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1、1.1DNA重組技術(shù)的基本工具編寫教師:申曉飛 審定教師:吳麗雪學(xué)習(xí)目標(biāo)1、 了解基因工程(DNA重組技術(shù))的概念。2、 簡(jiǎn)述DNA重組技術(shù)三種基本工具:限制性內(nèi)切酶、DNA連接酶、載體的作用3、 認(rèn)同基因工程的誕生離不開(kāi)理論研究和技術(shù)創(chuàng)新。學(xué)習(xí)重點(diǎn): DNA重組技術(shù)所需的三種基本工具的作用。學(xué)習(xí)難點(diǎn):基因工程載體需要具備的條件學(xué)習(xí)方法:閱讀教材、自主探究、小組討論、同學(xué)展示。問(wèn)題導(dǎo)讀評(píng)價(jià)單一、知識(shí)回顧:回想一下“基因的表達(dá)”,對(duì)本節(jié)課很有幫助哦;-) 各種生物間的性狀千差萬(wàn)別,這是為什么呢?二、進(jìn)入文本:大家在閱讀教材兩遍之后很容易摘抄回答好地:-P 1、 第一遍通讀教材P1-7在書上劃出你
2、認(rèn)為重要的知識(shí)點(diǎn)。2、 在第二遍閱讀中,從P1總結(jié)一下吧:什么是基因工程? 3、 在第二遍閱讀中,你一定能從P4找出:DNA重組技術(shù)至少需要哪三種工具? 4、 在第二遍閱讀中,細(xì)心的你從P4、5中把以下問(wèn)題解決掉: 準(zhǔn)確切割DNA的“手術(shù)刀”是什么?它是如何準(zhǔn)確切割DNA的? 5、 在第二遍閱讀中,從P5找一找:將DNA片段再連接起來(lái)的“縫合針”是什么? 它是如何將DNA片段“縫合”起來(lái)的? 6、 在第二遍閱讀中,你就要根據(jù)P6用你科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)恼Z(yǔ)言來(lái)表達(dá)了:是什么運(yùn)輸工具將體外重組好的DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞的?作為運(yùn)輸工具的它們必須具備哪些條件?3、 構(gòu)建網(wǎng)絡(luò):三讀教材畫個(gè)美麗的概念圖吧() DNA
3、重組技術(shù)基本工具載體DNA連接酶限制性內(nèi)切酶4、 反思:(一)來(lái)個(gè)四讀看看你通過(guò)閱讀教材你都有哪些收獲*(_)/* 1. 限制性核酸內(nèi)切酶“分子手術(shù)刀” 2. DNA連接酶“分子縫合針” 3. 基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體“分子運(yùn)輸車” (二)最后的五讀你有哪些還是不特別明白呢_ 小組討論后把不能解決的問(wèn)題填寫到問(wèn)題生成評(píng)價(jià)單中五、評(píng)價(jià):請(qǐng)以下各位客觀的給個(gè)分?jǐn)?shù)吧 (。(_)。) (百分制) 自我評(píng)價(jià): 同伴評(píng)價(jià): 學(xué)科長(zhǎng)評(píng)價(jià):展示拓展評(píng)價(jià)單1、 基礎(chǔ)自測(cè):書看夠了嗎?確實(shí)夠了嗎?試試牛刀吧 3) 1以下說(shuō)法正確的是 A所有的限制酶只能識(shí)別同一種特定的核苷酸序列B質(zhì)粒是基因工程中惟一的運(yùn)載體C運(yùn)載體
4、必須具備的條件之一是:具有多個(gè)限制酶切點(diǎn),以便與外源基因連接DDNA連接酶可以用于DNA復(fù)制2.下列四條DNA分子,彼此間具有粘性末端的一組是 A B C D3不屬于質(zhì)粒被選為基因運(yùn)載體的理由是 A能復(fù)制 B有多個(gè)限制酶切點(diǎn) C具有標(biāo)記基因 D它是環(huán)狀DNA4.下列關(guān)于限制酶的說(shuō)法不正確的是A.限制酶主要從原核生物細(xì)胞中分離純化B.不同的限制酶一般識(shí)別不同的核苷酸序列C.限制酶能識(shí)別特定的核苷酸序列,體現(xiàn)了酶的專一性D.限制酶的作用只是用來(lái)提取目的基因5科學(xué)家常選用的細(xì)菌質(zhì)粒往往帶有一個(gè)抗菌素抗性基因,該抗性基因的主要作用是A提高受體細(xì)胞在自然環(huán)境中的耐熱性 B有利于檢測(cè)目的基因否導(dǎo)入受體細(xì)胞
5、C增加質(zhì)粒分子的相對(duì)分子質(zhì)量 D便于與外源基因連接6下圖是基因工程主要技術(shù)環(huán)節(jié)的一個(gè)基本步驟,這一步需用到的工具是A DNA連接酶和解旋酶 BDNA聚合酶和限制酶C限制酶和DNA連接酶 DDNA聚合酶和RNA聚合酶7基因工程中涉及多種工具酶: 限制性內(nèi)切酶是一類能識(shí)別特定核苷酸序列并在特定位點(diǎn)切割雙鏈DNA的“基因剪刀”。被限制酶識(shí)別的序列往往正反讀順序相同,斷裂的位置交錯(cuò),但又是圍繞著一個(gè)軸線(對(duì)稱軸)對(duì)稱排列,如下左圖。PstI和EcoRI都是限制酶。請(qǐng)補(bǔ)全下右圖中的互補(bǔ)鏈,畫出對(duì)稱軸以及切割后的產(chǎn)物。 2、 能力提升:是不是太簡(jiǎn)單了?來(lái)點(diǎn)需要思考討論的。1依右圖有關(guān)基因工程的工具酶功能的
6、敘述,不正確的是 A切斷a處的酶為限制核酸性內(nèi)切酶 B連接a處的酶為DNA連接酶C切斷b處的酶為解旋酶 D切斷b處的為限制性內(nèi)切酶2下列關(guān)于各種酶作用的敘述,不正確的是ADNA連接酶能使不同脫氧核苷酸的磷酸與脫氧核糖連接BRNA聚合酶能與基因的特定位點(diǎn)結(jié)合,催化遺傳信息的轉(zhuǎn)錄C一種DNA限制酶能識(shí)別多種核苷酸序列,切割出多種目的基因D胰蛋白酶能作用于離體的動(dòng)物組織,使其分散成單個(gè)細(xì)胞3在DNA 測(cè)序工作中,需要將某些限制性內(nèi)切核酸酶的限制位點(diǎn)在 DNA上定位,使其成為 DNA 分子中的物理參照點(diǎn)。這項(xiàng)工作叫做“限制酶圖譜的構(gòu)建”。假設(shè)有以下一項(xiàng)實(shí)驗(yàn):用限制酶 Hind,BamH和二者的混合物分
7、別降解一個(gè) 4kb(1kb即1千個(gè)堿基對(duì))大小的線性DNA 分子,降解產(chǎn)物分別進(jìn)行凝膠電泳,在電場(chǎng)的作用下,降解產(chǎn)物分開(kāi),如下圖所示。據(jù)此分析,這兩種限制性內(nèi)切核酸酶在該DNA 分子上的限制位點(diǎn)數(shù)目是以下哪一組?AHind1個(gè),BamH2 個(gè) BHind2個(gè),BamH3個(gè)CHind2個(gè),BamH1 個(gè) DHind和BamH各有2 個(gè)3、 走近高考:都沒(méi)問(wèn)題了?咱們高考吧().例1(2005高考廣東)以下有關(guān)基因工程的敘述,正確的是 ( )A、基因工程是細(xì)胞水平上的生物工程 B、基因工程的產(chǎn)物對(duì)人類都是有益的C、基因工程產(chǎn)生的變異屬于人工誘變 D、基因工程育種的優(yōu)點(diǎn)之一是目的性強(qiáng)例22005天津
8、(1)限制性內(nèi)切酶的識(shí)別序列和切點(diǎn)是GGATCC,限制性內(nèi)切酶的識(shí)別序列和切點(diǎn)是GATC。在質(zhì)粒上有酶的一個(gè)切點(diǎn),在目的基因的兩側(cè)各有1個(gè)酶的切點(diǎn)。請(qǐng)畫出質(zhì)粒被限制酶切割后形成的黏性未端。_請(qǐng)畫出目的基因兩側(cè)被限制酶切割后形成的黏性未端。_在DNA連接酶的作用下,上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性未端能否連接起來(lái)?為什么?_4、 反思:各位通過(guò)練習(xí)都有什么收獲和問(wèn)題呢?寫下來(lái)做個(gè)紀(jì)念吧。5、 評(píng)價(jià):又來(lái)了,各位能給個(gè)滿分嗎?(百分制)自我評(píng)價(jià): 同伴評(píng)價(jià): 學(xué)科長(zhǎng)評(píng)價(jià): 問(wèn)題導(dǎo)讀評(píng)價(jià)單1、 生物體的不同性狀是基因選擇性表達(dá)的結(jié)果。2、 1、 2、基因工程是指按照人們的愿望,進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì),并通
9、過(guò)體外DNA重組和轉(zhuǎn)基因等技術(shù),賦予生物以新的遺傳特性,從而創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。由于基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工的,因此又叫做DNA重組技術(shù)。 3、限制性內(nèi)切酶、DNA連接酶、載體 4、 “手術(shù)刀”是限制性內(nèi)切酶。它能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列,并能使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開(kāi)。 5、“縫合針”是DNA連接酶。它通過(guò)恢復(fù)被限制酶切開(kāi)的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵從而“縫合”DNA片段。 6、運(yùn)輸工具是載體。必須具備的條件:能自我復(fù)制、 有一個(gè)或多個(gè)限制酶切點(diǎn) 、 有一定的標(biāo)志基因、對(duì)受體細(xì)胞無(wú)害等。DNA重組技術(shù)基本工具載體DNA連接酶限制性內(nèi)切酶3、 4、 1. 限制性核酸內(nèi)切酶“分子手術(shù)刀” (1)限制性內(nèi)切酶的來(lái)源:主要是從原核生物中分離純化來(lái)的。4000多種。 (2)限制性內(nèi)切酶的切割方式:在識(shí)別序列的中心軸線兩側(cè)將DNA切開(kāi),切口是黏性末端。沿著中心軸線切開(kāi)DNA,切口是平末端。2. DNA連接酶“分子縫合針” (3)DNA連接酶的分類:E.coliDNA連接酶和T4DNA連接酶。E.coliDNA連接酶作用于黏性末端被切開(kāi)的磷酸二酯鍵,T4DNA連接酶作用于黏性末端和平末端被切開(kāi)的磷酸二酯鍵。 3. 基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體“分子運(yùn)輸車” (4)載體的分類:質(zhì)粒:常存在于原核
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