無菌檢查方法驗證方案

1、安徽捷眾生物化學有限公司無菌檢查方法（薄膜過 濾法）驗證方案文件編號：QY TS 05 007-00批準日期：年 月曰實施日期年 月曰安徽捷眾生物化學有限公司表批 文件審無菌檢查方法（薄膜過濾法）驗證方案 文件名稱：-00 QY TS 05 007 文件編號：/QC文件提出部門：質(zhì)量控制部 新訂文件起草目的：修訂“日月完成日期：年文件起草人（簽字）：文件會審部門文件審核人（簽字）日期審核質(zhì)量管理部日月年質(zhì)量保證部/QA日月年質(zhì)量控制部/QC日月年生產(chǎn)部日年 月）（工程設(shè)備部日 年 月日月批準日期年文件批準人（簽字）：施起實日年月 文件實施日期：文件編制依據(jù)： 年修訂版和修訂附錄、衛(wèi)生部：藥品生

2、產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范20101年版附 錄。、中華人民共和國藥典（二部）20102校對人：文件復制人：月 日年復制份數(shù)：復制日期：質(zhì)量管理部頒發(fā)部門：分發(fā)單位：備注：安徽捷眾生物化學有限公司無菌檢查方法（薄膜過濾法）驗證方案 錄目驗證目的1 2.驗證頻次 驗證操作內(nèi)容與要求3.3.1.驗證操作試驗試驗菌要求3.23.3驗證方法步驟.3.4.驗證準備 驗證試驗操作3.5 驗證結(jié)果評價分析4 附件5安徽捷眾生物化學有限公司 無菌檢查方法（薄膜過濾法）驗 證方案編號QY TS 05 007-00數(shù) 頁頁共11制定人制定日期日年 月修訂日期日月年審核人審核日期日年 月頒發(fā)部門質(zhì)量管理部批準人批準日期月日年生效

3、日期日月年分發(fā)部門相關(guān)部門1 驗證目的確認所采用的方法適合于供試品的無菌檢查。即確認供試品在該檢驗量、該檢驗條 件下無抑菌活性，以保證檢驗結(jié)果的準確、可靠及檢驗方法的 完整性。驗證頻次2.建立藥品的無菌檢查法時2.1.修訂檢驗方法時2.2.供試品的組分或原檢驗條件發(fā)生改變可能影響檢驗結(jié)果時2.3.驗證操作內(nèi)容與要求：3.3.1.驗證時，按“供試品的無菌檢查”的規(guī)定要求進行驗證操作試驗:對每一試驗菌應逐一進行驗證。3.1.1.硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基一金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽抱桿菌、生3.1.2.抱梭菌。3.1.3.改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基一白色念珠菌、黑曲霉。試驗菌要求:3.2代，并采用適宜

4、的菌種保藏技術(shù)，以保驗證試驗所用的菌株傳代次數(shù)不得超過證試驗菌株的生物學特性。驗證試驗可在供試品的無菌檢查之前或與供 試品的無菌檢查同時進行。當同時進 .行時，若驗證試驗失敗，則供試品的無菌檢查結(jié)果是不成立的3.3驗證方法步驟：.3.31驗證試驗的操作計劃用3個不同批號產(chǎn)品按照無菌檢查方法（薄膜過濾法）進.行平行試驗，通過計算回收率來判斷無菌檢查方法（薄膜過濾法）是否對產(chǎn)品有影響。3.32試驗結(jié)果可接受標準用無菌標準評價方法“0.9 %氯化鈉注射液（三層共擠膜袋）.的無菌檢查”對檢品中無菌檢查試驗結(jié)果應顯示3次獨立的平行試驗中， 稀釋劑對照組的菌回收率應不小于 70%，試驗組的回收率也不低于7

5、0%。3.4.驗證準備：準備驗證所需的供試品、培養(yǎng)基、試藥試劑、儀器設(shè)備和菌種。3.4.1.培 養(yǎng)基硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基；改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基；營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基；血瓊脂培養(yǎng)基 備注：培養(yǎng)基應注明來源；如采用市售干粉培養(yǎng)基，應按說明配制。配制后的培養(yǎng)基應按照中國藥典附錄“無菌檢查法”中“培養(yǎng)基的適用性檢查”項下檢驗無菌性和靈敏度。3.4.2.1.凈化工作臺3422生物潔凈安全柜3.4.2.3.集菌儀3.4.2.4.生化培養(yǎng)箱3.4.2.5.霉菌培養(yǎng)箱3426咼溫試驗箱3.427.臺式火菌器3.428.醫(yī)藥品冷藏柜3.4.2.9.微波爐3.4210.器具無菌培養(yǎng)皿：(直徑90mm ) 無菌移液管(5m

6、l )等備注：以上儀器設(shè)備需要確認與驗證的均應已按要求驗證。3.4.3.菌種3.4.3.1.金黃色葡萄球菌CMCC (B) 260033.4.3.2.枯草芽抱桿菌CMCC (B) 635013.4.3.3.白色念珠菌CMCC (F) 980013.4.3.4.黑曲霉CMCC (F) 980033.4.3.5.銅綠假單胞菌CMCC ( B) 101043.4.3.6.生抱梭菌CMCC (B) 64941操作間應該安裝空氣除菌過濾層流裝置3.442環(huán)境潔凈度不應低于C級，凈化工作臺潔凈度為 A級3.443操作間或凈化工作臺的潔凈空氣應該保持對環(huán)境形成正壓，不低于10pa試驗樣品：批號：0.9%氯化

7、鈉注射液（三層共擠膜袋）生產(chǎn)日期：規(guī)格：250ml批號：生產(chǎn)日期：批號：生產(chǎn)日期：11稀釋液和試劑：PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液無菌十四烷酸異丙酯驗證用微生物名稱及其編號實驗菌株的來源：序號菌株名稱菌株代碼及編號內(nèi)控編號1金黃色葡萄球菌26003BCMCC（）2銅綠假單胞菌10104CMCC (B)3枯草芽抱桿菌63501CMCC (B)4白色念珠菌(F ) 98001CMCC5生抱梭菌(B ) 64941CMCC6黑曲霉F)CMCC ( 98003名稱生產(chǎn)商培養(yǎng)基批號配制日期有效期營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基3.5驗證試驗操作：試驗菌的制備和稀釋：C 將金黃色葡萄球 菌、枯草芽抱桿

8、菌接種至10ml的無菌營養(yǎng)肉湯中在35 °C下培養(yǎng)28小時， 將白色念珠菌接種至良馬丁流體培養(yǎng)基中，182423下培養(yǎng)2448小時。523將黑曲霉接種至改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基中，在28C下培養(yǎng)7天小時。的含菌落數(shù)為的無菌氯化鈉溶液制成每將上述培養(yǎng)物用3.5.1.3 0.9%1ml50100cfu菌懸液。用不同類別的微生物考察供試液及檢驗程序的抑菌性，將試驗分為組 樣品試驗組：無菌十四烷酸異丙酯和無菌玻璃珠適宜容器中，10g準確取供試品A，加至含20ml.必要時可增加十四烷酸異丙酯的用量，充分振搖，使供試品溶解。B然后加入45 C的PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液100ml，振搖510分

9、鐘， 萃取，靜置使油水明顯分層，取其水層作為1: 10的供試液。C用移液管準確吸取1.0ml供試液至平皿中；并在每個平皿中接種 50100cfu 試驗菌，立即傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，每個試驗菌平行接種 2個平皿，按照平皿 法測定其菌數(shù)。菌液組：按中國藥典附錄“無菌檢查法”中“靈敏度檢查”項下的菌液 制備A在平皿中注入1ml的菌液立即傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，以測定所加的菌數(shù)。 B供試品對照組取規(guī)定量的供試液，按菌落計數(shù)方法測定供試品的本底菌數(shù)。C稀釋劑對照組取相應稀釋液1ml加入試驗菌，使最終菌濃度為每ml供試液含50100cfu試驗菌，按試驗組的供試液制備方法和菌落計數(shù)方法測定其菌落 數(shù)。D對于同一份

10、培養(yǎng)物，采用相同的測定方法，不同的試驗人員的測定結(jié)果可能 有很大的誤差。所以在操作過程中，應特別注意能造成誤差的各個環(huán)節(jié)。E當采用固體培養(yǎng)基上的培養(yǎng)物制備菌懸液時，應盡量使菌苔成單個菌體分散于稀釋液中。F為保證每次菌數(shù)測定能在預計的范圍內(nèi)，在對菌液做10倍系列稀釋時，要求稀釋每個濃度的菌液均應換滅菌吸管。G液體培養(yǎng)物直接稀釋法較比濁法造成誤差小，基本保證每次菌數(shù)能控制在要求 的范圍內(nèi)。I最終制得的菌懸液應為小于100CFU/ml。J金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽抱桿菌采用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基；生抱梭 菌采用血瓊脂培養(yǎng)基；白色念珠菌、黑曲霉采用改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基。培養(yǎng)將金黃色葡萄球菌、枯草芽抱桿

11、菌在3050 C下培養(yǎng)48小時將白色 念珠菌、黑曲霉在2328°C下培養(yǎng)72小時，點計菌落數(shù)。并將結(jié)果記錄于附件1。試驗結(jié)果稀釋劑對照組菌的回收率接入菌種%氯化鈉注射液0.9 批號皿）菌落計數(shù)（cfu/回收率稀釋劑對照組菌液組金黃色葡萄 球平均值銅綠假單胞 菌平均值枯草芽抱桿 菌平均值白色念珠菌 平均值生抱梭菌 平均值黑曲霉平 均值=稀釋劑對照組的平均菌落數(shù)十菌液組的平均菌落數(shù)X 100%表中：回收率2試驗組的菌的回收率3.54 cfu/菌落計數(shù)（皿）接入菌種 回收率氯化鈉注射液 0.9.批號試驗組供試品對照組金黃色葡萄 球平均值銅綠假單胞 菌平均值枯草芽抱桿 菌平均值白色念珠菌 平

12、均值生抱梭菌 平均值黑曲霉平 均值(試驗組的平均菌落數(shù)一供試品對照組的平均菌落數(shù)的值)十菌液組的 =表中: 回收率。平均菌落數(shù)X 100% 驗證結(jié)果評價分析 4對驗證結(jié)果的評審應包括：4.11 ()驗證試驗是否有遺漏？.(2) 驗證實施過程中對驗證方案有無修改？修改原因、依據(jù)以及是否經(jīng)過批 準？(3) 驗證記錄是否完整？(4) 驗證試驗結(jié)果是否符合標準要求？偏差及對偏差的說明合理？是否需進一 步補充試驗？4.5.結(jié)果判斷：？4.5.1.供試品按無菌檢查法進行檢查，如含供試品各容器中的試驗菌均生長良好, 結(jié)果判斷驗證無效，并重新進行方法驗證。如含供試品的任一容器中微生物生長微弱、緩慢或不生長，可

13、采用增加沖洗量，增加培養(yǎng)基用量，使用中和劑或滅菌劑；更換濾膜品種等方法，并重新進 行方法驗證。5 附件附件1產(chǎn)品試驗組的微生物生長檢查記錄：菌種名稱cfu/產(chǎn)品試驗組計數(shù)結(jié)果（皿）平均值金黃色葡萄球菌銅綠假單胞菌枯草芽抱桿菌白色念珠菌生抱梭菌黑曲霉供試品對照組的微生物生長檢查記錄菌種名稱皿）供試品對照組計數(shù)結(jié)果（cfu/平均值金黃色葡萄球菌銅綠假單胞菌枯草芽抱桿菌白色念珠菌生抱梭菌黑曲霉稀釋劑照組的微生物生長檢查記錄菌種名稱陽性對照計數(shù)結(jié)果（cfu/皿）平均值金黃色葡萄球菌銅綠假單胞菌枯草芽抱桿菌白色念珠菌生抱梭菌黑曲霉菌液組菌種名稱陽性對照計數(shù)結(jié)果（cfu/皿）平均值金黃色葡萄球菌銅綠假單胞菌枯草芽抱桿菌白色念珠菌生抱梭菌黑曲霉復核人/復核日期:測試人/測試日期:附件2安徽捷眾生物化學有限公司質(zhì)量控制檢測儀器（設(shè)備） 驗證結(jié)果評價表驗證名稱無菌檢查方法（溥膜過濾法） 驗證方案編號VF-PR-17-A驗證結(jié)果評價及建議確 認日驗證小組：年 月附件.安徽捷眾生物化學有限公司）設(shè)備質(zhì)量控制檢測儀器（驗證報告日，驗證小組根據(jù)批準 月年 日至年 月”的無菌檢查方法（薄膜過濾法）驗證文件對無菌檢的編號為“VF-PR-17-A查方法（薄膜過濾法）檢查法進行了相關(guān)的一系列驗證工作，達到了預期效 果, 滋將有關(guān)事項說明如下：驗證方案在實施過程中