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文檔簡(jiǎn)介
1、動(dòng)物模型的設(shè)計(jì)原那么和注事項(xiàng)一、設(shè)計(jì)原那么生物醫(yī)學(xué)科研專業(yè)設(shè)計(jì)中常要考慮如何建立動(dòng)物模型的問題,由于很多說(shuō)明疾病及療效機(jī)制的實(shí)驗(yàn)不可能或不應(yīng)該在病人身上進(jìn)行.常要依賴于復(fù)制動(dòng)物模型,但一定要進(jìn)行周密設(shè)計(jì),設(shè)計(jì)時(shí)要遵循以下一些原那么.一相似性在動(dòng)物身上復(fù)制人類疾病模型.目的在于從中找出可以推廣外推應(yīng)用于病人的有關(guān)規(guī)律.外推法Extrapolation要冒風(fēng)險(xiǎn),由于動(dòng)物與人到底不是一種生物.例如在動(dòng)物身上無(wú)效的藥物不等于臨床無(wú)效,反之也然.因此,設(shè)計(jì)動(dòng)物疾病模型的一個(gè)重要原那么是,所復(fù)制的模型應(yīng)盡可能近似于人類疾病的情況.能夠找到與人類疾病相同的動(dòng)物自發(fā)性疾病當(dāng)然最好.例如日本人找到的大白鼠原發(fā)性
2、高血壓就是研究人類原發(fā)性高血壓的理想模型,老母豬自發(fā)性冠狀動(dòng)脈粥樣硬化是研究人類冠心病的理想模型;自發(fā)性狗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎與人類幼年型類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎十分相似,也是一種理想模型,等等.與人類完全相同的動(dòng)物自發(fā)性疾病模型畢竟不可多得,往往需要人工加以復(fù)制.為了盡量做到與人類疾病相似,首先要注意動(dòng)物的選擇.例如,小雞最適宜做高脂血癥的模型,因它它的血漿甘油三酯、膽固醇以及游離脂肪酸水平與人十分相似,低密度和極低密度脂蛋白的脂質(zhì)構(gòu)成也與人相似.其次,為了盡可能做到模型與人類相似,還要在實(shí)踐中對(duì)方法不斷加以改良.例如結(jié)扎兔闌尾血管,固然可能使闌尾壞死穿孔并導(dǎo)致腹膜炎,但這與人類急性梗阻性闌尾炎合并穿孔和腹
3、膜不一樣,如果給兔結(jié)扎闌尾基部而保存原來(lái)的血液供給,由此而引起的闌尾穿孔及腹膜炎就與人的情況相似,因而是一種比擬理想的方法.如果動(dòng)物型與臨床情況不相似,在動(dòng)物身上有效的治療方案就不一定能用于臨床,反之也然.例如,動(dòng)物內(nèi)毒性性休克EndotoxinShock,單純給動(dòng)物靜脈輸入細(xì)菌及其毒素所致的休克與臨床感染性膿毒性休克SepticShock就不完全一樣,因此對(duì)動(dòng)物內(nèi)毒素性休克有效的療法長(zhǎng)期以來(lái)不能被臨床醫(yī)生所采用.現(xiàn)在有人改向結(jié)扎膽囊動(dòng)脈和膽管的動(dòng)物膽囊中注入細(xì)菌,復(fù)制人類感染性休克的模型,認(rèn)為這樣動(dòng)物既有感染又有內(nèi)毒素中毒,就與臨床感染性休克相似.為了判定所復(fù)制的模型是否與人相似,需要進(jìn)行一
4、系列的檢查.例如有人檢查了動(dòng)物壓、脈率、靜脈壓、呼吸頻率、動(dòng)脈血pH、動(dòng)脈氧分壓和二氧化碳分壓、靜脈血乳酸鹽濃度以及血容量等指標(biāo),發(fā)現(xiàn)一次定量放血法造成的休克模型與臨床出血性休克十分相似,因此認(rèn)為些法復(fù)制的模型是一種較理想的模型.同理,按中醫(yī)理論用大黃喂小鼠使其出現(xiàn)類似人的四君子湯把它治好,那么就有理由把它看成人類脾虛癥,如果又按中醫(yī)理論用脾虛癥的動(dòng)物模型.二重復(fù)性理想的動(dòng)物模型應(yīng)該是可重復(fù)的,甚至是可以標(biāo)準(zhǔn)化的.例如用一次定量放血法可百分之百造成出血性休克,百分之百死亡,這就符合可重復(fù)性和到達(dá)了標(biāo)準(zhǔn)化要求.又如用狗做心肌梗死模型照理很適宜,由于它的冠狀動(dòng)脈循環(huán)與人相似,而且在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中它最適
5、宜做暴露心臟的剖胸手術(shù),但狗結(jié)扎冠狀動(dòng)脈的后果差異太大,不同狗同一動(dòng)脈同一部位的結(jié)扎,其后果很不一致,無(wú)法預(yù)測(cè),無(wú)法標(biāo)準(zhǔn)化.相反,大小白鼠、地鼠和豚鼠結(jié)扎冠脈的后果就比擬穩(wěn)定一致,可以預(yù)測(cè),因而可以標(biāo)準(zhǔn)化.為了增強(qiáng)動(dòng)物模型復(fù)制時(shí)的重復(fù)性,必須在動(dòng)物品種、品系、年齡、性別、體重、健康情況、飼養(yǎng)治理;實(shí)驗(yàn)及環(huán)境條件,季節(jié)、晝夜節(jié)律、應(yīng)激、室溫、濕度、氣壓、消毒滅菌;實(shí)驗(yàn)方法步驟;藥品生產(chǎn)廠家、批號(hào)、純度規(guī)格、給藥劑型、劑量、途徑、方法;麻醉、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛等用藥情況;儀器型號(hào)、靈敏度、精確度;實(shí)驗(yàn)者操作技術(shù)熟練程度等等方面保持一致,由于一致性是重現(xiàn)性的可靠保證.三可靠性復(fù)制的動(dòng)物模型來(lái)應(yīng)該力求可靠地反
6、映人類疾病,即可特異地、可靠地反映某種疾病或某種機(jī)能、代謝、結(jié)構(gòu)變化,應(yīng)具備該種疾病的主要病癥和體征,經(jīng)化驗(yàn)或X光照片、心電圖、病理切片等證實(shí).假設(shè)易自發(fā)地出現(xiàn)某些相應(yīng)病變的動(dòng)物,就不應(yīng)加以選用,易產(chǎn)生與復(fù)制疾病相混淆的疾病者也不宜選用.例如鉛中毒可用大白鼠做模型,但有缺點(diǎn),由于它本身容易患動(dòng)物地方性肺炎及進(jìn)行性腎病,后者容易鉛中毒所致的腎病相混淆,不易確定該腎病是鉛中毒所致還是它本身的疾病所致.用蒙古沙土鼠就比擬容易確定,由于一般只有鉛中毒才會(huì)使它出現(xiàn)相應(yīng)的腎病變.四適用性和可控性供醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)研究用的動(dòng)物模型,在復(fù)制時(shí),應(yīng)盡量考慮到今后臨床應(yīng)用和便于限制其疾病的開展,以利于研究的開展.如雌激素
7、能終止大鼠和小鼠的早期妊娠,但不能終止人的妊娠.因此,選用雌激素復(fù)制大鼠和小鼠終止早期妊娠的模型是不適用的,由于在大鼠和小鼠篩選帶有雌激素活性的藥物時(shí),常常會(huì)發(fā)現(xiàn)這些藥物能終止妊娠,似乎可能是有效的避孕藥,但一旦用于人那么并不成功.所以,如果知道一個(gè)化合物具有雌激素活,用這個(gè)化合物在大鼠或小鼠觀察終止妊娠的作用是沒有意義的.又如選用大小鼠作作實(shí)驗(yàn)性腹膜炎就不適用,由于它們對(duì)革蘭氏陰性細(xì)菌具有較高的反抗力,很不容易造成腹膜炎.有的動(dòng)物對(duì)某致病因子特別敏感,極易死亡,也不適用.如狗腹腔注射糞便濾液引起腹膜炎很快死亡80%24小時(shí)內(nèi)死亡,來(lái)不及做實(shí)驗(yàn)治療觀察,而且糞便劑量及細(xì)菌菌株不好限制,因此不能
8、準(zhǔn)確重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果.五易行性和經(jīng)濟(jì)性在復(fù)制動(dòng)物模型時(shí),所采用的方法應(yīng)盡量做到容易執(zhí)行和符合經(jīng)濟(jì)原那么.靈長(zhǎng)類動(dòng)物與人最近似,復(fù)制的疾病模型相似性好,但稀少昂貴,即使狷猴也不可多得,更不用說(shuō)猩猩、長(zhǎng)臂猿.幸好很多小動(dòng)物如大小鼠、地鼠、豚鼠等也可以復(fù)制出十分近似的人類疾病模型.它們?nèi)菀鬃鞯竭z傳背景明確,體內(nèi)微生物可加限制、模型性顯著且穩(wěn)定,年齡、性別、體重等可任意選擇,而且價(jià)謙易得、便于飼養(yǎng)治理,因此可盡量采用.除非不得已或一些特殊疾病如痢疾、脊髓灰白質(zhì)炎等研究需要外,盡量不用靈長(zhǎng)類動(dòng)物.除了在動(dòng)物選擇上要考慮易行性和經(jīng)濟(jì)性原那么外,而且在模型復(fù)制的方法上、指標(biāo)的觀察上也都要注意這一原那么.二、考前
9、須知研究者的設(shè)計(jì)動(dòng)物模型時(shí)除了要了解掌握上述一些原那么外,還要注意以下一些問題:一注意模型要盡可能再現(xiàn)所要求的人類疾病復(fù)制模型時(shí)必須強(qiáng)調(diào)從研究目的出發(fā),熟悉誘發(fā)條件、宿主特征、疾病表現(xiàn)和發(fā)病機(jī)理,即充分了解所需動(dòng)物模型的全部信息,分析是否能得到預(yù)期的結(jié)果.例如誘發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化時(shí),草食類動(dòng)物兔需要的膽固醇劑量比人高得多,而且病變部位并不出現(xiàn)在主動(dòng)脈弓.病理表現(xiàn)為纖維組織和平滑肌增生為主,可有大量泡沫樣細(xì)胞形成斑塊,這與人類的情況差距較大.因此要求研究者懂得,各種動(dòng)物所需的誘發(fā)劑量、宿主年齡、性別和遺傳性狀等對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響,以及動(dòng)物疾病在組織學(xué)、生化學(xué)、病理學(xué)等方面與人類疾病之間的差異.要防止選用與
10、人類對(duì)應(yīng)器官相似性很小的動(dòng)物疾病作為模型材料.為了增加所復(fù)制動(dòng)物疾病模型與人類疾病的相似性,應(yīng)盡量選用各種敏感動(dòng)物與人類疾病相應(yīng)的動(dòng)物模型,可參考表9-1.表9-1各種敏感動(dòng)物與人類相似的疾病模型動(dòng)物模型動(dòng)物種類相應(yīng)人類的疾病阿留中(Aleutian)病水貂類多發(fā)性骨髓瘤n"粉樣變性北京鴨淀粉樣變性J脈粥樣硬化松鼠、猴、鴿、狒狒黑猩猩Aoudad動(dòng)脈粥樣硬化房中隔缺陷黑猩猩房間隔缺損自家免疫性疾病新西蘭黑色小鼠散播性紅斑狼瘡Sjogren氏綜合征Waldenstrom氏巨球蛋白癥脫發(fā)癥/雄鼠模型狷猴肢末脫發(fā)癥/男性心血管疾病土拔鼠心血管疾病白內(nèi)障海豹、海獅子、沙鼠白內(nèi)障小腦發(fā)育小全雪
11、貂小腦發(fā)育小全腦血管疾病土拔鼠腦血管疾病Chastek氏麻痹癥一種維生素B1缺乏癥水貂維生素B1缺乏病染色體防艾蛙染色體防艾光天性紅細(xì)胞血嚇咻癥狐、松鼠光天性紅細(xì)胞血嚇咻癥多尿癥黑色類人猿多尿癥糖尿病中國(guó)地鼠、沙鼠糖尿病二糖乳糖利用差海獅子二糖利用差眼病非洲綠猴、狒、狒、海貂、海獅動(dòng)脈瘤分葉動(dòng)脈瘤火雞暴死Diving反響海貂、海獅Ehlers-Danlos氏征候群Ehlers-Danlos氏癥候群原始膠原缺乏水貂橢園紅細(xì)胞病橢園紅細(xì)胞病紅褐色美洲駝腦病、類羊搔癢病水貂KurnCrentzfeidt-Jakob自發(fā)性高血壓黑猩猩綜合征家族性及血Basenje遺傳性球形紅細(xì)胞癥有規(guī)律地形成兄弟雙胞
12、胎被猴雙胞胎真菌感染蝙蝠真菌感染胃腸道寄生蟲和治療白鯉、猴、Leaf寄生蟲病悉生動(dòng)物研究兔、豬、大鼠、炎雞雞、羔羊、貓、狗、猴-疾病的發(fā)病機(jī)理Grand-mal癲癇發(fā)作Gerbil癲癇內(nèi)芽月中病Boxer潰瘍性結(jié)腸炎結(jié)腸炎狗腸炎中暑Coypu中暑肝炎黑猩猩病母性肝炎病母性肝炎火雞、北京鴨病母性肝炎肝癌虹始、真始肝癌遺傳性耳聾水貂耳聾遺傳性腦白質(zhì)宮養(yǎng)不良水貂家族異染性的腦白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良遺傳性月箱質(zhì)黑變病水貂Chediak-Higashi綜合征遺傳性肌萎縮北京鴨、火雞肌萎縮遺傳性球形紅細(xì)胞癥鹿、小鼠球形紅細(xì)胞癥兩性畸形水貂兩性畸形皰疹火雞皰疹感染皰疹誘發(fā)性淋巴瘤火雞淋巴瘤腦積水水貂腦積水多骨質(zhì)骨肥厚
13、烏龜,長(zhǎng)尾小鸚鵡多骨性骨肥厚非溶血性高膽紅素血癥Gunn大鼠Crgler-Najjar綜合征炎癥悉生動(dòng)物炎癥流行性感冒雪貂流感實(shí)驗(yàn)性家族遺傳性中樞神經(jīng)系統(tǒng)父性病黑猩猩家族遺傳性中樞神經(jīng)系統(tǒng)義性病脂肪血癥蒙古沙土鼠脂肪血癥巨噬細(xì)胞“泡沫狀脂沉積癥烏龜、長(zhǎng)尾小鸚鵡脂肪貯藏性疾病李司忒氏困病Lemming李司忒氏困病淋巴瘤沙土鼠淋巴瘤淋巴肉瘤蟾蛛、蛛嫄、Boxer狗Hodgkin氏病吸收障礙綜合征灰色便水貂吸收障礙瘧疾北京金絲雀瘧疾母親和胎兒血循環(huán)矮山羊母親和胎兒血循環(huán)接觸傳染性軟疣黑猩猩接觸傳染性軟疣增生物鑒別凱跺九條紋、真始雜核單卵性變胎肌營(yíng)養(yǎng)不良火雞、小鴨肌營(yíng)養(yǎng)不良月中瘤病土拔鼠、小鼠、Mul
14、ei-mammate月中瘤骨軟化H吾鼠骨軟化寄生蟲感染蝙蝠寄生蟲感染色素沆著肝病吼猴肝細(xì)胞黑色素沉著漿細(xì)胞增多癥水貂漿細(xì)胞增多癥脊髓灰質(zhì)炎Lemming脊髓灰質(zhì)炎多尿癥中國(guó)地鼠糖尿病肺腺瘤灰鼠肺腺瘤狂犬病吸血蝙蝠鼠蝠、蝙蝠狂犬病腎臟腺肉瘤蛙腎臟腺肉瘤生殖生物學(xué)狒狒、蛙、蟾蛛、蝙蝠生殖類風(fēng)濕病因素吼猴類風(fēng)濕病因素肉瘤花金屬SPP肉瘤性染色體異常水貂、被猴性染色體異常體內(nèi)紅細(xì)胞鐮狀細(xì)胞素及質(zhì)白尾鹿鐮狀細(xì)胞貧血軀體別離抗體形成鳥、魚、PesomyscusSPP軀體分隔抗體形成弓形體病地松鼠、鼠猴、貓弓形體病兔熱病Lemming兔熱病潰瘍性結(jié)腸炎黑猩猩潰瘍性結(jié)腸炎一尿失禁水貂尿結(jié)石病毒性誘發(fā)網(wǎng)狀組織疾
15、病美國(guó)阿留中群島水貂新西蘭小鼠網(wǎng)狀組織病二注意所選用動(dòng)物的實(shí)用價(jià)值模型應(yīng)適用于多數(shù)研究者使用,容易復(fù)制,實(shí)驗(yàn)中便于操作和采集各種標(biāo)本.同時(shí)應(yīng)該首選一般飼養(yǎng)員較熟悉而便于飼養(yǎng)的動(dòng)物作研究對(duì)象,這樣,就無(wú)需特殊的飼養(yǎng)設(shè)施和轉(zhuǎn)運(yùn)條件,經(jīng)濟(jì)上和技術(shù)上容易得到保證.止匕外,動(dòng)物來(lái)源必須充足,選用多胎分娩的動(dòng)物對(duì)擴(kuò)大樣本和重復(fù)實(shí)驗(yàn)是有益的.尤其對(duì)慢性疾病模型來(lái)說(shuō),動(dòng)物須有一定的生存期,便于長(zhǎng)期觀察使用,以免模型完成時(shí)動(dòng)物已頻于死亡或斃于并發(fā)癥.野生動(dòng)物在自然環(huán)境中觀察有助于正確評(píng)價(jià)自然發(fā)病率和死亡率.但記錄困難,在實(shí)驗(yàn)條件下維持有一定難度,且對(duì)人和家畜有直接和間接的威脅,使用時(shí)要特別加以注意.因此,復(fù)制模
16、型時(shí)必須注意動(dòng)物種群的選擇,要了解各類動(dòng)物種群的特點(diǎn)和對(duì)復(fù)制動(dòng)物的影響.用于生物醫(yī)學(xué)研究的動(dòng)物種群,可按其遺傳成分和其環(huán)境被研究人員限制的程度,分為三種根本類型:實(shí)驗(yàn)室類型,它們可提供最大程度的遺傳和環(huán)境操作;家養(yǎng)類型,不管是鄉(xiāng)村或城市飼養(yǎng)的,人類對(duì)其干擾的程度不同,且動(dòng)物環(huán)境與人類環(huán)境可為能極為接近;自然生態(tài)類型.幾乎沒有人為的干擾.可能某種動(dòng)物嚙齒目、食肉目、兔形目可按所有三類類型進(jìn)行研究,這就增加了對(duì)環(huán)境和遺傳因素作比擬研究的可能性.在選用三類動(dòng)物種群復(fù)制動(dòng)物模型時(shí),必須了解它們各自的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn),可參考表9-2.表92?不同類型的動(dòng)物種群的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)一實(shí)驗(yàn)室種群1.連續(xù)飼養(yǎng)和記錄
17、1.生活于人工環(huán)境2.觀察迅速2.標(biāo)準(zhǔn)日糧3.個(gè)體眾多3.宿主體型大小和疾病的急性本質(zhì)不太適用于臨床或研究4.生命周期短4.一般涉及人工誘發(fā)的疾病15.標(biāo)化的環(huán)境和/或遺傳組成:近交、小口、大鼠、豚鼠、雞6.在癌癥研究領(lǐng)域中nJ用于傳播性和移直性月中瘤7.有根本的生化、生理、病理資料一家養(yǎng)動(dòng)物種群1.生活于與人類相似或相同的環(huán)境1.飼養(yǎng):空間、價(jià)格、治理、平安J2.發(fā)病率??杀葦M2.實(shí)驗(yàn)對(duì)象損失:屠宰3.可研究自然途徑感染的自發(fā)性疾病3.疾病記錄和報(bào)導(dǎo)極有限4.短時(shí)間內(nèi)經(jīng)歷疾病的全過程4.可用的免疫學(xué)資料有限5.很適于臨床研究6.后無(wú)限制的生前和死后標(biāo)本7.可能進(jìn)行傳播研究8.在種群中疾病頻率
18、既有升高也有降低三野生動(dòng)物種群1.容許估計(jì)自然條件下疾病的頻率1.疾病記錄和報(bào)告極有限2.揭示自然條件下的正常周期非偶然的2.關(guān)于模型動(dòng)物的根本資料有限3.允許測(cè)定自然條件下的因素:3.難以在實(shí)驗(yàn)條件下飼養(yǎng)1預(yù)后2監(jiān)測(cè)4,帶后對(duì)家畜和人有潛在危險(xiǎn)性的人管互傳疫病原三注意環(huán)境因素對(duì)模型動(dòng)物的影響復(fù)制模型的成敗往往與環(huán)境的改變有密切關(guān)系.擁擠、飲食改變、過度光照、噪音、屏障系統(tǒng)的破壞等,任何一項(xiàng)被無(wú)視都可能給模型動(dòng)物帶來(lái)嚴(yán)重影響.除此以外,復(fù)制過程中固定、出血、麻醉、手術(shù)、藥物和并發(fā)癥等處理不當(dāng),同樣會(huì)產(chǎn)生難以估量的惡果.因此,要求盡可能使模型動(dòng)物處于最小的變動(dòng)和最少的干擾之中.四不能盲目地使用近交系動(dòng)物,不然會(huì)導(dǎo)致不能限制的因素進(jìn)入實(shí)驗(yàn)例如自發(fā)性糖尿病大鼠BB、Wistar除具有糖尿病臨床特征外,還發(fā)現(xiàn)多種病理變化外周神經(jīng)系統(tǒng)嚴(yán)重病變、睪丸萎縮、甲狀腺炎、胃潰瘍、惡性淋巴瘤等.因此要有目的地選擇.半個(gè)世紀(jì)以來(lái),近交系的開發(fā)不斷提供著新的動(dòng)物模型材料,大、小鼠疾病作為模型在醫(yī)學(xué)使用量已高達(dá)7090%.利用近交系作動(dòng)物模型時(shí)還必須熟悉到:1 .動(dòng)物形成亞系后不應(yīng)該再視為同一品系.要充分了解新品系的特征和背景材料.2 .即使作為已形成模型的品系,由于
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