標(biāo)準(zhǔn)菌株使用標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、標(biāo)準(zhǔn)菌株使用標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程標(biāo)準(zhǔn)菌株使用標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1檢驗(yàn)?zāi)康膶?duì)實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行合理的保存，并規(guī)范合理 的使用流程，保證菌株的性能穩(wěn)定可靠。2范圍微生物實(shí)驗(yàn)室保存的標(biāo)準(zhǔn)菌株。3職責(zé)微生物組工作人員正確執(zhí)行本操作規(guī)程。4術(shù)語和定義4.1 標(biāo)準(zhǔn)菌株其特征進(jìn)行了分類和描述，有明確的來源。ATCC(American Type Culture Collection )美國標(biāo)準(zhǔn)菌株 收藏中心。 4.2標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株標(biāo)準(zhǔn)菌株經(jīng)過一代轉(zhuǎn)接后獲得的同種菌株。4.3 工作菌株標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株傳代后得到的同種菌株。4.4 標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)物標(biāo)準(zhǔn)菌株、標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株、工作菌株的統(tǒng)稱。4.5 質(zhì)控菌株ATCCg佳，但當(dāng)無法獲得時(shí)可以使

2、用 ATCC反化的菌株或我國國家菌種庫儲(chǔ)存的標(biāo)準(zhǔn)菌株。特殊情況，例如 定性試驗(yàn)可用已知的菌種作為質(zhì)控菌株。室間質(zhì)評(píng)的菌 株即可。5保存程序5.1 標(biāo)準(zhǔn)菌株5.1.1 商業(yè)購買的ATC礪準(zhǔn)菌株干粉，-80 C低溫保存, 可以2年以上。安甑真空包裝的，-80 C可長期穩(wěn)定保存。 將標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行編號(hào)和登記。5.1.2 復(fù)蘇用1ml無菌的小牛血清或營養(yǎng)肉湯溶解。根據(jù)菌種的生 長特點(diǎn)，接種到新鮮培養(yǎng)基上選擇適宜的培養(yǎng)條件培養(yǎng) 18-24h。酵母菌要求3天，形成抱子的微生物宜保存抱 子。5.2 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株5.2.1 由復(fù)蘇后的ATC礪準(zhǔn)菌株制備。復(fù)蘇后的標(biāo)準(zhǔn)菌 株要檢查其純度，必要時(shí)進(jìn)行生化試驗(yàn)檢查。刮

3、取培養(yǎng) 物上的菌體，用足量的菌懸浮于防凍培養(yǎng)基中。防凍液 可以是無菌脫纖維羊血、10旭油肉湯。儲(chǔ)存足夠量的標(biāo) 準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株，可用1-2年。一年52周需要52支以上。5.2.2 甘油肉湯保存法成分有蛋白月東、牛肉浸出粉、氯化鈉、甘油、純化木。 相當(dāng)于20%勺甘油。挑取5環(huán)菌落加入到1ml甘油肉湯中 混勻。苛養(yǎng)菌可以適當(dāng)增加菌量。-80 C保存。除鏈球菌 和嗜血桿菌以外細(xì)菌均可使用。保存期限 1-5年。5.2.3 全血保存法成分為脫纖維羊血。挑取5環(huán)菌落加入到1ml甘油肉湯 中混勻。苛養(yǎng)菌可以適當(dāng)增加菌量。-80 C保存。主要用 于保存鏈球菌、嗜血桿菌及厭氧菌。保存期限 1-5年。 5.2.4標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)

4、備菌株進(jìn)行編號(hào)和登記。5.3 工作標(biāo)準(zhǔn)菌株由標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株傳代得到的菌株。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株對(duì) 多向下傳三代。過多的傳種會(huì)增加變異的機(jī)會(huì)。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ) 備菌株根據(jù)菌種特點(diǎn)選擇適宜的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進(jìn)行 培養(yǎng)18-24h即工作標(biāo)準(zhǔn)菌株。儲(chǔ)存在2-8 C,可放四周。 個(gè)別營養(yǎng)要求高的為2周，例如肺炎鏈球菌和嗜血桿菌。 使用時(shí)應(yīng)編號(hào)并登記。5.4 編號(hào)方法每個(gè)菌的保存管都要有唯一的編號(hào)，簽字筆標(biāo)注，便于 查找和管理。來源數(shù)字意義購買 的標(biāo) 準(zhǔn)菌 株1501ATCC2592215 年第 1 株 ATCC2592：儲(chǔ)備 標(biāo)準(zhǔn) 菌株1501ATCC25922-3，由 1501ATCC2592裝代 而來的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌

5、株5.5 記錄管理5.5.1 菌種應(yīng)有嚴(yán)格的登記。每個(gè)編號(hào)都要有詳細(xì)的記錄 包括來源、傳代、保存方法、使用記錄、使用原因、高 壓滅菌記錄等。附表標(biāo)準(zhǔn)菌株記錄表標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株 記錄表5.5.2 菌種保管應(yīng)有專人負(fù)責(zé)，保存于專用冰箱中，雙人 雙鎖，確保菌種安全。保管人員變動(dòng)時(shí)，必須嚴(yán)格交接 手續(xù)。5.5.3 各種菌種應(yīng)按規(guī)定時(shí)間接種，注意菌種有無污染及 變異，如發(fā)現(xiàn)變異時(shí)，應(yīng)及時(shí)更換5.5.4 一個(gè)使用周期結(jié)束后，標(biāo)準(zhǔn)菌株、儲(chǔ)備菌株、工作 菌株都要進(jìn)行高壓滅菌處理，并做好記錄。6使用流程日質(zhì)控周質(zhì)控每周取出一支標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備每月取出一支標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備I；每周取出一支標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備J儲(chǔ)備1-iH-直接作為工作菌株使用，

6、第傳代培養(yǎng)物可以作為第以后的6天 每天都用傳 代培養(yǎng)物傳也可以用最 后一天的的 工作菌株作7天后傳代重新取一直 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌作為“儲(chǔ)存標(biāo)準(zhǔn)菌株”進(jìn)行每天傳代平板作為第二2進(jìn)行純 度檢查 和生化 鑒定?？梢栽僦貜?fù)一 周，規(guī)則同上。 但一般來說工7質(zhì)量控制7.1 觀察菌落的典型形態(tài)是否符合菌種。有沒有雜菌生長。7.2 用氧化酶、觸酶、上機(jī)等生化試驗(yàn)，鑒定菌種有沒有 變化。7.3 如果有污染或懷疑有問題時(shí)，應(yīng)準(zhǔn)備新的首次傳代物 或者獲取新的標(biāo)準(zhǔn)菌株。8參考文獻(xiàn)序 號(hào)唯一性編號(hào)文獻(xiàn)名稱9.1ISBN978-7-117-19862-2/R 19863全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程第四 版9.2ISBN978-7-5478-1226-6/R - 395臨床微生物學(xué)診斷與圖解