白細(xì)胞五分類原理和散點(diǎn)圖特征

1、血細(xì)胞儀白細(xì)胞五分類法原理和散點(diǎn)圖特征2008-12-14來源:檢驗(yàn)世界網(wǎng)瀏覽：5747次轉(zhuǎn)發(fā)至：我要評論【字號：大中小】核心提示：本文主要介紹全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀在白細(xì)胞五分類上的原理和散點(diǎn)圖分布特點(diǎn)。此類儀器在紅細(xì)胞、血紅蛋白、血小板和計(jì)算參數(shù)上一般會(huì)采用類似的測定原理和計(jì)算方法， 此類儀器的進(jìn)展和其功能特點(diǎn)可參考作者撰寫的其它文章。贊北京協(xié)和醫(yī)院檢驗(yàn)科張時(shí)民檢驗(yàn)地帶網(wǎng)血細(xì)胞分析技術(shù)已經(jīng)進(jìn)入自動(dòng)化時(shí)代，而具有白細(xì)胞五分類或更多分析參數(shù)的儀器也普遍的應(yīng)用于 國內(nèi)各級醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室中，為臨床診斷和治療服務(wù)。而具有18項(xiàng)參數(shù)帶有白細(xì)胞三分群功能的血細(xì)胞分析儀也已經(jīng)普及進(jìn)入到基層醫(yī)院和社區(qū)醫(yī)療中心，在許

2、多大型醫(yī)院中已不占主流位置， 因此可以說目前在較大醫(yī)院的檢驗(yàn)科，常規(guī)血細(xì)胞分析儀已經(jīng)進(jìn)入全自動(dòng)化和白細(xì)胞五分類的時(shí)代。本文主要介紹全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀在白細(xì)胞五分類上的原理和散點(diǎn)圖分布特點(diǎn)。此類儀器在紅細(xì)胞、血紅蛋白、血小板和計(jì)算參數(shù)上一般會(huì)采用類似的測定原理和計(jì)算方法，此類儀器的進(jìn)展和其功能特點(diǎn)可參考作者撰寫的其它文章（見參考文獻(xiàn)）。具有白細(xì)胞五分類功能的血細(xì)胞分析儀器是指通 過各種物理和化學(xué)技術(shù)對白細(xì)胞進(jìn)行分析，以獲得外周血液中白細(xì)胞的五種常見類型，嗜中性粒細(xì)胞，嗜酸性粒細(xì)胞，嗜堿性粒細(xì)胞，淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的百分率和絕對值的測定結(jié)果，此外還應(yīng)該具有對出現(xiàn)異常白細(xì)胞的提示或初步分類功能。|目

3、前國內(nèi)外具有開發(fā)研制白細(xì)胞五分類法儀器的主要為歐美和日本生產(chǎn)廠商，比較著名的歐美廠家有 Beckman-Coulteq ABBOTT Siemens （Bayer）; ABX；日本有 Sysme/口 NihonKohdon。在國內(nèi)已 經(jīng)有邁瑞（MINDRAY公司生產(chǎn)幾個(gè)型號的五分類血細(xì)胞分析儀器投入醫(yī)療市場。檢驗(yàn)地帶網(wǎng)一簡要發(fā)展史1974年，一種名為HEMALOGD勺具有初步白細(xì)胞分類功能的白細(xì)胞分析儀問世。1982年，Technicon公司生產(chǎn)了 H6000型血液細(xì)胞分析儀器，應(yīng)該是首款具有白細(xì)胞五分類能力的 儀器。同時(shí)代日本日立公司推出圖像分析法的白細(xì)胞分析儀HITACHI8200

4、4;,僅僅是用于完成白細(xì)胞血片分類的儀器，沒有其他血細(xì)胞計(jì)數(shù)分析能力。Technicon公司1985年開發(fā)了比較成熟的具有白細(xì)胞五分類功能的TechniconH1型血液細(xì)胞分析儀，隨后升級為H2型和H3型。COULTERW在1987年開發(fā)研制其經(jīng)典VCS技術(shù)，并推出持續(xù)具有多年影響力的、具有白細(xì)胞五 分類功能的血液細(xì)胞分析儀 MAXM型。1990年前后，歐洲和日本許多廠家都陸續(xù)推出了各種類型的具有白細(xì)胞五分類功能的血細(xì)胞分析 儀器。各廠家設(shè)計(jì)生產(chǎn)的此類血細(xì)胞分析儀， 其在白細(xì)胞分類技術(shù)上原理各不相同，分析測定項(xiàng)目略有不同，且形式多樣，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，試劑種類和成分也趨于復(fù)雜。 不斷改進(jìn)和升級的新產(chǎn)品

5、使得儀 器在白細(xì)胞分類技術(shù)上更加成熟和可靠。而技術(shù)的提高也帶來了儀器和消耗品（試劑）價(jià)格的增加。檢驗(yàn)地帶網(wǎng)二儀器原理和散點(diǎn)圖特點(diǎn)1體積、電導(dǎo)和激光散射原理這是Beckman- Coulter公司生產(chǎn)的血細(xì)胞分析儀所采用的經(jīng)典分析方法，他集三種物理學(xué)檢測技術(shù)于一體，在細(xì)胞處于自然原始的狀態(tài)下對其進(jìn)行多參數(shù)分析。該方法也稱為體積、電導(dǎo)、 激光散 射血細(xì)胞分析法。此技術(shù)采用在標(biāo)本中首先加入紅細(xì)胞溶血?jiǎng)┤芙獾艏t細(xì)胞， 然后加入穩(wěn)定劑來中 和紅細(xì)胞溶解劑的作用，使白細(xì)胞表面、胞漿和細(xì)胞體積保持穩(wěn)定不變。 然后應(yīng)用鞘流技術(shù)將細(xì)胞推進(jìn)到流動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)池（Flowcell）中，接受儀器VC院種技術(shù)的檢測。V代表

6、體積（Volume）測量法，是采用經(jīng)典的庫爾特專利技術(shù)，用低頻電流準(zhǔn)確分析細(xì)胞體積。體 積是區(qū)分白細(xì)胞亞群的一個(gè)重要的參數(shù)，它可有效區(qū)分體積大小差異顯著的淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。C代表高頻電導(dǎo)性（Conductivity）,采用高頻電磁探針原理測量細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)間的差異，也是該公司的專利技術(shù)。細(xì)胞膜對高頻電流具有傳導(dǎo)性，當(dāng)電流通過細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞核的化學(xué)組份可使電流的 傳導(dǎo)性產(chǎn)生變化，其變化量可以反映出細(xì)胞內(nèi)含物的信息。該參數(shù)可用來區(qū)分體積相近而內(nèi)部性質(zhì)不同的細(xì)胞群體，如淋巴細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞，由于它們的細(xì)胞核特性不同而在傳導(dǎo)性參數(shù)上有所 區(qū)別。S代表激光散射（Scatter-）測量技術(shù)，采用氮式激光源

7、發(fā)出的單色激光掃描每個(gè)細(xì)胞，收集細(xì)胞在10°70°圖1VCS去的測定原理儀器將分析每個(gè)細(xì)胞在 V、C、S三種檢測技術(shù)上的測量結(jié)果，因?yàn)椴煌悇e的細(xì)胞會(huì)在體積、表面特征、內(nèi)部結(jié)構(gòu)等方面呈現(xiàn)明顯的不同。將這些特征性信息被定義到以VCS為三維坐標(biāo)（分辨率為256X256X256=16,777,216所形成的立體散點(diǎn)圖中，這五類細(xì)胞可在三維空間中形成特定的細(xì)胞群。通過計(jì)算某群細(xì)胞數(shù)量占白細(xì)胞總數(shù)的百分比，即可得到五項(xiàng)白細(xì)胞分類結(jié)果。 儀器不僅僅做出對正常白細(xì)胞的五項(xiàng)分類結(jié)果，給出典型的散點(diǎn)圖型，還可以提示許多異常細(xì)胞區(qū)域的報(bào)警。VCS&術(shù)可通過DF1、DF2、DF3三個(gè)散點(diǎn)

8、圖將五種類型白細(xì)胞明顯區(qū)分開。三個(gè)散點(diǎn)圖的縱坐標(biāo) 均定義為細(xì)胞體積。DF1為細(xì)胞體積和激光散射的直方圖，DF2和DF3為細(xì)胞體積和高頻電導(dǎo)性的直方圖，DF3為除去粒細(xì)胞群體后顯示出淋巴細(xì)胞后面的嗜堿性粒細(xì)胞圖像。圖2各類白細(xì)胞在VCS三維空間中的分布特點(diǎn)圖3各類白細(xì)胞在散點(diǎn)圖中的分布特點(diǎn)VCSJ術(shù)是Beckman- Coulter公司開發(fā)研制的經(jīng)典專有方法，到目前為止的各種高檔血細(xì)胞分析儀 均采用該方法對白細(xì)胞進(jìn)行分析。該方法在白細(xì)胞分析上尚有特殊能力， 例如可以測定和分析中性 粒細(xì)胞的體積、核漿比例、細(xì)胞顆粒特性等參數(shù)，也就是將中性粒細(xì)胞的 VC腔個(gè)參數(shù)分別給出， 用于了解細(xì)菌感性疾病與其它

9、疾病的區(qū)別。也可對淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞等均作出其細(xì)胞群體的三個(gè) 技術(shù)參數(shù)值，是比較有前景的研究內(nèi)容。儀器在RBC PLT WBC計(jì)數(shù)上依然采用電阻抗法，血紅蛋白仍然采用比色法測定。該公司的五分類法血細(xì)胞分析儀先后推出多種類型，如 MAXM、STKS GENJ- S HmX、LH755和最新的LH780 等型號，在某些機(jī)型還具有網(wǎng)織紅細(xì)胞分析功能和T淋巴細(xì)胞亞群分析功能。血細(xì)胞儀白細(xì)胞五分類法原理和散點(diǎn)圖特征 （2）2008-12-14來源:檢驗(yàn)世界網(wǎng)瀏覽：5748次轉(zhuǎn)發(fā)至：我要評論【字號：大中小】核心提示：2.電阻抗、射頻和細(xì)胞化學(xué)技術(shù)日本 Sysmex公司系列血細(xì)胞分析儀是在國內(nèi)應(yīng)用非常 廣泛

10、的儀器，從三分類法到五分類法的各種型號儀器都有大量用戶。具儀器型號種類豐富，功能和測定參數(shù)各異，其各種儀器間均有近似的-2.電阻抗、射頻和細(xì)胞化學(xué)技術(shù)日本Sysmex公司系列血細(xì)胞分析儀是在國內(nèi)應(yīng)用非常廣泛的儀器，從三分類法到五分類法的各種 型號儀器都有大量用戶。具儀器型號種類豐富，功能和測定參數(shù)各異，其各種儀器間均有近似的檢 測原理，但在結(jié)合特定的功能以達(dá)到不同的分析目的方面，其原理和所用試劑又有不完全相同之處。本文以目前其最高配置的XE-2100型血細(xì)胞分析儀為例說明其在白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類方面的原理和 特點(diǎn)。SysmexXE-2100s白細(xì)胞分類上采用半導(dǎo)體激光流式細(xì)胞技術(shù)結(jié)合核酸熒光染色技

11、術(shù)進(jìn)行白細(xì)胞計(jì) 數(shù)和分類。半導(dǎo)體激光照射在通過鞘流技術(shù)處理的細(xì)胞上，可根據(jù)每個(gè)細(xì)胞所產(chǎn)生的三種信號來鑒別細(xì)胞類別。前向散射光（FSC信號可反應(yīng)細(xì)胞體積大小；側(cè)向散射光（SSC信號可反應(yīng)細(xì)胞的 顆粒和細(xì)胞核等內(nèi)含物的信息；側(cè)向熒光（SFL強(qiáng)度信號則用于分析細(xì)胞內(nèi)脫氧核糖核酸 （DNA） 和核糖核酸（RNA）的含量。WBC/BASO!道是專用作檢測嗜堿性粒細(xì)胞的通道， 因?yàn)槭葔A性粒細(xì)胞數(shù)量非常少，因此必須采用 特殊技術(shù)處理。STROMATOLYSERFB是一種酸性試劑，可將紅細(xì)胞和血小板形成淡影化，將除嗜 堿性粒細(xì)胞以外的白細(xì)胞處理成裸核形態(tài)，然后采用前向散射光（ FSC信號和側(cè)向散射光（SSC

12、信號使嗜堿性粒細(xì)胞從其它細(xì)胞中分離出來。前向散射光與細(xì)胞體積測定相關(guān)，側(cè)向散射光與裸核后的細(xì)胞結(jié)構(gòu)復(fù)雜性有關(guān)。在這個(gè)通道中可以獲得白細(xì)胞總數(shù)和嗜堿性粒細(xì)胞的數(shù)量。圖4SysmexXE-210（6細(xì)胞分類散點(diǎn)圖歡迎共閱儀器在幼稚粒細(xì)胞分析上有特殊的IMI通道，在IMI檢測通道中主要應(yīng)用射頻（RF）技術(shù)和直流電 阻抗法（DC）。這個(gè)測定通道根據(jù)幼稚細(xì)胞膜表面比成熟細(xì)胞膜表面含有脂質(zhì)少的現(xiàn)象，在稀釋液 中加入硫化氨基酸（IM試劑），由于占位不同，結(jié)合在幼稚細(xì)胞表面的氨基酸較多，對溶血?jiǎng)┯械?抗作用，對幼稚細(xì)胞具有保護(hù)作用。當(dāng)加入溶血?jiǎng)┖蟪墒旒?xì)胞易被溶解掉， 而幼稚細(xì)胞不易被溶解 破壞，可通過電阻法檢

13、測出來。射頻技術(shù)用于測量細(xì)胞核的大小和顆粒的多少，而直流電信號可反應(yīng)出細(xì)胞體積的大小。檢驗(yàn)地帶網(wǎng)在有核紅細(xì)胞計(jì)數(shù)上通過專門的有核紅細(xì)胞檢測程序和專用通道-NRBC!道，在處理標(biāo)本時(shí)加入STROMATOLYSERNR專用試劑，它能使成熟紅細(xì)胞溶解又可保持有核紅細(xì)胞的核結(jié)構(gòu)，同時(shí)也將 白細(xì)胞保持完好。STROMATOLYSEFNR試劑中的聚次甲基熒光染料可滲透進(jìn)入白細(xì)胞膜內(nèi)，將白 細(xì)胞和有核紅細(xì)胞的核染色。通過檢測熒光強(qiáng)度得到：白細(xì)胞核大熒光強(qiáng)度高，有核紅細(xì)胞核小， 熒光強(qiáng)度低，正常紅細(xì)胞無細(xì)胞核和破碎，熒光強(qiáng)度極低。根據(jù)熒光強(qiáng)度差和前向散射光信號測定 的細(xì)胞體積差，可將有核紅細(xì)胞從其他細(xì)胞群中區(qū)

14、分出來。圖5SysmexXE-2100勺幼稚細(xì)胞通道和有核紅細(xì)胞通道散點(diǎn)圖1:該儀器在紅細(xì)胞和血小板的計(jì)數(shù)和分析上仍然沿用了經(jīng)典的電阻抗方法，在血紅蛋白測定上采用了無劇毒物質(zhì)的SLS容血?jiǎng)┍壬āz驗(yàn)地帶網(wǎng)3激光散射和細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)最早采用該技術(shù)的是Technicon公司的H1,H3型，現(xiàn)在的最新型為西門子公司的 Advia120型和2120 型（2007年以前為Bayer公司產(chǎn)品）。他是一款開發(fā)比較早的高等級儀器，其在白細(xì)胞分類上采用 了過氧化酶測定通道和嗜堿粒細(xì)胞測定通道。 根據(jù)細(xì)胞化學(xué)染色的特性進(jìn)行白細(xì)胞分類。在紅細(xì)胞和血小板分析都采用了雙角度激光法。 在儀器的管路、電磁閥門、反應(yīng)杯上

15、采用了獨(dú)特設(shè)計(jì)的集成 液流版管路系統(tǒng)，是目前血細(xì)胞分析儀中所獨(dú)有和特有的技術(shù)。集成液流板實(shí)際上是將各種管路和電磁閥門、 反應(yīng)杯等血球計(jì)數(shù)儀的常用硬件進(jìn)行綜合處理，系統(tǒng)化，微小化，透明化和集成化。形成的集成板被放置在儀器的明顯部位，方便觀察，并具一定的美觀效果。其另一特點(diǎn)則是細(xì)小的管路和反應(yīng)杯可是標(biāo)本和試劑用量明顯減少。圖6Advia120的集成液流板。在白細(xì)胞分類上，該儀器采用兩個(gè)通道進(jìn)行，一個(gè)為過氧化酶檢測通道，另一個(gè)為嗜堿細(xì)胞檢測通道。過氧化酶反應(yīng)（peroxidase, POX是血涂片染色的一個(gè)常用細(xì)胞化學(xué)染色方法，用于鑒別原始細(xì) 胞與成熟的粒細(xì)胞，鑒別粒細(xì)胞與非粒細(xì)胞。染色后的細(xì)胞內(nèi)無

16、藍(lán)黑色顆粒出現(xiàn)為陰性反應(yīng)，出現(xiàn)細(xì)小顆粒或稀疏樣分布的黑色顆粒為弱陽性反應(yīng)，出現(xiàn)黑色粗大而密集的顆粒為強(qiáng)陽性反應(yīng)。 過氧化物酶主要存在于粒細(xì)胞系和單核細(xì)胞系中， 各類白細(xì)胞對過氧化物酶的反應(yīng)是這樣的：早期的原始粒細(xì)胞為陰性，早幼粒以后的各階段都含有過氧化物酶，并隨著細(xì)胞的成熟過氧化酶含量逐漸增 強(qiáng)，中性分葉核粒細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)強(qiáng)陽性反應(yīng)，嗜酸性粒細(xì)胞具有最強(qiáng)的過氧化物酶反應(yīng)，嗜堿粒細(xì)胞不含此酶呈陰性反應(yīng)。在單核細(xì)胞系統(tǒng)，除早期原始階段外，幼稚單核和單核細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)較弱的過 氧化物酶反應(yīng)。淋巴細(xì)胞、幼稚紅細(xì)胞、巨核細(xì)胞等都為過氧化物酶陰性反應(yīng)。Advia120/2120血細(xì)胞分析儀的過氧化酶（PeroX）

17、檢測通道就是根據(jù)這個(gè)原理設(shè)計(jì)的，它檢測每一個(gè)通過流動(dòng)計(jì)數(shù) 池中的白細(xì)胞，經(jīng)過激光照射所產(chǎn)生的過氧化酶散射光吸收率，來當(dāng)然試劑和輔助試劑均進(jìn)行了改在Perox通道所產(chǎn)生的散點(diǎn)圖，橫軸表示在5° -15°激光散射獲得的細(xì)胞過氧化物酶含量情況，縱軸是低角度散射光測量的細(xì)胞體積大小。在此通道內(nèi)細(xì)胞被分為五類。1）過氧化酶最強(qiáng)陽性的嗜酸性粒細(xì)胞；2）過氧化酶強(qiáng)陽性的嗜中性分葉核粒細(xì)胞；3）體積較大、過氧化酶弱陽性的單核細(xì) 胞；4）體積較小、過氧化物酶陰性的淋巴細(xì)胞；5）體積大于淋巴細(xì)胞且過氧化物酶陰性的未染色大細(xì)胞，此類細(xì)胞增加提示幼稚或原始的各類細(xì)胞可能出現(xiàn)。在嗜堿細(xì)胞（Bas。通

18、道中采用的檢測原理是：專用的嗜堿細(xì)胞試劑（Baso）將除了嗜堿細(xì)胞以外 的白細(xì)胞除去細(xì)胞膜，使其裸核化并體積變小，僅將嗜堿性粒細(xì)胞保持原有狀態(tài)， 體積明顯大于其 歡迎共閱他類的白細(xì)胞。在散點(diǎn)圖上處于上面區(qū)域的為嗜堿性粒細(xì)胞； 散點(diǎn)圖的橫坐標(biāo)可表示細(xì)胞核結(jié)構(gòu)的 復(fù)雜性，處于左側(cè)的為單個(gè)核的細(xì)胞群， 包括單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞；處于右側(cè)的為分葉核細(xì)胞；中間部位則考慮為桿狀核細(xì)胞；左下端為單個(gè)核的原始細(xì)胞區(qū)。圖7: ADVIA120/2120儀器Perox通道和Baso通道散點(diǎn)圖該儀器在紅細(xì)胞、血小板的測定上也采用了光學(xué)檢測技術(shù)。通過激光照射掃描每個(gè)通過Flowcell的紅細(xì)胞，低角度散射光（2 3。）

19、用于測量細(xì)胞體積；高角度（5。15° ）散射光測量每個(gè)紅細(xì) 胞內(nèi)的血紅蛋白濃度（CH）和血紅蛋白含量平均值 CHCM這兩個(gè)值不受紅細(xì)胞數(shù)量和血紅蛋白測 定的影響。還可根據(jù)每個(gè)紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白濃度，計(jì)算出紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白分布寬度 （HDW）值。其根據(jù)紅細(xì)胞在體積大小和單個(gè)紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白含量的分析，將紅細(xì)胞劃分為9個(gè)區(qū)域，得到紅細(xì)胞體積和色素含量分布的九分圖，也是該儀器在紅細(xì)胞分析方面獨(dú)有的特色，根據(jù)紅細(xì)胞分布情 況可初步判斷疾病類別（下圖中）。在血小板計(jì)數(shù)分析上也同樣采用了二維光散射分析法，即可獲 得血小板體積大小，可測量160fl內(nèi)的各種大小不同的血小板，還可對血小板內(nèi)容物含量（M

20、PC）進(jìn)行測定。血紅蛋白測定采用連續(xù)流動(dòng)比色法和紅細(xì)胞散射光直接測定法兩種方法，有助于高脂血和高膽紅素血標(biāo)本的血紅蛋白測定準(zhǔn)確性。 :圖8: ADVIA120/2120紅細(xì)胞散點(diǎn)圖（左）和血小板散點(diǎn)圖（右）血細(xì)胞儀白細(xì)胞五分類法原理和散點(diǎn)圖特征 （3）2008-12-14來源:檢驗(yàn)世界網(wǎng)瀏覽：5749次轉(zhuǎn)發(fā)至：我要評論【字號：大中小】核心提示：4雙鞘流技術(shù)和細(xì)胞化學(xué)染色法 ABX是法國生成血細(xì)胞分析儀器的著名廠家， 其生產(chǎn)的全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀Pentra120型為其高端產(chǎn)品。在白細(xì)胞分類上采用該公司特有的專利技術(shù) -雙鞘流（DHSS分析法。雙鞘流是專利技術(shù)，4雙鞘流技術(shù)和細(xì)胞化學(xué)染色法ABX是

21、法國生成血細(xì)胞分析儀器的著名廠家，其生產(chǎn)的全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀Pentra120型為其高端產(chǎn)品。在白細(xì)胞分類上采用該公司特有的專利技術(shù) -雙鞘流（DHSS分析法。雙鞘流是專利技術(shù)， 而測定本身是通過電阻抗和光吸收法雙重原理。標(biāo)本首先在第一鞘流液中經(jīng)過電阻抗測定分析，得到細(xì)胞體積測定結(jié)果，然后通過第二鞘流引導(dǎo)再行光吸收率分析， 對細(xì)胞內(nèi)容物進(jìn)行測定，最終將 細(xì)胞測定信息在散射圖相應(yīng)的位置表現(xiàn)出來。 雙鞘流技術(shù)的核心部件是含有紅寶石小孔的復(fù)雜的鞘 流池，在雙鞘流系統(tǒng)的上下兩端分別加上恒定電流，是保證電阻法的測量要素。為了保證被檢測的細(xì)胞能夠正確通過計(jì)數(shù)孔和鞘流通道， 需要利用外來鞘流來進(jìn)行矯正，因此

22、通過左側(cè)鞘流泵注入稀 釋液形成第一鞘流液，其作用是保護(hù)溶液能夠直接通過計(jì)數(shù)小孔，并且保證其中攜帶的細(xì)胞處于中心部位，液流不發(fā)生偏移和扭曲；溶液通過計(jì)數(shù)小孔后，再通過中間鞘流泵注入稀釋液形成第二股 鞘流，用以保證吸光度測量。這樣的過程被稱為雙鞘流分析技術(shù)。圖9雙鞘流技術(shù)示意圖儀器通過兩個(gè)通道來完成白細(xì)胞的五項(xiàng)分類。其采用的細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)（Cytochemistry）的原理是經(jīng)典的細(xì)胞分類技術(shù)，此染色劑中含有溶血素及氯陛黑活體染料（ChlorazolBlackE。在儀器的LMNE檢測池中，全血樣品與染色劑充分混勻，在 35c條件下進(jìn)行孵育，此過程的作用是：溶解 紅細(xì)胞對單核細(xì)胞的初級顆粒、嗜酸性

23、粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的特異顆粒進(jìn)行不同程度的染色，同時(shí)對細(xì)胞的膜（細(xì)胞膜、核膜、顆粒膜）也進(jìn)行不同程度的著色固定細(xì)胞的形態(tài)，使其保持自然 狀態(tài)。由于淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞對染色劑的著色程度不同、每種細(xì)胞特定的細(xì)胞核形態(tài)和顆粒的結(jié)構(gòu)造成光散射的強(qiáng)度不同，產(chǎn)生了特定的吸光率。在LMNE散點(diǎn)圖上，各類白細(xì)胞的特點(diǎn)是：淋巴細(xì)胞：典型的淋巴細(xì)胞體積較小、形態(tài)規(guī)則、胞 漿內(nèi)沒有顆粒，其吸光率最低，所以定位在散點(diǎn)圖的右下部矩陣中， 正常淋巴細(xì)胞散點(diǎn)圖為正態(tài)體 積分布。單核細(xì)胞：典型的單核細(xì)胞體積較大、腎狀核、胞漿內(nèi)有初級顆粒（幾乎不著色），細(xì)胞核大且不分葉，光散射較少，所以位于吸光率軸的

24、最下端，依據(jù)單核細(xì)胞的體積，位于體積軸的 最右端，而異常單核細(xì)胞及特大單核細(xì)胞則可能出現(xiàn)在LIC的矩陣中。中性粒細(xì)胞：典型的中性粒細(xì)胞具有嗜中性顆粒及分葉核的結(jié)構(gòu)， 中性顆粒部分著色，同時(shí)由于顆粒及核的分葉等形態(tài)上的 復(fù)雜性，而產(chǎn)生光散射。所以中性粒細(xì)胞群散點(diǎn)圖位于中部。 核分葉越多的中性粒細(xì)胞，吸光性越 歡迎共閱強(qiáng)，在散點(diǎn)圖上的位置向右移。同時(shí)桿狀細(xì)胞（Bands）體積與中性粒細(xì)胞接近，但核的復(fù)雜程度 低，吸光率低，散點(diǎn)圖位于中性粒細(xì)胞與單核細(xì)胞之間。嗜酸性粒細(xì)胞：由于嗜酸性粒細(xì)胞含有特異性顆粒，與染色液特異性著色，具著色強(qiáng)度最深，位于Y-軸的最上端，此方法提高了嗜酸性粒細(xì)胞的分類的準(zhǔn)確性。

25、巨大未成熟細(xì)胞（LargelmmatureCel。：未成熟粒細(xì)胞因其體積較大， 可含有顆粒，光散射強(qiáng)，位于嗜中性粒細(xì)胞散點(diǎn)圖的右側(cè)，在LIC矩陣圖中從左到右依次排列晚幼粒、中幼粒、早幼粒細(xì)胞，另外各種原始細(xì)胞位于單核細(xì)胞的右側(cè)區(qū)域中。由于此散點(diǎn)圖中可能有大單核細(xì)胞，可引起LIC假性計(jì)數(shù)增加（LIC的計(jì)數(shù)結(jié)果被計(jì)算到在嗜中性粒細(xì)胞中）。LIC包括：大單核細(xì)胞、高嗜堿性的單核細(xì)胞、巨大中性粒細(xì)胞、早幼粒細(xì)胞、中幼粒細(xì)胞、晚幼粒細(xì)胞、原始細(xì)胞。異型淋巴細(xì)胞（AtypicalLymphs）在散點(diǎn)圖中位于淋巴細(xì)胞與單核細(xì)胞之間的一群細(xì)胞，包括：小原始粒細(xì)胞、大淋巴細(xì)胞等。檢驗(yàn)地帶網(wǎng)在WBC/BASO測池

26、中，全血樣品與 BasolyseII（PH2.4）溶血素?M合，在 35°圖10ABX血細(xì)胞分析儀LMNE散點(diǎn)圖和BASC直方圖紅細(xì)胞和血小板仍然采用電阻抗原理測定，血紅蛋白采用比色法。此為在軟件系統(tǒng)中采用了浮動(dòng)界 標(biāo)技術(shù)用于血小板計(jì)數(shù)及嗜堿細(xì)胞計(jì)數(shù)，直方圖的界標(biāo)會(huì)依據(jù)細(xì)胞群的變化做出相應(yīng)的自動(dòng)調(diào)整。血小板計(jì)數(shù)上還采用了防返流裝置，目的為防止渦流現(xiàn)象對血小板計(jì)數(shù)產(chǎn)生影響。在白細(xì)胞計(jì)數(shù)過程中還采用了白細(xì)胞平衡檢測原理（ WBCCountBalance,使得白細(xì)胞計(jì)數(shù)在 WBC/HGB通道中與 LMNE雙鞘流池計(jì)數(shù)結(jié)果相聯(lián)系，如果出現(xiàn)較大差別則可進(jìn)行報(bào)警提示。最近該廠推出新一代ABXPe

27、ntraDX12（ffl血細(xì)胞分析儀，其測定原理仍然采用雙鞘流技術(shù)。采用新 技術(shù)擴(kuò)展了散點(diǎn)圖分布范圍，形成可對血液中未成熟的粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞共20個(gè)參數(shù)的分類或提示性報(bào)告信息，這對異常血細(xì)胞的篩檢提供了很大幫助。圖11PentraDX120型幼稚細(xì)胞散點(diǎn)圖檢驗(yàn)地帶網(wǎng)5多角度偏振光激光散射技術(shù)美國雅培公司（ABBOTT推出的血細(xì)胞分析儀，在白細(xì)胞分類中采用獨(dú)特的多角度偏振光散射 （MAPSS技術(shù)，其所生產(chǎn)的血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀從 CELL-DYN30003200, 3500, 3700, 4000,以及Sapphire （藍(lán)寶石），在白細(xì)胞分類上均采用了 MAPS或術(shù)。該技術(shù)基本原理是細(xì)胞在激

28、光束的照射下，在多個(gè)角度都產(chǎn)生散射光，儀器在四個(gè)角度的四個(gè)檢測器將接收到的相應(yīng)的散射光信號，然后經(jīng)過微處理器分析處理，將各類細(xì)胞安置在散點(diǎn)圖上的相應(yīng)位置，并計(jì)算出白細(xì)胞分類結(jié)果。多角度偏振光散射白細(xì)胞分類技術(shù)（Multi - AnglePolatisedScatterSeparationofwhitecel| MAPSS 其 原理是一定體積的全血標(biāo)本用鞘流液按適當(dāng)比例稀釋。其白細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)近似于自然狀態(tài)，因嗜堿性粒細(xì)胞顆粒具有吸濕的特性，所以嗜堿性粒細(xì)胞的結(jié)構(gòu)有輕微改變。 紅細(xì)胞內(nèi)部的滲透壓高于鞘 液滲透壓而發(fā)生改變，紅細(xì)胞內(nèi)的血紅蛋白從細(xì)胞內(nèi)游離出來，而鞘液內(nèi)的水分進(jìn)入紅細(xì)胞中， 細(xì)胞膜的結(jié)

29、構(gòu)仍然完整，但此時(shí)的紅細(xì)胞折光指數(shù)與鞘液的相同，故紅細(xì)胞不干擾白細(xì)胞檢測。在鞘流系統(tǒng)的作用下，樣本被集中為一個(gè)直徑30pm的小股液流，該液流將稀釋的血細(xì)胞單個(gè)排列，然后通過激光束，激光照射于細(xì)胞上，在各個(gè)方向都有其散射光出現(xiàn)。0°為前向角散射（1°3。） 光，可粗略地測定細(xì)胞大??；10°為狹角散射光（7°11° ）,可測細(xì)胞結(jié)構(gòu)及其復(fù)雜性的相 對特征；90°為消偏振光散射（70° '110° ）,基于顆粒可以將垂直角度的偏振激光消偏振的特性，將嗜酸細(xì)胞從中性粒細(xì)胞和其它細(xì)胞中分離出來。900垂直光散射（70

30、0110°圖12MAPSSW定原理示意圖該類型儀器除了基本的白細(xì)胞五分類外， 還提供了其它異常白細(xì)胞的信息和報(bào)警，提供給檢驗(yàn)者參考，以通過人工顯微鏡檢查復(fù)核這些結(jié)果，例如異常淋巴細(xì)胞、原始細(xì)胞、未成熟粒細(xì)胞、桿狀核 中性粒細(xì)胞。圖13ABBOTTCELL-DYN分類血細(xì)胞分析儀各類白細(xì)胞在散射圖上的分布圖血細(xì)胞儀白細(xì)胞五分類法原理和散點(diǎn)圖特征 （4）2008-12-14來源:檢驗(yàn)世界網(wǎng)瀏覽：5750次轉(zhuǎn)發(fā)至：我要評論【字號：大中小】 歡迎共閱核心提示：6激光散射技術(shù)日本光電公司是開發(fā)和生產(chǎn)五分類血細(xì)胞分析儀的廠家之一，目前所知 僅有兩款類型的儀器投入市場，均采用相同的測定原理，型號是

31、MEK-7222和MEK-8222其WBC、RBC口 PLT計(jì)數(shù)原理采用電阻法，白細(xì)胞分類測贊6激光散射技術(shù)日本光電公司是開發(fā)和生產(chǎn)五分類血細(xì)胞分析儀的廠家之一，目前所知僅有兩款類型的儀器投入市場，均采用相同的測定原理，型號是 MEK-7222和MEK-8222。其WBG RBC?口 PLT計(jì)數(shù)原理采用 電阻法，白細(xì)胞分類測定采用鞘流技術(shù)和激光散射原理。在鞘流液中白細(xì)胞通過管路進(jìn)入鞘流池內(nèi)，激光照射白細(xì)胞后發(fā)生的各種散射光，根據(jù)血細(xì)胞的體積、血細(xì)胞的復(fù)雜性（有無顆粒、核的構(gòu)造等）的不同，散射光的強(qiáng)度和方向有所不同。 激光直進(jìn)方向和同方向小角度的散射光 （表示Size、 激光直進(jìn)方向和同方向大角

32、度的散射光（表示Complexity）、與激光直進(jìn)方向相對垂直的方向的散射光（表示Granularity）為參數(shù)的作為散點(diǎn)圖，對淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜中性白細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞進(jìn)行分類。Size表示血細(xì)胞的大小、Complexity表示白細(xì)胞結(jié)構(gòu)的復(fù)雜度、 Granularity表示白細(xì)胞顆粒的程度。采用此原理可提供了三個(gè)散射圖，MAIN散點(diǎn)圖、NE-EO散點(diǎn)圖和MO-BA散點(diǎn)圖。在MAIN散點(diǎn)圖上（大圖部分）下面散點(diǎn)表示淋巴細(xì)胞群，右側(cè)為粒細(xì)胞群； 兩個(gè)小圖，NE-EO為中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞散點(diǎn)圖，MO-BA為單核細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞細(xì)胞散 點(diǎn)圖。此外儀器還能給出大的不成熟細(xì)胞

33、（LIC）提示信息。檢驗(yàn)地帶網(wǎng)圖14日本光電MEK7222型五分類血細(xì)胞分析儀散點(diǎn)圖檢驗(yàn)地帶網(wǎng)7邁瑞激光散射和細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)'l邁瑞（MINDRAY公司是國內(nèi)最早有能力生產(chǎn)五分類血細(xì)胞分析儀的廠家，他們目前生產(chǎn)有三種型號的五分類血細(xì)胞分析儀。BC-5500 BC5380和BC5300型自動(dòng)五分類血液細(xì)胞分析儀，采用半導(dǎo) 體激光散射技術(shù)和細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)，配合改良的流式分析裝置對白細(xì)胞進(jìn)行精確的五分類分析。 BC-5500型為目前最高配置，可選擇使用靜脈血或預(yù)稀釋末梢血，均能獲得良好的各種細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié) 果和白細(xì)胞五分類結(jié)果?？商峁?27項(xiàng)計(jì)數(shù)和計(jì)算參數(shù)、2個(gè)散點(diǎn)圖和2個(gè)直方圖以及異常報(bào)警

34、信 息。測定速度為80個(gè)標(biāo)本/小時(shí)（配自動(dòng)進(jìn)樣器），全中文的操作界面，操作及提示功能一目了然， 具有大型彩色TFT觸摸屏，操作簡單方便。鞘流技術(shù)是所有高檔血細(xì)胞分析儀均采用的細(xì)胞進(jìn)樣技術(shù)，為了達(dá)到更高的液流速度壓力差和更穩(wěn)定的液體流動(dòng)，該公司獨(dú)創(chuàng)性地采用了二次加速鞘流技術(shù)，分級實(shí)現(xiàn)鞘液的第二次加速，增加了單位時(shí)間內(nèi)細(xì)胞的通過流量，從而能夠完成對預(yù)稀釋血液進(jìn)行白細(xì)胞五分類分析。儀器通過兩個(gè)通道完成白細(xì)胞分類測定。在 DIFF通道中增加了利用了可對嗜酸性粒細(xì)胞進(jìn)行染色 的特殊試劑。激光散射分析技術(shù)是五分類法常用的分析技術(shù)，由于細(xì)胞的物理特性，當(dāng)激光照射到細(xì)胞時(shí)，會(huì)有不同角度的散射光出現(xiàn)。低角度 （

35、1° 5° ）散射光可反映細(xì)胞體積大小信息；中高角 度（100 20° ）散射光可反映細(xì)胞顆粒的復(fù)雜性信息。綜合這兩個(gè)角度散射光的信息，結(jié)合其他特 殊技術(shù)來完成白細(xì)胞的五分類測定。標(biāo)本在鞘流的帶動(dòng)下進(jìn)入儀器的檢測區(qū)域后，激光照射于細(xì)胞 之上所發(fā)射出的低角度和中高角度散射光信號可表現(xiàn)出細(xì)胞大小和內(nèi)容物復(fù)雜程度（包括細(xì)胞內(nèi)顆粒等）的特性信息，經(jīng)儀器檢測分析，將其分布在一個(gè)二維空間的散點(diǎn)圖中，可區(qū)分淋巴細(xì)胞、單 核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞。而化學(xué)染色技術(shù)可進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)對嗜酸性粒細(xì)胞的準(zhǔn)確判定。檢驗(yàn)地帶網(wǎng)在WBC/BASO!道中通過強(qiáng)溶型試劑和特異性染色技術(shù)，可保留完

36、整的嗜堿性粒細(xì)胞，并對其進(jìn) 行特異性修飾，同時(shí)破壞其它四類白細(xì)胞，使之形成膜包核狀態(tài)，在激光的照射下同樣形成兩個(gè)角 度的散射光，完整的嗜堿性粒細(xì)胞體積偏大，其他類別白細(xì)胞體積變小，通過激光信號的強(qiáng)弱來計(jì) 數(shù)嗜堿性粒細(xì)胞并在該通道中計(jì)數(shù)白細(xì)胞總數(shù)。該方法可以有效排除難溶性紅細(xì)胞、巨大血小板、 血小板聚集及其它非細(xì)胞顆粒等因素對計(jì)數(shù)的影響，保證嗜堿性粒細(xì)胞及WBC總數(shù)的精確分類和計(jì)數(shù)。圖15邁瑞五分類血細(xì)胞分析儀散點(diǎn)圖特征檢驗(yàn)地帶網(wǎng)三圖像分析法白細(xì)胞分類儀器文章開始部分已經(jīng)提到在1982年日本日立公司生產(chǎn)的8200型白細(xì)胞圖像分析系統(tǒng)，應(yīng)該是此類 儀器的原始機(jī)型。而作者在1984年也曾經(jīng)參與過中科

37、院某研究所的一個(gè)關(guān)于血細(xì)胞形態(tài)特征數(shù)字 化的研究工作，其目的是將5類白細(xì)胞基本信息在顯微鏡下掃描后形成數(shù)據(jù)模型，可惜這項(xiàng)工作因?yàn)楫?dāng)時(shí)技術(shù)條件的限制而沒有取得預(yù)想的結(jié)果。近年來瑞典CellaVisionA必司開發(fā)出一種新型自動(dòng)影像血細(xì)胞形態(tài)分析系統(tǒng)CellaVision已經(jīng)投入臨床應(yīng)用，該產(chǎn)品2005年3月在歐洲開始投放市場，已經(jīng)有許多實(shí)驗(yàn)室配備了該系統(tǒng)， 用于進(jìn)行血涂 片的過篩檢查，該產(chǎn)品2007年進(jìn)入中國市場，正處于推廣中。該系統(tǒng)目前有兩款機(jī)型，CellaVisionDM96和CellaVisionDM8。該系統(tǒng)是以染色后的血涂片為標(biāo)本， 以最接近傳統(tǒng)顯微鏡觀察 法的技術(shù)對血液中的白細(xì)胞、紅

38、細(xì)胞進(jìn)行初步分類的儀器，該儀器采用先進(jìn)的人工智能神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)系 統(tǒng)和全自動(dòng)的操作程序，可使血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)在自動(dòng)化、 標(biāo)準(zhǔn)化、智能化方面達(dá)到一定的目的和 水準(zhǔn)，在強(qiáng)調(diào)形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)重要性的背景下有良好的發(fā)展前景。圖16檢驗(yàn)醫(yī)師在Cellavision顯示屏前審查白細(xì)胞分類結(jié)果該儀器的組成可分為五大部分1血片自動(dòng)傳輸系統(tǒng)將染色后的標(biāo)準(zhǔn)血涂片放在片盒內(nèi)。該系統(tǒng)不具染色功能，需先將血片用瑞氏或瑞氏-姬姆薩染液染色。血片可按照順序被儀器傳輸系統(tǒng)傳送到顯微鏡載物臺上。2血片自動(dòng)傳輸系統(tǒng)將血片從片盒內(nèi)取出并通過掃描條碼記錄標(biāo)本編號，然后將標(biāo)本送到自動(dòng)顯微鏡的載物臺上。3自動(dòng)加油系統(tǒng)自動(dòng)吸取適量的顯微鏡油，滴加到血涂片適當(dāng)?shù)奈恢?，用于油鏡頭下的細(xì)胞觀察和 分類。其感應(yīng)器能提示加油的狀態(tài)和加油的量。4自動(dòng)血涂片掃描系統(tǒng)包括一臺具有物鏡頭自動(dòng)轉(zhuǎn)換、血涂片可三維方向移動(dòng)的自動(dòng)顯微鏡和一臺具有自動(dòng)調(diào)焦能力的數(shù)碼照相機(jī)。物鏡頭可根據(jù)要求自動(dòng)轉(zhuǎn)換X10、X40、X 100倍鏡頭；載物臺可水平上下左右移動(dòng)，并可按照 Z字型路線移動(dòng)血片，供照相機(jī)攝取不同部位的細(xì)胞形態(tài)圖像。5數(shù)據(jù)光電轉(zhuǎn)換系統(tǒng)數(shù)碼相機(jī)拍攝后的數(shù)字圖像信息，將光學(xué)信號轉(zhuǎn)變成數(shù)字信號，然后對每個(gè)視野下的圖像進(jìn)行分析，辨識單細(xì)胞層，白細(xì)