HIV檢測(cè)及臨床意義（課堂PPT）

1、1 HIVHIV檢測(cè)及臨床意義檢測(cè)及臨床意義23456789中國(guó)每年新發(fā)現(xiàn)的HIV/AIDS病例數(shù)（19852002）0 05000500010000100001500015000病例數(shù)病例數(shù)年份年份AIDSHIV(+)AIDS1020023523295238126 136 230 125 947 1045HIV(+)5197171 299 216 261 274 531 1567 2649 33433306 4677 4527 13429824198519861987198819891990199119921993199419951996199719981999200020012002101

2、11213141516171819202122232425262728HIVHIV的檢測(cè)的檢測(cè)29HIV感染可通過(guò)兩種途徑檢測(cè)直接檢測(cè)病毒或其組成部分直接檢測(cè)病毒或其組成部分檢測(cè)人體檢測(cè)人體HIV免疫反應(yīng)免疫反應(yīng)HIV特異性抗體特異性抗體從感染到血清抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)有一段窗口期，平均為從感染到血清抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)有一段窗口期，平均為1-31-3個(gè)個(gè)月，有一小部分月，有一小部分HIVHIV感染者出現(xiàn)延遲反應(yīng)感染者出現(xiàn)延遲反應(yīng)30HIV感染后抗原和抗體的變化及其與疾病關(guān)系HIVHIV感染人體后出現(xiàn)一過(guò)性病毒血癥，感染人體后出現(xiàn)一過(guò)性病毒血癥，6-86-8周后血周后血清抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)，病毒滴度降低，在隨后的清抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)，病

3、毒滴度降低，在隨后的5-85-8年無(wú)癥年無(wú)癥狀帶毒期里狀帶毒期里HIVHIV抗體一直存在，但病毒難查到。進(jìn)抗體一直存在，但病毒難查到。進(jìn)入入AIDSAIDS期后血漿中病毒再次出現(xiàn)。期后血漿中病毒再次出現(xiàn)。故診斷故診斷HIVHIV感染多數(shù)時(shí)間用抗體檢測(cè)診斷，極早期感染多數(shù)時(shí)間用抗體檢測(cè)診斷，極早期（窗口期）用抗原檢測(cè)。（窗口期）用抗原檢測(cè)。31HIV抗體診斷 目前臨床上實(shí)際應(yīng)用的是測(cè)定特異性目前臨床上實(shí)際應(yīng)用的是測(cè)定特異性HIV抗體，包括抗體，包括初篩初篩和和確認(rèn)確認(rèn)實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)。32一、檢測(cè)試劑一、檢測(cè)試劑l 篩查試劑必須是篩查試劑必須是HIV-1/2混合型、經(jīng)國(guó)家藥品監(jiān)混合型、經(jīng)國(guó)家藥品監(jiān)督管

4、理局注冊(cè)批準(zhǔn)、批批檢合格、臨床評(píng)估質(zhì)督管理局注冊(cè)批準(zhǔn)、批批檢合格、臨床評(píng)估質(zhì)量?jī)?yōu)良、在有效期內(nèi)的試劑。量?jī)?yōu)良、在有效期內(nèi)的試劑。l 目前常用的篩查試劑有目前常用的篩查試劑有酶聯(lián)免疫酶聯(lián)免疫、顆粒凝集顆粒凝集和和其它其它快速診斷試劑快速診斷試劑。采供血機(jī)構(gòu)進(jìn)行血液篩查。采供血機(jī)構(gòu)進(jìn)行血液篩查應(yīng)采用酶聯(lián)免疫試劑。應(yīng)采用酶聯(lián)免疫試劑。l 自采自供血的單位必須進(jìn)行自采自供血的單位必須進(jìn)行HIV抗體檢測(cè)，在抗體檢測(cè)，在尚未建立艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室的偏遠(yuǎn)地區(qū)可由經(jīng)尚未建立艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室的偏遠(yuǎn)地區(qū)可由經(jīng)過(guò)培訓(xùn)的技術(shù)人員在規(guī)定的場(chǎng)所用快速試劑進(jìn)過(guò)培訓(xùn)的技術(shù)人員在規(guī)定的場(chǎng)所用快速試劑進(jìn)行血液篩查。行血液篩查。33

5、34lELISA方法：方法：目前目前最常用的初篩實(shí)驗(yàn)最常用的初篩實(shí)驗(yàn)，自，自19851985年首次年首次檢測(cè)檢測(cè)HIV-1HIV-1抗體的試劑盒供市以來(lái)，已從抗體的試劑盒供市以來(lái)，已從第一代的全病毒抗原間接法發(fā)展到第四第一代的全病毒抗原間接法發(fā)展到第四代的以重組的多肽抗原及抗代的以重組的多肽抗原及抗P24P24抗體包被抗體包被的雙夾心法，使窗口期縮短了的雙夾心法，使窗口期縮短了2-32-3周。周。35四代艾滋病酶聯(lián)免疫試劑比較四代艾滋病酶聯(lián)免疫試劑比較solidphasespecificdetection ofconjugate第一代第一代病毒裂解液病毒裂解液HIV-1IgG 抗體抗體HIV-

6、1 -IgG抗體抗體第二代第二代病毒裂解液病毒裂解液重組抗原合成肽重組抗原合成肽HIV-1 / -2IgG 抗體抗體HIV-1 / -2 IgG抗體抗體第三代第三代病毒裂解液病毒裂解液重組抗原合成肽重組抗原合成肽HIV-1 / -2 / -OIgM / IgG 抗體抗體HIV-1 / -2 / -O病毒裂解液病毒裂解液重組抗原合成肽重組抗原合成肽HIV-1 / -2 / -O第四代第四代病毒裂解液病毒裂解液重組抗原合成肽重組抗原合成肽HIV-1 / -2 / -Oanti-p24 AbIgM / IgG 抗體抗體HIV-1 / -2 / -Op24 抗原抗原病毒裂解液病毒裂解液重組抗原合成肽重

7、組抗原合成肽HIV-1 / -2 / -Oanti-p24 抗體抗體363738快速診斷試劑：快速診斷試劑：采用乳膠凝集、免疫斑點(diǎn)和免疫層析三種原理采用乳膠凝集、免疫斑點(diǎn)和免疫層析三種原理快速、不需特殊儀器快速、不需特殊儀器敏感度、特異度低于敏感度、特異度低于ELISAELISA，且價(jià)格貴，且價(jià)格貴適用于血站覆蓋不到的邊遠(yuǎn)地區(qū)適用于血站覆蓋不到的邊遠(yuǎn)地區(qū)/ /城市大醫(yī)院急診手術(shù)前檢查城市大醫(yī)院急診手術(shù)前檢查快速診斷陽(yáng)性結(jié)果還需經(jīng)快速診斷陽(yáng)性結(jié)果還需經(jīng)ELISAELISA方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證3940蛋白印跡實(shí)驗(yàn)（蛋白印跡實(shí)驗(yàn)（WB）廣泛使用的確認(rèn)實(shí)驗(yàn)廣泛使用的確認(rèn)實(shí)驗(yàn)用聚丙烯酰胺凝膠電泳將純化的用聚

8、丙烯酰胺凝膠電泳將純化的HIVHIV蛋白抗原分開(kāi)后轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上。標(biāo)本中蛋白抗原分開(kāi)后轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上。標(biāo)本中存在的存在的HIVHIV抗體與條帶上的抗原結(jié)合，再加入酶偶聯(lián)的抗人抗體與條帶上的抗原結(jié)合，再加入酶偶聯(lián)的抗人IgGIgG抗體和底物，在抗原抗體和底物，在抗原抗體結(jié)合的部位會(huì)出現(xiàn)有色條帶抗體結(jié)合的部位會(huì)出現(xiàn)有色條帶其可檢測(cè)標(biāo)本中針對(duì)其可檢測(cè)標(biāo)本中針對(duì)HIVHIV不同抗原不同抗原的抗體，故被用做確認(rèn)試劑。的抗體，故被用做確認(rèn)試劑。不同的研究機(jī)構(gòu)有不同的判定標(biāo)準(zhǔn)不同的研究機(jī)構(gòu)有不同的判定標(biāo)準(zhǔn)41HIV抗體確認(rèn)檢測(cè)流程圖抗體確認(rèn)檢測(cè)流程圖免疫印跡法免疫印跡法(HIV1/2(HIV1/2混

9、合型混合型) )HIV-1HIV-1陽(yáng)性反應(yīng)陽(yáng)性反應(yīng)可疑反應(yīng)可疑反應(yīng)出現(xiàn)出現(xiàn)HIV-2HIV-2指帶指帶HIV-1HIV-1陽(yáng)性報(bào)告陽(yáng)性報(bào)告可疑反應(yīng)可疑反應(yīng)陽(yáng)性反應(yīng)陽(yáng)性反應(yīng)陰性反應(yīng)陰性反應(yīng)報(bào)告報(bào)告HIV-2HIV-2血清學(xué)陽(yáng)性反血清學(xué)陽(yáng)性反應(yīng)報(bào)告必要時(shí)測(cè)核酸應(yīng)報(bào)告必要時(shí)測(cè)核酸陰性報(bào)告陰性報(bào)告免疫印跡法（免疫印跡法（HIV-2HIV-2）每每3 3個(gè)月隨訪一次，共個(gè)月隨訪一次，共2 2次，仍屬可疑，則作陰性報(bào)告如隨訪期間出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)則報(bào)告陽(yáng)性次，仍屬可疑，則作陰性報(bào)告如隨訪期間出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)則報(bào)告陽(yáng)性陰性反應(yīng)陰性反應(yīng)陰性報(bào)告陰性報(bào)告42 P24抗原測(cè)定抗原測(cè)定（一）適用范圍（一）適用范圍43（三）

10、結(jié)果報(bào)告和解釋1、HIV-1 P24抗原的陽(yáng)性結(jié)果必須經(jīng)過(guò)中和試驗(yàn)確認(rèn)。2、HIV-1 P24抗原陽(yáng)性僅作為HIV感染的輔助診斷依據(jù)，不能依此確診。3、HIV-1 P24抗原陰性結(jié)果只表示在本試驗(yàn)中無(wú)反應(yīng)，不能排除HIV感染。44HIV核酸檢測(cè)4546 PCR PCR對(duì)與縮短窗口期對(duì)與縮短窗口期病毒抗體試驗(yàn)PCR縮短HCV82天23天72HBV59天34天41HIV22天11天50471 1、輔助診斷、輔助診斷m某些非典型的抗體反應(yīng)，特別是不確定反應(yīng)時(shí)，某些非典型的抗體反應(yīng)，特別是不確定反應(yīng)時(shí)，RNARNA的測(cè)的測(cè)定可提供非常有用的證據(jù)。定可提供非常有用的證據(jù)。m單純使用單純使用RNARNA測(cè)

11、定不能完全確定感染與否，但當(dāng)測(cè)定不能完全確定感染與否，但當(dāng)RNARNA測(cè)定測(cè)定出現(xiàn)較高拷貝數(shù)的陽(yáng)性結(jié)果時(shí)（出現(xiàn)較高拷貝數(shù)的陽(yáng)性結(jié)果時(shí)（10001000）提示感染發(fā)生的）提示感染發(fā)生的可能性非常大。可能性非常大。m使用此指標(biāo)應(yīng)綜合其他檢測(cè)數(shù)據(jù)和樣品背景情況進(jìn)行綜使用此指標(biāo)應(yīng)綜合其他檢測(cè)數(shù)據(jù)和樣品背景情況進(jìn)行綜合分析與判斷。合分析與判斷。 482 2、窗口期輔助診斷、窗口期輔助診斷m在窗口期抗原峰出現(xiàn)前后通常出現(xiàn)一個(gè)病毒載量的高峰，在窗口期抗原峰出現(xiàn)前后通常出現(xiàn)一個(gè)病毒載量的高峰，通常此高峰高于發(fā)病時(shí)的血漿病毒水平，早期病毒通常此高峰高于發(fā)病時(shí)的血漿病毒水平，早期病毒RNARNA測(cè)測(cè)定具有特殊的意

12、義。定具有特殊的意義。m目前國(guó)際上正在嘗試使用這種檢測(cè)對(duì)采供血樣品進(jìn)行多個(gè)目前國(guó)際上正在嘗試使用這種檢測(cè)對(duì)采供血樣品進(jìn)行多個(gè)樣品混合后的樣品混合后的RNARNA檢測(cè)以降低窗口期傳播的殘余危險(xiǎn)度。檢測(cè)以降低窗口期傳播的殘余危險(xiǎn)度。493 3、病程監(jiān)控、病程監(jiān)控m由于由于HIVHIV感染發(fā)生后病毒載量的變化具有一定規(guī)律，并且感染發(fā)生后病毒載量的變化具有一定規(guī)律，并且這種變化與疾病的進(jìn)程有著密切的相關(guān)性。這種變化與疾病的進(jìn)程有著密切的相關(guān)性。m通常在感染后無(wú)癥狀期內(nèi)發(fā)生的臨床癥狀很難與通常在感染后無(wú)癥狀期內(nèi)發(fā)生的臨床癥狀很難與AIDSAIDS發(fā)病發(fā)病時(shí)的癥狀區(qū)別，病毒載量測(cè)定可以幫助醫(yī)生判斷一個(gè)剛發(fā)

13、時(shí)的癥狀區(qū)別，病毒載量測(cè)定可以幫助醫(yī)生判斷一個(gè)剛發(fā)生的癥狀是否與生的癥狀是否與HIVHIV感染有關(guān)。感染有關(guān)。504 4、指導(dǎo)治療方案及療效測(cè)定、指導(dǎo)治療方案及療效測(cè)定m并非在任何情況下感染者都應(yīng)該進(jìn)并非在任何情況下感染者都應(yīng)該進(jìn)行抗病毒治療，這不但是經(jīng)濟(jì)上的行抗病毒治療，這不但是經(jīng)濟(jì)上的原因，更重要的是在于抗病毒藥物原因，更重要的是在于抗病毒藥物的副作用和療效。通常在病毒載量的副作用和療效。通常在病毒載量達(dá)到一定水平后（如達(dá)到一定水平后（如35000-5000035000-50000拷貝拷貝/ /毫升）才具有良好的效果。毫升）才具有良好的效果。m只有通過(guò)治療后病毒水平的檢測(cè)才只有通過(guò)治療后病

14、毒水平的檢測(cè)才能確定治療是否有效，通常治療后能確定治療是否有效，通常治療后病毒水平降低病毒水平降低50%50%才被認(rèn)為臨床有才被認(rèn)為臨床有效。效。5152v隨著政府加速對(duì)國(guó)產(chǎn)抗艾滋病藥物上市的批隨著政府加速對(duì)國(guó)產(chǎn)抗艾滋病藥物上市的批準(zhǔn)，我國(guó)艾滋病人的治療已經(jīng)出現(xiàn)了曙光。準(zhǔn)，我國(guó)艾滋病人的治療已經(jīng)出現(xiàn)了曙光。v艾滋病臨床治療中各種艾滋病臨床治療中各種免疫指標(biāo)免疫指標(biāo)(CD4+、CD8+T細(xì)胞細(xì)胞 等等)對(duì)于確定感染狀態(tài)、預(yù)測(cè)發(fā)病、對(duì)于確定感染狀態(tài)、預(yù)測(cè)發(fā)病、評(píng)價(jià)藥物療效及新藥開(kāi)發(fā)具有重要的作用。評(píng)價(jià)藥物療效及新藥開(kāi)發(fā)具有重要的作用。 53CD4 T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞：（流式細(xì)胞術(shù)）（流式細(xì)胞術(shù)）C

15、D4 TCD4 T細(xì)胞是細(xì)胞是HIVHIV的主要靶細(xì)胞的主要靶細(xì)胞, ,感染后隨著病程進(jìn)展，感染后隨著病程進(jìn)展，CD4 TCD4 T細(xì)胞不斷下細(xì)胞不斷下降降 500/ 500/mmmm3 3有臨床診斷意義有臨床診斷意義 200/ 200/mmmm3 3AIDSAIDS病程進(jìn)展，病程進(jìn)展， AIDSAIDS診斷和療效觀察的指標(biāo)診斷和療效觀察的指標(biāo)54HIVHIV感染幾周內(nèi)，出現(xiàn)類流感癥狀，也稱為血清陽(yáng)轉(zhuǎn)期感染幾周內(nèi)，出現(xiàn)類流感癥狀，也稱為血清陽(yáng)轉(zhuǎn)期， CD4CD4細(xì)胞的數(shù)量降低。隨之出現(xiàn)的免疫應(yīng)答可以控制急細(xì)胞的數(shù)量降低。隨之出現(xiàn)的免疫應(yīng)答可以控制急性癥狀，恢復(fù)性癥狀，恢復(fù)CD4CD4細(xì)胞的數(shù)量，但并不能清除病毒。隨著細(xì)胞的數(shù)量，但并不能清除病毒