護(hù)肝寶對四氯化碳急性肝損傷大鼠肝膽轉(zhuǎn)運功能的影響

1、護(hù)肝寶對四氯化碳急性肝損傷大鼠肝膽轉(zhuǎn)運功能的影響    【摘要】  目的研究中藥組方護(hù)肝寶對四氯化碳(CCl4)所致急性肝損傷大鼠的靛氰綠(ICG)肝清除率的影響。方法將32只大鼠隨機分為空白對照組、模型組和護(hù)肝寶高、低劑量組，每組8只。用CCl4制作大鼠急性肝損傷模型，測定下列變化：大鼠血清天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST);肝臟形態(tài)學(xué)的改變;肝血流量和靛氰綠肝清除率的改變;觀察護(hù)肝寶對CCl4大鼠急性肝損傷的影響。結(jié)果護(hù)肝寶能明顯抑制CCl4所致大鼠血清中ALT及AST含量的升高(P < 0.05或P < 0.01

2、)，改善肝臟組織病理，對抗CCl4所致肝血流量和肝清除率下降(P < 0.05)。 結(jié)論護(hù)肝寶可保護(hù)肝臟，對抗CCl4所致肝清除率和肝血流量下降。 【關(guān)鍵詞】  護(hù)肝寶; 四氯化碳; 靛氰綠; 肝清除率肝臟是藥物消除的重要器官。有研究結(jié)果表明1，2，四氯化碳(CCl4)所致急性肝損傷可造成肝膽轉(zhuǎn)運系統(tǒng)的損害，影響染料指示劑靛氰綠(Indocyanine green，ICG)在肝膽內(nèi)的轉(zhuǎn)運過程，但目前關(guān)于肝病治療藥物對這一轉(zhuǎn)運過程的影響尚未見報道。中藥復(fù)方制劑護(hù)肝寶是我課題組自行研究的一種中藥復(fù)方制劑，由黃芪、丹參、虎杖等藥物組成，具有益氣活血、舒肝利膽、清熱解毒、燥濕利濕等作用

3、，臨床治療急性肝炎取得了良好的療效。本實驗研究了護(hù)肝寶對CCl4所致急性肝損傷大鼠肝臟對ICG清除的影響。結(jié)果如下。1 材料雄性Wistar大鼠，體質(zhì)量220250 g，由河北醫(yī)科大學(xué)動物學(xué)部提供。動物分組：將大鼠隨機分為空白對照組，CCl4急性肝損傷病理模型組、護(hù)肝寶高劑量組(80 g生藥/kg·d)和低劑量組(40 g生藥/kg·d)，每組8只。高、低劑量組連續(xù)灌胃給藥7d，1次/d;空白對照組、病理模型組灌等量生理鹽水。灌胃第7日時，給模型組、護(hù)肝寶大、小劑量給藥組大鼠灌胃(ig)1次給予體積分?jǐn)?shù)為50%的CCl4溶液2 ml/kg，對照組ig給予等量生理鹽水，24

4、h后進(jìn)行實驗。主要試劑：ICG，比利時ACROS公司生產(chǎn);CCl4，北京化學(xué)試劑廠生產(chǎn)。2 方法2.1 觀察指標(biāo)及方法計算濃度，再根據(jù)下列計算公式計算肝血流量和ICG肝清除率：肝血流量 = I/Cpa-CPv;ICG肝清除率 = I/CPa上式中I：ICG注入速度;Cpa：ICG動脈血中濃度;CPv：ICG肝靜脈血中濃度。2.2 統(tǒng)計學(xué)處理所有數(shù)據(jù)用±s表示，應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行方差分析。3 結(jié)果3.1 護(hù)肝寶對ALT及AST含量的影響護(hù)肝寶明顯抑制CCl4所致急性肝損傷大鼠血清中ALT及AST含量的升高(P <0.05，P< 0.01)。結(jié)果見表1。表1 護(hù)

5、肝寶對急性肝損傷大鼠血清ALT，AST的影響與模型組比較, *P< 0.05，*P< 0.01，*P< 0.001;n=83.2 護(hù)肝寶對肝臟組織學(xué)影響光鏡觀察可見CCl4肝損傷大鼠肝細(xì)胞排列紊亂，炎細(xì)胞浸潤，肝細(xì)胞空泡變性，胞漿疏松化、氣球樣變和肝細(xì)胞濁腫。由于肝細(xì)胞變性壞死，所剩細(xì)胞減少，被擴張的肝竇所取代而出現(xiàn)肝竇變寬。還可見中心靜脈區(qū)域損害程度遠(yuǎn)甚于門脈區(qū)域。護(hù)肝寶能減輕肝細(xì)胞腫脹、肝組織壞死、炎性細(xì)胞浸潤等病理學(xué)變化(P< 0.05，P< 0.01)，結(jié)果見表2。3.3 護(hù)肝寶對肝血流量及ICG肝臟清除率的影響CCl4肝損傷大鼠肝血流明顯減慢(P<

6、 0.05)，ICG肝臟清除率明顯下降(P < 0.01)。結(jié)果見表3。表2 護(hù)肝寶對各組動物肝組織病理變化的影響例表3 護(hù)肝寶對急性肝損傷大鼠肝血流量和ICG肝清除率的影響4 討論影響ICG在血漿中消除的主要原因是肝血流量、有功能肝細(xì)胞總數(shù)、膽汁排泄和膽道暢通的程度等因素。近期有研究結(jié)果顯示2，CCl4所致急性肝損傷可引起肝細(xì)胞顯著破壞，肝血流量減少，引起肝膽轉(zhuǎn)運系統(tǒng)損害，影響ICG自血液進(jìn)入肝細(xì)胞，導(dǎo)致肝臟清除ICG功能減退。護(hù)肝寶由黃芪、丹參、虎杖、柴胡、黃芩、龍膽草等中藥組成，方中虎杖利膽活血，清熱解毒;黃芪、丹參益氣活血;龍膽草苦寒瀉火解毒;黃芩、梔子清熱解毒，瀉火燥濕，諸藥合

7、用，共奏益氣活血、舒肝利膽、清熱解毒、燥濕利濕之功效。單味藥的研究結(jié)果表明3，4，黃芪對于小鼠急性中毒性肝炎模型有保護(hù)肝臟，防止肝糖原減少的作用。組織化學(xué)法檢查肝臟可見糖原增加，溶酶體及組織脫酶體活躍。具有很好的調(diào)節(jié)免疫功能的作用和一定的抗病毒作用。黃芪對不同類型的急慢性肝炎的作用也有報道，其疏肝作用在臨床上有廣泛的實用價值。丹參有改善微循環(huán)障礙、改變血液流變、抗凝血、抗炎、耐缺氧、提高免疫功能、抗腫瘤活性等多種藥理作用;臨床研究表明，丹參對急慢性肝病確有療效，具有良好的護(hù)肝降酶，軟縮肝脾，改善血清蛋白含量，提高免疫功能，促進(jìn)纖維吸收，對慢性肝炎轉(zhuǎn)化為肝硬化起延緩與阻斷作用。丹參可明顯改變臨床

8、癥狀、黃疸指數(shù)(TBil)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)，為治療急慢性肝炎的有效藥物。本實驗結(jié)果表明，護(hù)肝寶能對抗CCl4所致肝血流量和肝清除率下降，使肝膽轉(zhuǎn)運功能改善，此作用可能與護(hù)肝寶明顯抑制CCl4所致急性肝損傷大鼠血清中ALT及AST含量的升高，減輕肝細(xì)胞的變性、壞死等病理學(xué)改變以及促進(jìn)大鼠的膽汁分泌有關(guān)，詳細(xì)機理有待進(jìn)一步探討?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1 Hong SS, Chung SJ, Shim CK. Functional impairment of sinusoidal membrane transport of organic cations in rats with CCl4-induced hepatic failureJ.Pharm Res,2000,17 :833.2 楚 立，張建平，張鳳華，等.靛氰綠在四氯化碳染毒大鼠肝膽內(nèi)轉(zhuǎn)運的研究J.衛(wèi)生毒理學(xué)雜志，2