 一般分變性、復(fù)性和延伸。11 .隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性（RAPD）應(yīng)用的隨機(jī)引物長度一般為10 bp 。12 物理滅菌包括 : 高溫高壓滅菌; 干熱滅菌 ; 射線照射滅菌和 過濾滅菌 。13 任意寫出三種不能高壓滅菌的物質(zhì)： 多糖、秋水仙素、玉米素、赤霉素、抗生素、酶、植物提取物、VB1、VB12、VC等14 過濾

7、滅菌主要是用來滅菌不能高溫高壓滅菌 的物質(zhì)。5 植物細(xì)胞在離體條件下發(fā)育成植株， 主要是通過兩種途徑： 器官發(fā)生途徑和 體細(xì)胞胚胎發(fā)生途徑。6 單倍體可分為兩類 : 一倍單倍體和 多倍單倍體 。7 花藥培養(yǎng) 和 花粉培養(yǎng) 是誘導(dǎo)單倍體的主要途徑。8 分離原生質(zhì)體的主要方法是酶解 法。9 測定原生質(zhì)體活力常用的一種試劑是FDA ，其母液是用 丙酮 配制的。10 任意寫出兩種常用的鑒定體細(xì)胞雜種的方法形態(tài)標(biāo)記 和 分子標(biāo)記 。12 檢測外源基因是否整合進(jìn)植物基因組常用的兩種方法是PCR 技術(shù)和 Southern blotting技術(shù)。1 化學(xué)滅菌包括： 熏蒸滅菌 和 消毒液滅菌。2 任意寫出 5

8、個植物離體遺傳操作常用的設(shè)備： 高壓滅菌鍋； 超凈工作臺 ； 光照培養(yǎng)箱 ； 搖床 和 顯微鏡 。3 從外植體形成愈傷組織大致經(jīng)歷三個時期 : 啟動期 ; 分裂期 和 形成期 。4 胚狀體有兩個特點(diǎn)，即： 二極性 ； 與母體組織無維管束聯(lián)結(jié)。5 培養(yǎng)條件下花粉的分裂增殖方式有四種類型，分別是： 營養(yǎng)細(xì)胞發(fā)育途徑 ；生殖細(xì)胞發(fā)育途徑；營養(yǎng)細(xì)胞和生殖細(xì)胞并進(jìn)發(fā)育途徑和 花粉均等分裂途徑。6 分離原生質(zhì)體使用的主要酶種類包括： 纖維素酶 和 果膠酶 。7 原生質(zhì)體融合一般包括三個技術(shù)環(huán)節(jié)，它們是誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合 ； 選擇融合體或雜種細(xì)胞 和 雜種植株的再生與鑒定。9. 遺傳轉(zhuǎn)化主要分為兩大類，一類是

9、載體介導(dǎo) 的遺傳轉(zhuǎn)化，另一類是非載體介導(dǎo) 的遺傳轉(zhuǎn)化。三、判斷題（下列敘述對的在括號中打M不對的打X2 . CPW溶液的用途是純化和培養(yǎng)原生質(zhì)體（X）3 .原生質(zhì)體對稱融合的產(chǎn)物一定是形成集雙親核、質(zhì)遺傳物質(zhì)于一體的體細(xì)胞雜種（X）5 在配制生長調(diào)節(jié)物質(zhì)時，生長素一般先用少量95%酒精或0.1 M 的 NaOH 溶解，然后定容。（，）6胚狀體的形成必須先誘導(dǎo)愈傷組織，然后從愈傷組織分化胚狀體，否則不能獲得胚狀體（X）7,花藥或花粉培養(yǎng)時，不經(jīng)任何加倍處理也可獲得胚狀體（V）8 .農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化中，T-DNA傾向于插入轉(zhuǎn)錄非活躍區(qū)（X）9 .雙側(cè)標(biāo)記選擇比單標(biāo)記選擇目標(biāo)基因的正確率要高（V

10、）1 .禾本科植物花藥培養(yǎng)不易出現(xiàn)白化苗，而雙子葉植物的白化苗頻率較高（X）2 .常用FDA檢測原生質(zhì)體活力，配制FDA儲備液的方法是將其溶于酒精中（X）3 . A物種與B物種原生質(zhì)體融合應(yīng)該用A（+）B表示 （4 .農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化中，T-DNA的轉(zhuǎn)移對左邊界具有絕對的依賴性（X ）5 .對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌處理時，滅菌需要的時間與培養(yǎng)基的體積有關(guān)（V）6 .在進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)時，外植體的大小對愈傷組織的誘導(dǎo)效果有影響（V）7 . 一般來說，單核靠邊期是花藥培養(yǎng)誘導(dǎo)單倍體的最有效的時期（V）8 .對轉(zhuǎn)基因植物檢測時，如果PCR擴(kuò)增出目的基因特異帶，說明外源基因一定插入到了植物基因組 （X）

11、9.數(shù)量性狀受少數(shù)主效基因控制（X） 10. RFL刖記一般呈顯性遺傳的特點(diǎn)（X）1 .高溫高壓滅菌需要的時間都是在規(guī)定的溫度和壓力下保持15分鐘 （X）2 . MS的無機(jī)鹽和離子濃度較高，養(yǎng)分平衡，是目前使用最多的培養(yǎng)基（V）3 .培養(yǎng)基中常用的碳源是淀粉（X）4 成熟胚和幼胚培養(yǎng)對培養(yǎng)基的要求差異不大, 成熟胚培養(yǎng)能成功的培養(yǎng)基也適合于幼胚培養(yǎng)（x ） 5只要一種基因型易于進(jìn)行體細(xì)胞胚胎發(fā)生,選用該基因型植物的任何組織或器官都可以誘導(dǎo)體細(xì)胞胚胎發(fā)生（x ） 6.體細(xì)胞胚是一個二極結(jié)構(gòu)，不物理地附著于原組織（V）7胚狀體的誘導(dǎo)多需要生長素的參與,但胚狀體的發(fā)育需要去除生長素或降低生長素的濃度

12、（V）8 . 一般情況下單核靠邊期的花藥培養(yǎng)易于獲得成功（V）9 .細(xì)胞雜交的主要用途是克服有性雜交的不親和性，創(chuàng)造育種新種質(zhì)（V）10 .胞質(zhì)雜種是指雙親或其中一方的核遺傳物質(zhì)出現(xiàn)了丟失（X ）11 . T-DNA整合進(jìn)植物基因組是通過同源重組進(jìn)行的（X）12 .在轉(zhuǎn)基因過程中，外源基因能否表達(dá)的關(guān)鍵是它能否整合進(jìn)基因組并遺傳下去（X ）1. pH值對培養(yǎng)基的凝固沒有直接影響（X） 2. KM8P培養(yǎng)基主要用于原生質(zhì)體培養(yǎng)（V）3. 植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)在配制母液時需要先用少量的鹽酸溶解,然后再用水定容到刻度（X）4 .利用胚乳培養(yǎng)可以獲得三倍體，為作物的倍性育種提供新材料（，）5 .植物胚與幼

13、齡組織器官比老化組織、器官更容易去分化，產(chǎn)生大量的愈傷組織（V）6 .由體細(xì)胞產(chǎn)生的類胚結(jié)構(gòu)稱為胚狀體（V）7 .供體植株的生長條件對花藥培養(yǎng)效果沒有任何影響（X）8 .雙子葉植物在花藥培養(yǎng)時比單子葉植物產(chǎn)生白化苗現(xiàn)象嚴(yán)重（X）9 .密度對原生質(zhì)體的培養(yǎng)效果影響不大（X）T-DNA的轉(zhuǎn)移（X）（）280C 以上（X ）10 . 在T-DNA 的轉(zhuǎn)移中左右邊界同樣重要,缺失其中之一不能實(shí)現(xiàn)11 . T-DNA整合進(jìn)植物基因組時優(yōu)先整合到轉(zhuǎn)錄活躍的植物基因位點(diǎn)12 .轉(zhuǎn)基因操作前需要對農(nóng)桿菌進(jìn)行活化培養(yǎng),活化培養(yǎng)的溫度應(yīng)在 四、簡答題1 . 簡述開展原生質(zhì)體融合研究的意義（或用途）克服有性雜交不親

14、和和生殖障礙, 轉(zhuǎn)移有利的農(nóng)藝性狀, 創(chuàng)造新的種質(zhì)材料,轉(zhuǎn)移胞質(zhì)基因,為研究體細(xì)胞遺傳提供途徑和材料2 簡述分子標(biāo)記輔助選擇的優(yōu)勢( a) 利用分子標(biāo)記直接選擇基因型b) 克服性狀鑒定的困難 c) 允許早期選擇， d) 多性狀 / 基因選擇e) 全基因組選擇 f) 顯著地減輕連鎖累贅的程度g) 加快育種進(jìn)程，減少群體規(guī)模，提高育種效率3 . PCL原理：高溫雙鏈 DNA解鏈一一降溫與人工引物結(jié)合一一中溫聚合互補(bǔ) DNA鏈一一重復(fù)3 敘述基因槍轉(zhuǎn)基因方法的優(yōu)缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)： 無宿主限制； 靶受體類型十分廣泛，幾乎包括所有具有潛在分化能力的組織或細(xì)胞； 有特殊的應(yīng)用，可將外源DNA 轉(zhuǎn)入線粒體、葉綠體，

15、也可用于花粉轉(zhuǎn)化、作圖法基因克隆、啟動子研究、與根癌農(nóng)桿菌協(xié)同轉(zhuǎn)化等； 易于操作； 一槍可以命中多個目標(biāo)； 細(xì)胞遭粒子轟炸后仍能成活； 這一方法僅與一些物理參數(shù)有關(guān)。缺點(diǎn) : 轉(zhuǎn)化頻率低、嵌合體較多、結(jié)果的重復(fù)性差且轉(zhuǎn)化的外源基因以多拷貝居多易導(dǎo)致基因沉默 ,遺傳穩(wěn)定性差，而且實(shí)驗(yàn)成本較高。4 植物轉(zhuǎn)基因研究中使用的轉(zhuǎn)基因技術(shù)有哪些？a)整株感染；b)葉盤法；c)基因槍法；d)點(diǎn)激法；e) PEG轉(zhuǎn)化法；f)花粉管通道法；g)超聲波 轉(zhuǎn)化法 ; h) 浸泡法5 小孢子培養(yǎng)與花藥培養(yǎng)相比具有哪些優(yōu)勢？a) 花藥培養(yǎng)有時會由于花藥中的有害物質(zhì)而不能誘導(dǎo)小孢子啟動第一次分裂，小孢子培養(yǎng)則不存在這一問

16、題；b) 花粉已是單倍體細(xì)胞，誘發(fā)后經(jīng)愈傷組織或胚狀體發(fā)育成的小植株都是單倍體植株或雙單倍體，不含有因藥壁、花絲、藥隔等體細(xì)胞組織的干擾而形成的體細(xì)胞植株；c) 由于起始材料是小孢子，獲得的材料總是純合的，不管它是二倍體還是三倍體；d) 小孢子培養(yǎng)可觀察到由單個細(xì)胞開始雄核發(fā)育的全過程，是一個很好的遺傳與發(fā)育研究的材料體系；e) 由于花粉能均勻地接觸化學(xué)的和物理的誘變因素，花粉是研究吸收、轉(zhuǎn)化和誘變的理想材料。以棉花為例，根癌農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化的具體技術(shù)農(nóng)桿菌菌株的培養(yǎng)，2.無菌苗制備，3 棉花外植體與農(nóng)桿菌的共培養(yǎng)，4、 誘導(dǎo)愈傷組織及抗性愈傷組織的篩選， 5 愈傷組織的增殖培養(yǎng)， 6.愈傷組織的分

17、化， 7 再生植株的分化脫毒方法及原理熱處理脫毒：高溫短時處理，地?zé)衢L時處理； 2.組織培養(yǎng)脫毒：莖尖培養(yǎng)脫毒， 莖尖微芽嫁接脫毒， 其他外植體的組織培養(yǎng)方法脫毒3 合并使用熱處理、 莖尖培養(yǎng)或微芽莖尖嫁接脫毒，冷處理結(jié)合莖尖培養(yǎng)，化學(xué)處理結(jié)合莖尖培養(yǎng)，合并使用藥劑、熱處理，培育株心苗離體快速體系的建立無菌培養(yǎng)系的建立， 2 誘導(dǎo)外植體生長與分化， 3 促進(jìn)中間繁殖體的增殖， 4 壯苗與生根，5 .試管苗移栽與管護(hù)載體需要的條件克隆載體的DNA分子上通常含有1個或者多個克隆位點(diǎn)供外源的DNA片段插入到克隆載體上攜帶有外源的DNA片段進(jìn)入到宿主細(xì)胞中能夠進(jìn)行自我復(fù)制，或者外源的DNA片段能夠整合染色體隨著染色體的 DNA 復(fù)制而同步進(jìn)行自我復(fù)制載體必須具有可供選擇的