葡萄糖測定-葡萄糖氧化酶法

1、精選優(yōu)質文檔-傾情為你奉上葡萄糖氧化酶法測定血清（漿）葡萄糖【原理】葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase ， GOD) 利用氧和水將葡萄糖氧化為葡萄糖酸，并釋放過氧化氫。過氧化物酶 (peroxidase ， POD) 在色原性氧受體存在時將過氧化氫分解為水和氧，并使色原性氧受體 4- 氨基安替比林和酚去氫縮合為紅色醌類化合物，即 Trinder 反應。紅色醌類化合物的生成量與葡萄糖含量成正比?！驹噭? 0.1mol/L 磷酸鹽緩沖液 (pH7.0) 稱取無水磷酸氫二鈉 8.67g 及無水磷酸二氫鉀 5.3g 溶于蒸餾水 800ml 中，用 1mol/L 氫氧化鈉 ( 或 1mol

2、/L 鹽酸 ) 調 pH 至 7.0 ，用蒸餾水定容至 1L 。2 酶試劑 稱取過氧化物酶 1 200U ，葡萄糖氧化酶 1 200U ， 4- 氨基安替比林 10mg ，疊氮鈉 100mg ，溶于磷酸鹽緩沖液 80ml 中，用 1 mol/L NaOH 調 pH 至 7.0 ，用磷酸鹽緩沖液定容至 100ml ，置 4 保存，可穩(wěn)定 3 個月。3 酚溶液 稱取重蒸餾酚 100mg 溶于蒸餾水 100ml 中，用棕色瓶貯存。4 酶酚混合試劑 酶試劑及酚溶液等量混合， 4 可以存放 1 個月。5 12mmol/L 苯甲酸溶液 溶解苯甲酸 1.4g 于蒸餾水約 800ml 中，加溫助溶，冷卻后加蒸

3、餾水定容至 l L 。6 100mmol/L 葡萄糖標準貯存液 稱取已干燥恒重的無水葡萄糖 1.802g ，溶于 12mmol/L 苯甲酸溶液約 70ml 中，以 12mmol/L 苯甲酸溶液定容至 100ml 。 2h 以后方可使用。7 5mmol/L 葡萄糖標準應用液 吸取葡萄糖標準貯存液 5.0ml 放于 100ml 容量瓶中，用 12mmol/L 苯甲酸溶液稀釋至刻度，混勻?！静僮鞑襟E】1 自動分析法 按儀器說明書的要求進行測定。2 手工操作法取試管 3 支，按下表操作。葡萄糖氧化酶法測血糖操作步驟加入物 (ml)空白管標準管測定管血清0.02葡萄糖標準應用液0.02蒸餾水0.02酶酚

4、混合試劑3.03.03.0混勻，置 37 水浴中，保溫 15min ，在波長 505nm 處比色，以空白管調零，讀取標準管及測定管吸光度?！居嬎恪俊緟⒖挤秶?#160;空腹血清葡萄糖為 3.89 6.11mmol/L ?！九R床意義】1 生理性高血糖可見攝入高糖食物后，或情緒緊張腎上腺分泌增加時。2 病理性高血糖(1) 糖尿病：病理性高血糖常見于胰島素絕對或相對不足的糖尿病患者。(2) 內(nèi)分泌腺功能障礙：甲狀腺功能亢進，腎上腺皮質功能及髓質功能亢進。引起的各種對抗胰島素的激素分泌過多也會出現(xiàn)高血糖。注意升高血糖的激素增多引起的高血糖，現(xiàn)已歸入特異性糖尿病中。(3) 顱內(nèi)壓增高：顱內(nèi)壓增高刺激血

5、糖中樞，如顱外傷、顱內(nèi)出血、腦膜炎等。(4) 脫水引起的高血糖：如嘔吐、腹瀉和高熱等也可使血糖輕度增高。3 生理性低血糖 見于饑餓和劇烈運動。4 病理性低血糖 ( 特發(fā)性功能性低血糖最多見，依次是藥源性、肝源性、胰島素瘤等 )(1) 胰島 細胞增生或胰島 細胞瘤等，使胰島素分泌過多。(2) 對抗胰島素的激素分泌不足，如垂體前葉功能減退、腎上腺皮質功能減退和甲狀腺功能減退而使生長素、腎上腺皮質激素分泌減少。(3) 嚴重肝病患者，由于肝臟儲存糖原及糖異生等功能低下，肝臟不能有效地調節(jié)血糖。【注意事項】1 葡萄糖氧化酶對 - D 葡萄糖高度特異，溶液中的葡萄糖約 36% 為 型， 64% 為 型。葡

6、萄糖的完全氧化需要 型到 型的變旋反應。國外某些商品葡萄糖氧化酶試劑盒含有葡萄糖變旋酶，可加速這一反應，但在終點法中，延長孵育時間可達到完成自發(fā)變旋過程。新配制的葡萄糖標準液主要是 型，故須放置 2h 以上 ( 最好過夜 ) ，待變旋平衡后方可應用。2 葡萄糖氧化酶法可直接測定腦脊液葡萄糖含量，但不能直接測定尿液葡萄糖含量。因為尿液中尿酸等干擾物質濃度過高，可干擾過氧化物酶反應，造成結果假性偏低。3 測定標本以草酸鉀氟化鈉為抗凝劑的血漿較好。取草酸鉀 6g ，氟化鈉 4g 。加水溶解至 100ml 。吸取 0.1ml 到試管內(nèi)，在 80 以下烤干使用，可使 2 3ml 血液在 3 4 天內(nèi)不凝

7、固并抑制糖分解。4 本法用血量甚微，操作中應直接加標本至試劑中，再吸試劑反復沖洗吸管，以保證結果可靠。5 嚴重黃疸、溶血及乳糜樣血清應先制備無蛋白血濾液，然后再進行測定?！驹u價】 線性范圍至少可達 22.24mmol/L ，回收率 94% 105% ，批內(nèi) CV 為 0.7% 2.0% 。批間 CV 為 2% 左右，日間 CV 為 2% 3% 。葡萄糖氧化酶法與己糖激酶法比較， 73 份標本葡萄糖氧化酶法均值為 8.31mmol/L ，已糖激酶法均值 8.21mmol/L ，相關系數(shù)為 0.9986 ，回歸方程 y=1.0026x 2.29 。本法測定葡萄糖非常特異，從原理反應式中可

8、知第一步是特異反應，第二步特異性較差。誤差往往發(fā)生在反應的第二步。一些還原性物質如尿酸、維生素 C 、膽紅素和谷胱甘肽等，可與色原性物質競爭過氧化氫，從而消耗反應過程中所產(chǎn)生的過氧化氫，產(chǎn)生競爭性抑制，使測定結果偏低。然而，在本法的測定條件下，溶血標本血紅蛋白的濃度達 10g/L ，黃疸標本膽紅素濃度達 342 mol /L ，維生素 C 小于 30mg/L ，均不影響測定結果。氟化鈉濃度達 2g/L 不干擾測定結果。標本中含尿素濃度達 46.7mmol/L ，尿酸濃度達 2.95mmol/L ，肌酐濃度達 4.42mmol/L 。半胱氨酸濃度達 3.30mmol/L ，甘油三酯濃度達 5.6mmol/L ，膽固醇