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文檔簡介

1、石蠟切片免疫組化步驟1.石蠟切片放置在60恒溫箱中烘烤120分鐘。2. 脫蠟和水化：二甲苯(20min)二甲苯(20min)無水乙醇(5min2次)95%乙醇(5min2)90%(5min)80%乙醇(5min)3.3%H2O2室溫孵育510分鐘，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。4. 蒸餾水沖洗5min35. 抗原修復(fù)：將切片放入盛有PBS緩沖液（工作液）的容器中，置微波爐內(nèi)加熱使容器內(nèi)液體溫度保持在9298之間并持續(xù)1015分鐘。6. 取出容器，室溫冷卻1020分鐘（注意：不可將切片從緩沖液中取出冷卻，以便使蛋白能夠恢復(fù)原有的空間構(gòu)型）。7. 常規(guī)血清封閉：正常山羊血清（PBS稀釋）封閉，室溫

2、孵育15分鐘（按試劑和規(guī)定的濃度配制）8. 滴加一抗：用濾紙吸去血清，不洗，直接滴加一抗工作液，37孵育23h，或4過夜（抗體稀釋液組成：牛血清白蛋白1.00g0.01M PBS 100ml疊氮鈉0.08g）9. PBS沖洗5min3洗去抗體10. 加入PBS稀釋的二抗，室溫孵育2h11. PBS洗5min312. 加入ABC復(fù)合物之類的抗體，室溫孵育2h13. PBS洗3次各5min， 蒸餾水迅速沖洗三次14. DAB顯色：520min，待自來水充分沖洗15. 蘇木素復(fù)染：室溫23min，自來水充分沖洗16. 鹽酸酒精分化2s，自來水充分沖洗17. 脫水、透明：80%乙醇(5min)95%乙醇(5min)95%乙醇(5min)100%乙醇(5min)二甲苯(10min)二甲苯(10min)18. 封片：中性樹脂，加蓋玻片(組織部位切勿殘留小氣泡)，自然晾干:abrOPl=VklGALxDM0syV23WHHGn_?WnJqtsU5NlG1BP_CMoC8vEX:VBbWs_wAcbG0OuqFNMPW5KKrdmbBEsfNt=fqYZsldTCG4Vm6r1s=uCMIZvlUp:4pQbkL9jEGl_V6QUr;?Yq1ETo2kmrUWAq6jULzYZd

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