紫外分光光度法檢驗標準操作規(guī)程

1、文件紫外分光光度法檢驗標準操作規(guī)程編號SOP?09?1008版本2頁碼1/4編制日期替代/審定日期頒發(fā)質(zhì)量保障部批準日期生效年1月20日發(fā)放質(zhì)保中心目的：建立紫外分光度法檢驗標準操作規(guī)程范圍：用于成品、原輔料鑒別、檢查和含量測定1 ?儀器：紫外分光光度計主要由光源、單色器、樣品室、檢測器、記錄儀、顯示系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等部分組成。為了滿足紫外可見光區(qū)全波長范圍的測定，儀器備有二種光源，即笊燈和碘鴇燈，前者用于紫外區(qū)，后者用于可見光區(qū)2 .檢定2.1 波長準確定2.1.1 波長準確度的允差范圍：雙光束光柵型紫外一可見分光光度計波長準確度允許誤差為土0.5mm。單元束棱鏡型350mm處土0.7nm

2、,500nm處土2.0nm,700nm土4.8nm2.2 吸收度準確度：精密稱取在120C干燥至恒重的基準重銘酸鉀約60mg,置1000ml量瓶中，用硫酸液(0.005mol/l)為空白，在235、257、313、350nm分別測定吸收度，然后換算成E1%1cm,測得值應符合下表中規(guī)定的允差范圍(土1%),國際藥典規(guī)定的允差亦為土1%。波長（nm）吸收強度吸收系數(shù)（E1%/1cm）235最小124.5257最大144.0313最小48.62分光光度法允差范圍允差范圍123.3-125.7142.6-145.448.3-49.11350最大106.6105.5107.7分辨率、雜散光、基線平直度

3、、穩(wěn)定度、絕緣電阻等項檢定，按中華人民共和國國家計量檢定規(guī)程JJ6682?90（雙光束紫外可見分光光度計檢定規(guī)程）執(zhí)行，并應符合有關(guān)項下的規(guī)定。日常常規(guī)測定主要是對以上兩項時常檢查。3樣品測定操作法1.1 吸收系數(shù)測定（性狀項下）按各該品種項下規(guī)定的方法配制供試品溶液，在規(guī)定的波長（參見4.8項）測定其吸收度，并計算吸收系數(shù)，應符合規(guī)定的范圍。1.2 鑒別及檢查：按各該品種項下的規(guī)定，測定供試品溶液在有關(guān)波長處的最小及最大吸收，有的并須測定其各最大吸收峰值或最大吸收與最小吸收的比值，均應符合規(guī)定。1.3 含量測定1.3.1 對照品比較法：按各該品種項下規(guī)定的方法，分別配制供試品溶液和對照品溶液

4、，對照品溶液中所含被測成份的量應為供試品溶液中被測成分標示量的（100±10）%以內(nèi)，用同一溶劑，在規(guī)定的波長處測定供試品溶液和對照品溶液的吸收度。1.3.2 吸收系數(shù)法：按各該品種項下配制供試品溶液，在規(guī)定的波長及波長土Inn處測定其吸收度，按各該品種在規(guī)定條件下給出的吸收系數(shù)計算含量。采用吸收系數(shù)法應對儀器進行校正后測定，如為測定新品種的吸收系數(shù)，需按“吸收系數(shù)測定法”的規(guī)定進行。4 注意事項4.1 試驗中所用的量瓶、移液管均應檢定校正，洗凈后使用。4.2 使用的石英吸收池必須潔凈。用于盛裝樣品，參比及空白溶液的吸收池，當裝入同一溶劑時，在規(guī)定測定吸收池的透光率，如透光率相差在0

5、.3%以下者可配對使用，否則必須加以校正。4.3 取吸收池時，手指拿毛玻璃面的兩側(cè)。裝盛樣品溶液以池體積的4/5為度，使用揮發(fā)性溶液時應加蓋，透光面要用擦鏡紙由上而下擦拭干凈，檢視應無殘留溶劑，為防止溶劑揮發(fā)后溶質(zhì)殘留在池子的透光面，可先用醮有空白溶劑擦鏡紙擦拭，然后再用干擦鏡紙拭凈。吸收池放入樣品室時應注意每次放入的方向相同。使用后用溶劑及水洗干凈，晾干防塵保存，吸收池如污染不易洗凈時可用硫酸發(fā)煙硝酸（3：1L/L）混合液稍加浸泡后，洗凈備用。如用鉻酸鉀結(jié)晶會損壞吸收池的光學表面，并應充分用水沖洗，以防鉻酸鉀吸附于吸收池表面。4.4 測定前應先檢查所用的溶劑在測定供試品所用的波長附近是否符合

6、要求，可用Icm石英吸收池盛溶劑以空氣為空白（即參比光路中不放置任何物質(zhì)）測定其吸收度，應符合下表規(guī)定。以空氣為空白測定溶劑在不同波長處的吸收度的規(guī)定波長范圍（nm）220?24024125025I一300300以上吸收度<0.4<0.2<0.1<0.05每次測定時應用同一廠牌批號，混合均勻的1批溶劑。4.5 稱量應按藥典規(guī)定要求。配制測定溶液時稀釋轉(zhuǎn)移次數(shù)應盡可能少，轉(zhuǎn)移稀釋時所取容積一般應不少于5ml。含量測定供試品應稱取2份，如為對照品比照法。對照品一股也應稱取2份。吸收系數(shù)檢查也應稱取供試品2份，平行操作，每份結(jié)果對平均值的偏差應在±0.5%以內(nèi)。作鑒

7、別或或檢查可取樣品1份。4.6 供試品測試溶液濃度，除各該品種項下已有注明者外，供試品溶液的吸收度以在0.3-0.7之間為宜，吸收度讀數(shù)在此范圍誤差較小，并應結(jié)合所用儀器吸收度線性范圍，配制合適的讀烽濃度。4.7 選用儀器的狹縫譜寬度應小于供試品吸收帶的半寬度，否則測的吸收度值會偏低，狹縫寬度的選擇應以減小狹縫寬度時供試品吸收度一再增加為準，對于中國藥典紫外測定的大部分品種，可以使用2nm縫寬，但對某些品種如表青霉素鉀及鈉的吸收度檢查則需用1nm縫寬或更窄，否則其264nm的吸收度會偏低。4.8 測定時除另有規(guī)定者外，應在規(guī)定的吸收峰土2nm外，再測幾點吸度，以核對供品的吸收峰位置是否正確，并

8、以吸收度最大的波長作為測定波長，除另有規(guī)定外吸收度最大波長應該品種項下規(guī)定的波長±1nm以內(nèi)，否則應考慮試樣的同一性，純度以及值儀器波長的準確度。5 結(jié)果計算5.1 對照品比較法：或根據(jù)供試品溶液及對照品溶液的吸收度懷對照品溶液的濃度以正比法算出供試品溶液的濃度，再計算含量A樣品：A對照二C樣品：C對照C樣品=A樣品XC對照/A對照式中：A為吸收度值；C為測試液濃度（以mg/ml計）5.2 吸收系數(shù)法：中國藥典規(guī)定的吸收系數(shù)，系指E1%/lcm,即在指定波長時,光路長度為lcm，試樣濃度換算為1%（g/mL）時的吸收度值，故應先求出被測樣品的F1%/lcm值，再與規(guī)定的E1%/1cm值比較，可計算出供試品的含量。AE1/1cm（樣品）=CXL式中：A為供試品溶液測得的吸收度值；C為供試