酵母與酵母雙雜交系統(tǒng)2014圖文精

1、第七章酵母與酵母雙雜交系統(tǒng) 半子囊菌綱 -內(nèi)胞霉目或酵母目 第一節(jié) 酵母菌特性 一、酵母菌概念及特點1、概念:2、特點: ¾個體一般以單細(xì)胞狀態(tài)存在 ¾形態(tài)上:¾大小:寬約 平均直徑 45 ¾多數(shù)營出芽繁殖¾能發(fā)酵糖類產(chǎn)能 ¾細(xì)胞壁常含甘露聚糖 ¾常生活在含糖量較高、酸度較大的水生環(huán)境中,水果、蔬菜、 蜜餞的表面,果園土壤中。 二、細(xì)胞的形態(tài)和構(gòu)造1、細(xì)胞結(jié)構(gòu): 電子顯微鏡下的釀酒酵母細(xì)胞結(jié)構(gòu)示意圖 3、細(xì)胞膜固醇類 4、細(xì)胞核透性比任何生物膜都大 染色體 液泡:5. 細(xì)胞質(zhì) 三、酵母菌培養(yǎng)的菌落固體培養(yǎng)基:菌落特征 :大,

2、圓形,光滑濕潤,粘 性,較厚,外觀較稠和較不透明 。顏色單調(diào)。常見白色、土 黃色、紅色。 液體培養(yǎng)基 ¾¾¾亦可沉淀生長。 四、酵母菌的繁殖方式和生活史 無性繁殖 有性繁殖假酵母:只有無性繁殖過程。真酵母: (一無性繁殖 1、芽殖(budding :子細(xì)胞 出芽痕¾¾¾芽簇 假菌絲 芽殖方式 母細(xì)胞形成小突起(AD核裂(EG原生質(zhì)分配(HI新膜形成(JK形成新細(xì)胞壁(L 芽殖過程 芽殖 2、裂殖:¾¾ 3、產(chǎn)生無性孢子: 子囊孢子 (三酵母菌的生活史生活史又稱生命周期 三種方式:¾營養(yǎng)體既能以單倍體也能以

3、二倍體形式存在 ¾營養(yǎng)體只能以單倍體形式存在 ¾營養(yǎng)體只能以二倍體存在 1、營養(yǎng)體只能以單倍體形式存在 ¾¾¾ 八孢裂殖酵母 S. octosporus的生活史2、營養(yǎng)體只能以二倍體形式存在 ¾¾¾ 路德氏酵母的生活史3、營養(yǎng)體既能以單倍體也能以二倍體形式存在¾¾出芽繁殖 ¾ 釀酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae 的生活史 The yeast cell's life cycle. 1. Budding 2. Conjugation 3. SporeyBu

4、dding Yeast 五、重要病原酵母菌 有性階段為子囊菌亞門 六、酵母轉(zhuǎn)化 Yeast TransformationUsing Frozen Competent Cells andSingle-stranded DNA as a Carrier 1、 Stock solutions 2、 1X TE-LiAc10 mMTris-HCl 0.1 M Lithium acetate 3、 PEG-TE-LiAc 1 mM Preparing competent cells(感受態(tài)細(xì)胞 :1. Inoculate 100 mLyeast synthetic complete medium + 3

5、% glycerol medium from overnight culture. Grow culture to 0.5-1.0 ×107cells/mL. 2. 3. 4. Rotate at 23 for 1.0 -1.5 hr. transformation. Transformation: 4. Add 700 microlitersof PEG-TE-LiAc 第二節(jié) 酵母雙雜交系統(tǒng)The Yeast Two-Hybrid System 1、基本原理¾調(diào)控轉(zhuǎn)錄起始 過程 的認(rèn)識。¾由 Fields 和 Song 等 1989 A. Absence of Regulatory