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文檔簡介
1、應(yīng)用EXCEL繪制ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線及計(jì)算樣本濃度整體思路:在ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,我們得到的是經(jīng)酶標(biāo)儀讀出的標(biāo)準(zhǔn)品以及樣本的OD值。其中,標(biāo)準(zhǔn)品的濃度已知,我們可以利用標(biāo)準(zhǔn)品的OD值及其相對應(yīng)的濃度,以O(shè)D值為橫坐標(biāo),濃度為縱坐標(biāo),做一條標(biāo)準(zhǔn)曲線,并用公式表示出來。這樣,我們把樣本的OD值以X值代入,便可求出Y值,即樣本濃度。下面我們就一步步來實(shí)現(xiàn)這個目標(biāo):1. 首先,將數(shù)據(jù)整理好輸入Excel,分別為經(jīng)酶標(biāo)儀讀出標(biāo)準(zhǔn)品的OD值及其對應(yīng)的濃度值。 2. 拖動鼠標(biāo)選取完成的數(shù)據(jù)區(qū),并點(diǎn)擊圖表向?qū)?,在圖表類型中選“XY散點(diǎn)圖”,并選擇子圖表類型的“散點(diǎn)圖”(第一個沒有連線的)。如下圖
2、所示。 3. 點(diǎn)擊“下一步”,出現(xiàn)如下圖界面。如是輸入是如本例橫向列表的就不用更改,如果是縱向列表就改選“列”。 在做ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線,并通過此曲線求樣本濃度時,因樣本OD值是已知的,因此,我們需要將OD值設(shè)為X。根據(jù)上圖我們可以看到,橫坐標(biāo)X值為OD值,縱坐標(biāo)Y為標(biāo)準(zhǔn)品濃度,這正是我們想要的。4.有時需要我們手動選擇X值,這時可以點(diǎn)擊“系列”來更改,如下圖。 如果要對橫坐標(biāo)和縱坐標(biāo)進(jìn)行掉換,我們可以就點(diǎn)擊X值和Y值文本框右邊的小圖標(biāo),結(jié)果如下圖:出現(xiàn)上圖后,拖動鼠標(biāo)選取正確的數(shù)據(jù)區(qū)域以調(diào)整X或Y。 5.調(diào)好之后,然后點(diǎn)擊“下一步”出現(xiàn)圖表選項(xiàng)界面,如
3、下圖。 6.點(diǎn)擊“下一步”,在彈出的窗口再點(diǎn)擊“完成”現(xiàn)在一張帶標(biāo)準(zhǔn)值的完整散點(diǎn)圖就已經(jīng)完成,如下圖。 7.到了這一步,散點(diǎn)圖便完成了。我們可能會問,曲線在哪里???其實(shí)很簡單,先點(diǎn)擊圖上的標(biāo)準(zhǔn)值點(diǎn)(記住一定要點(diǎn)選上),然后單擊右鍵,點(diǎn)擊“添加趨勢線”。如下圖: 8.彈出趨勢線類型選擇對話框,有線性,對數(shù),多項(xiàng)等選項(xiàng),如下圖。 9.在選擇之前,我們先對上圖做一下肉眼觀察,如果那些點(diǎn)能連成一條直線,或接近直線,我們就選擇“線性”,意思就是出來的趨勢線是一條直線,相應(yīng)的該直線的方程就是y=ax+b的形式。不過,一般的ELISA都不會是所有的標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)呈完全的線性關(guān)
4、系的,也就是說不是一條完全的直線,這時我們可以選擇“多項(xiàng)式”,多項(xiàng)式后面還有“階數(shù)”的選項(xiàng),也就是說求出來的方程是幾次方,我們一般選“2階”,即出來的方程為y=ax2+bx+c.選擇完畢后,彈出以下窗口 10.趨勢線也就是標(biāo)準(zhǔn)曲線在此便顯示出來了。接下來,我們需要將公式顯示出來,以根據(jù)樣本的OD值計(jì)算其濃度值。在鼠標(biāo)點(diǎn)選該線(一定要選中,選中后出現(xiàn)下圖的樣子即線由很多點(diǎn)標(biāo)識出來),單擊鼠標(biāo)右鍵,選擇趨勢線格式11.我們在彈出的窗口中選擇“選項(xiàng)”選項(xiàng)卡,出現(xiàn)下圖,我們選擇顯示公式,顯示R方,即相關(guān)系數(shù),這時公式與R方值便都顯示出來了。 我們將樣本的OD值作為X代入上述方程,求出來的便為濃度值了,哈哈。一般ELISA的標(biāo)準(zhǔn)曲線
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