特殊染色(結締組織染色)

1、【資源】轉貼-特染：結締組織染色wanliheng丁香園版主.438積分473得票545粉絲加關注.2021-04-1911:38消息引用收藏分享分享到哪里？復制網(wǎng)址新浪微博豆瓣社區(qū)騰訊微博開心網(wǎng)人人網(wǎng)只看樓主第一節(jié)結締組織多色染色法一、Mallory三色染色法1 .試劑配制(1)重銘酸鉀液重銘酸鉀2.5g,醋酸5ml,蒸儲水95ml苯胺藍桔黃G液苯胺藍0.5g,桔黃G2g,磷鴇酸1g,蒸儲水100ml(3)酸性復紅液酸性復紅0.5g,蒸儲水100ml2 .染色步驟(1)中性甲醛液固定組織,石蠟切片,常規(guī)脫蠟至水.(2)重銘酸鉀液10min.(3)蒸儲水沖洗2min,蒸儲水2次.(4)酸性復紅

2、液2min,蒸儲稍洗.(5)苯胺藍液20min,95%乙醇快速分化.(6)直接用無水乙醇脫水,二甲苯透明,中性樹膠封固.3 .結果膠原和網(wǎng)狀纖維呈藍色,軟骨、粘液、淀粉樣變物質呈淡藍色,神經(jīng)膠質纖維、肌纖維和酸性顆粒呈紅色,髓鞘和紅色呈桔紅色.4 .考前須知(1)酸性復紅液易溶解于水,肉眼觀察切片上保存一定的紅色.(2)苯胺藍液染色后,用95%乙醇分化時,須用顯微鏡觀察掌握.(3)對陳舊的固定標本,其染色效果較差,可增加染色時間.(4)另張切片,可同時作膠原纖維對照染色而進行鑒別組織成分.二、Masson三色染色法1 .試劑配制(1) Masson復合染色液酸性復紅1g,麗春紅2g,桔黃G2g

3、,0.25%醋酸300ml.(2)亮綠染色液高綠SF0.1g,0.2%醋酸100ml.2 .染色步驟中性甲醛液固定組織,石蠟切片,常規(guī)脫蠟至水.(11) Masson復合染色液5min.(12) 0.2%醋酸水溶液稍洗.(13) 5%磷鴇酸5-10min.(14) 0.2%醋酸水溶液浸洗2次.(5)亮綠染色液5min,0.2%醋酸水洗2次.(6)無水乙醇脫水,二甲苯透明,中性樹膠封固.3 .結果膠原纖維呈綠色,肌纖維呈紅色,紅細胞呈桔紅色.4 .考前須知(1) Masson復合染色液,經(jīng)磷鴇酸分化時須用顯微鏡限制肌纖維清楚為止.(2)亮綠染料可用苯胺藍替換,可用來作為比照觀察染色的效果.三、顯

4、示膠原纖維、網(wǎng)狀纖維和彈力纖維的三聯(lián)染色法(1993年)1 .試劑配制(1)高鎰酸鉀硫酸液0.5%高鎰酸鉀水溶液中參加5ml的硫酸.(2)維多利亞藍染色液維多利亞藍2g,糊精0.5g,間苯二酚4g,蒸儲水200ml.將上述物質混合后加熱煮沸,邊煮邊攪拌,約5min.然后用另一容器取30%三氯化鐵水溶液25ml,另行加熱煮沸后慢慢倒入上述混合液中繼續(xù)煮沸3min,不斷攪拌溶液呈膠體狀.去火冷卻過濾,將濾紙上的殘渣連同濾紙放在60c恒溫箱中烤干.殘渣呈深藍色細顆粒狀粉末,再溶于400ml的70%乙醇液中.然后加濃鹽酸4ml和苯酚5g放置至成熟后使用.(3)麗春紅染色S染色液0.5%麗春紅S水溶液1

5、5ml,苦味酸飽和水溶液85mlo(4) Gomori氨性銀改進液取5%硝酸銀水溶液5ml,滴加濃氨水由棕黑色變清為止,再加入3%氫氧化鈉水溶液5ml,此時該液突變紫黑色,這時再參加氨水使之變清楚為止.最后用蒸儲水補足至50ml,盛棕色試劑瓶中,置于冰箱中備用較長時間.2 .染色步驟(1)中性甲醛液固定組織,石蠟切片,常規(guī)脫蠟至水.(2)高鎰酸鉀硫酸液氧化3min后,自來水浸洗后,用2%草酸漂白2min.3 3)5%硫酸鐵鏤1min.4 4)Gomori氨性銀改進液染1min.(5)蒸儲水洗2次,用15%甲醛液復原1min.(6)蒸儲水洗2次,0.2%氯化金30s,蒸儲水洗1次.(7) 70%

6、乙醇浸一次,再浸入維多利亞藍液中染30min-1h.(8) 95%乙醇分化1min左右.(9)浸入蒸儲水中1min后,用麗春紅S染色液染色2min.(10)直接用無水乙醇脫水,二甲苯透明,中性樹膠封固.3 .結果膠原纖維呈紅色,網(wǎng)狀纖維呈黑色,彈力纖維呈綠色,肌肉和紅細胞呈淡黃色.4 .考前須知氨性銀液滴染時,要用干凈吸管,預防銀液污染而發(fā)生沉淀.氨性銀液作用后的切片不能傾倒,應將蒸儲水沖洗切片上的銀液,這樣就不會使銀液外表揮發(fā)的銀顆粒而沉積在組織上.第二節(jié)膠原纖維一、膠原纖維的分布和組成成分膠原纖維是結締組織中的三種纖維之一,分布最為廣泛,含量最多.主要分布于真皮、鍵、韌帶、骨、透明軟骨、動

7、脈、腸壁、子宮和基底膜等,膠麻纖維具有韌性大,抗拉力強的特點.在弱酸或沸水中可慢慢溶化成膠水,稱白明膠.膠原纖維和網(wǎng)狀纖維的根本構造相似,都以膠原單位(蛋白質為主的大分子)為根本單位.膠原單位接連和融合形成網(wǎng)狀纖維；它是粗約1科m左右的分支狀纖維,形成全身組織的支架,在HE染色中看不清楚.但其外面裹著的一層類蛋白,憑借鍍銀法可以清楚地顯示出來,故又稱為嗜銀纖維.膠原纖維單位主要由纖維母細胞合成.其他如平滑肌細胞等也能產(chǎn)生.膠原單位的形成開始于細胞的粗面內(nèi)質網(wǎng),合成比構成膠原單位的“肽鏈更長的前a肽鏈,經(jīng)高爾基體分泌出細胞,在細胞外液的內(nèi)切肽酶作用下,切去前a肽鏈的附加肽段而形成膠原單位；再經(jīng)細

8、胞外液的賴氨酰氧化酶作用使兩條肽鏈通過醛醇或醛胺縮合構成共價交聯(lián).這樣膠原單位分子之間就形成了穩(wěn)定的聯(lián)系,形成膠原微纖維,然后再聚合而成膠原纖維.二、膠原纖維染色的應用膠原纖維染色在病理診斷上主要用于鑒定梭形、纖維形細胞腫瘤的組織來源：常常要在纖維、平滑肌和神經(jīng)三者之中作出選擇.還能使用于其他的情況下,如觀察動脈硬化的心臟,在HE切片中,心肌內(nèi)散在的小疤痕灶和心肌均被染作紅色,而作膠原纖維染色可將膠原組織和心肌組織明顯地區(qū)分開來.早期肝硬化用膠原纖維染色,也可使小葉之間少量增生的膠原纖維突出地顯示出來.由干膠原纖維是由成纖維細胞產(chǎn)生的一種纖維蛋白成分,常常被酸性染料染色.1. VanGieso

9、n苦味酸酸性復紅法(1889年)試劑配制(1) VanGieson液1%酸性品紅水溶液10ml,苦味酸飽和水溶液(約l.22%)90ml.(2)Weigert鐵蘇木素溶液甲液：蘇木素lg,95%或無水乙醇100ml;乙液：29%三氯化鐵水溶液4ml,蒸儲水95ml,鹽酸lml.臨用時取甲液和乙液等量混合即可.鐵蘇木素不能像明磯蘇木素一樣配制后放置,因鐵與染色劑的色素可引起化合而形成不溶性沉淀.所以,以鐵作為媒染液時,必須與染液分別配制、分別應用或臨時混合應用.染色方法(1)組織固定于10%甲醛液,常規(guī)脫水包埋.(2)組織切片脫蠟至水.(3)用Weigert蘇木素液染5l0min.(4)自來水沖

10、洗數(shù)分鐘.(5)根據(jù)染色的深淺可用0.5%鹽酸乙醇分化.自來水洗至變藍；用蒸儲水洗.用VanGieson液染15min.傾去染液,直接用95%乙醇分化和脫水.(9)無水乙醇脫水,二甲苯透明,中性樹膠封固.結果膠原纖維呈紅色,肌纖維、胞質及紅細胞黃色,胞核呈黑色.考前須知目前以苦味酸、復紅的VanGieson染液直接染此一種溶液即可.(2)Weigert鐵蘇木素分甲、乙兩液,應于臨用前將兩液等量混合使用,而不宜預先混合,否那么易氧化沉淀而逐漸失其染色水平.VanGieson染色液分別在臨用時混合,預防放置時間長,那么酸性品紅不易著色.2. Siriured染色法這種方法可使膠原纖維長期保存,是不

11、易褪色的一種好方法.試劑配制(l)Siriusred飽和苦味酸液0.5%Siriuredl0ml,苦味酸飽和液90ml.(2)天青石藍液天青石藍B1?25g,鐵明磯1.25g,蒸儲水250m1.溶解煮沸,待冷過濾后,參加甘油30m1,然后再參加濃鹽酸5ml.染色方法(1)組織固定于10%甲醛液,常規(guī)脫水包埋.(2)切片脫蠟至水.入天青石藍液染510min,(4)蒸儲水洗屢次.(5)Siriured飽和苦味酸液染1530min.無水乙醇直接分化與脫水.二甲苯透明,中性樹膠封固.結果膠原纖維呈鮮紅色,細胞核綠色,其他為黃色.3. Lillie改進VanGieson法(1965年)試劑配制A.用1%

12、醋酸配成0.1%快綠FCF液,或為得到較藍的綠色用3%毛綠S(WoolgreenS).B.且0.2%酸性復紅,0.2%紫胺(Violamine)或用0.1%0.5%麗春紅S(ponceauS)溶于飽和的苦味酸水溶液.染色方法(1)按常規(guī)將切片脫蠟至水.(2)用Harris明磯蘇木素液染3min.(3)自來水洗,鹽酸乙醇分化數(shù)秒鐘.(4)自來水洗至顯藍,蒸儲水洗.在A溶液中染4min.在1%醋酸中洗2次.在B溶液中染l0l5min.在1%醋酸中洗2min.(9)無水乙醇脫水,二甲苯透明,中性樹膠封固.結果結締組織紅色,肌肉、胞質灰綠色,紅細胞綠色,核藍黑色.4. Clark改進VanGieson

13、臺盼藍法(1971年)用于膠原纖維、包括非常細的纖維,以及肌肉角化上皮的染色.固定甲醛固定液.試劑配制(l)A液0.3g蔡酚黃S(naphtholyellowS)溶竄犯100mI蒸儲水.(2)B液0.2g酸性復紅溶于100ml蒸儲水中.(3)C液0.2g臺盼藍溶于100ml蒸儲水中.染色液由40份A溶液,2.5份B溶液和2份C溶液組成.每40分A溶液參加,0.4ml濃鹽酸.染色方法(1)石蠟切片,脫蠟至水(2)在Weigert鐵蘇木素中5ml.自來水洗.(4)在染色?中染l0min.(5)在水中迅速洗一下即經(jīng)過50%、70%與95%乙醇,無水乙醇兩次.二甲苯透明,中性樹膠封固.結果核-藍黑色；

14、胞質-黃色,膠原纖維-粗纖維紅色,細纖維藍色.說明本法中的Weigert鐵蘇素液染色,可改用楮花青-銘磯溶液中染16h.5.Biebric猩紅染色法Lillie,1965年顯示目的膠原纖維、網(wǎng)狀纖維、肌肉、胞質.固定甲醛液,Orth液.試劑配制(l)A液Weigert鐵蘇木精,見苦味酸酸性復紅法.(2)B液0.2gBiebrich猩紅溶于100ml1%醋酸.C液0.1g苯胺藍溶示100ml飽和苦味酸水溶液.染色方法(1)常規(guī)脫蠟至水.(2)在A溶液中染5min.自來水沖洗.(4)在B染液中染4min.自來水洗.在C染液中染5min.直接移入1%醋酸中3min.無水乙醇脫水,二甲苯透明,中性樹膠

15、封固.結果結締組織藍色,腎小球基質藍色,網(wǎng)狀纖維藍色,紅細胞橙紅至猩紅色,肌肉粉紅色,胞質粉紅色至灰色,核黑藍色,粘液淺藍色.6 .苦味酸氨基黑染色法Lillie,1965年顯示目的膠原纖維、網(wǎng)狀纖維、基膜、腎小球基質.固定任何固定劑均可.試劑配制(l)A液煌紫素R(BrilliantpurpurinR)0.6g;偶氮復紅G(azo-fuchsinG)0.4g;冰醋酸1ml,蒸儲水加至100m1,上述兩種染料先各自用1%醋酸配成1%溶液,以6：4比例混合后再用.(2)B液氨基黑10B,5100mg；苦味酸飽和水溶液100m1.同樣濃度的苯胺藍或甲基藍均可用來代替氨基黑(又稱蔡酚藍黑),粘液可得

16、到較好的顯示.染色方法(1)切片常規(guī)脫蠟至水.(2)在Weigert鐵蘇素中染6min.自來水洗.(4)在A染液中染5min.流水中洗.在B染液中染15min.在1%醋酸中分色2min.無水乙醇脫水,二甲苯透明,中性樹膠封固.結果膠原纖維、網(wǎng)狀纖維和基膜深綠色；粘液深綠色,上皮細胞胞質棕色,肌肉淺綠色,紅細胞紅色.7 .Petersen酸性茜藍改進法顯示目的膠原與網(wǎng)狀組織、骨銘肌、心肌橫紋、心肌間板.固定Zenker液,Helly液、Bouin液或甲醛液.試劑配制A液即緩沖的酸性茜藍溶液.酸性茜藍2B,0.25g；硫酸鋁5g；蒸儲水50m1.煮沸5min.冷卻,過濾,再補足到原來的體積.然后加

17、20ml的Sorensen檸檬酸鹽溶液(檸檬酸晶體21g,lNNaOH,200m1.加蒸儲水至1000ml)和30ml0.lN鹽酸緩沖到pH為2.25.(2)B液即苯胺藍橘黃G溶液.苯胺藍0.5g;橘黃G,2g；蒸儲水100ml,冰醋酸8ml,煮沸,冷卻,過濾.染色方法(1)常規(guī)石蠟切片,脫蠟至水.(2)在A液中染3min.在蒸儲水中快速洗2次.(4)在5%磷鴇酸液中分色并媒染23min.(5)蒸儲水洗.在未經(jīng)稀釋的B液中染23min.如染色結果太深,可用1、2或3倍體積的蒸儲水稀釋.(7)蒸儲水中略洗.先用95%乙醇后用無水乙醇脫水.(9)二甲苯透明,中性樹膠封固.結果膠原與網(wǎng)狀結締組織藍色

18、,染色質醇紅色,肌組織根據(jù)所用不同品種的固定劑染色從深品紅色至亮橙色,紅細胞橙紅色,粘液淡藍色,神經(jīng)節(jié)細胞淡品紅色,腺細飽根據(jù)其組成從淺藍色至品紅色.8 .顯示膠原纖維、細胞和肌肉的新染法固定中性甲醛液,石蠟切片.試劑配制(l)Ponceau's染色液0.5%Pohceau's(麗春紅S,上海試劑三廠)水溶液l015ml,苦味酸飽和水溶液8590ml.(2)Victoriablue'B染色液Victoriablue'B(維多利亞藍,B,上海試劑三廠)0.5g,70%乙醇100m1.染色方法(1)組織切片脫蠟至水.(2)70%乙醇稍洗后,入Victoriablue

19、'B染色?中l(wèi)5min.(3)95%乙醇中分化數(shù)秒鐘.(4)用蒸儲水洗2次.用Ponceau's染色液滴染2min.直接用無水乙醇分化與脫水.二甲苯透明,中性樹膠封固.結果膠原纖維呈鮮紅色,細胞核和血細胞呈綠色,肌肉呈黃色.O相關回復：appo發(fā)布日期：2005-12-12第三節(jié)網(wǎng)狀纖維網(wǎng)狀纖維是網(wǎng)狀結締組織內(nèi)的一種纖維.它由網(wǎng)狀細胞所產(chǎn)生.網(wǎng)狀細胞是一種星狀多突的細胞,核大,著色較淺,核仁明顯,胞質較豐富,胞突彼此連接形成細胞網(wǎng)架.網(wǎng)狀纖維纖細而有分支,穿行于細胞體和突之間,共同構成網(wǎng)狀支架.這種纖維用HE染色一般不易辨識.假設用銀氨溶液浸染能使纖維變成黑色,如又稱為嗜銀纖維

20、.網(wǎng)狀纖維纖細,直徑約0.2-1um,沒有彈性,而有韌性,能反抗胃液的消化和弱酸的腐蝕.一、網(wǎng)狀纖維染色的應用1 .用于顯示和鑒別腫瘤的性質和來源(1)顯示和區(qū)分癌和肉瘤(2)顯示和區(qū)分血管內(nèi)皮瘤與血管外皮瘤(3)用以鑒別淋巴細胞肉瘤與網(wǎng)狀細胞肉瘤(4)區(qū)分骨尤文氏肉瘤與骨網(wǎng)狀細胞肉瘤(5)顯示與鑒別骨異質增生與骨化性纖維瘤(6)區(qū)分軟骨粘液纖維瘤與粘液肉瘤(7)鑒別腦膜瘤與星形細胞瘤2 .用于某些腫瘤的診斷(1)平滑肌肉瘤(2)纖維肉瘤(3)滑膜肉瘤(4)惡性神經(jīng)鞘瘤3 .用于觀察和研究癌組織的發(fā)生、開展及其惡性程度.4 .顯示與觀察基底膜的變化.5 .用于識別壞死組織的結構及類型(1)凝固

21、性壞死(2)肺結核干酪樣壞死6 .用于顯示和研究肝組織病變.二、網(wǎng)狀纖維染色的原理1 .氧化2 .感應3 .浸銀4 .復原三、網(wǎng)狀纖維染色方法I.Wider染色法(1)固定甲醛液或其他固定液(2)試劑配制氧化銀溶液：40%氫氧化鈉1滴半10%硝酸銀2.5ml取40%氫氧化鈉滴入10%硝酸銀溶液中立即產(chǎn)生棕褐色沉淀,逐次滴入28%氨水恰好溶化沉淀(一般3滴為宜),用蒸儲水補足20ml.(3)染色次序1)組織切片脫蠟至水.2)10%磷電目酸,2-5min.3)蒸儲水沖洗,5min.4)1%硝酸鈾,5s.5)蒸儲水沖洗,10s.6)氧化銀溶液,5-10min.7)95%酒精速洗,1-2So8)復原液

22、復原,1-2s.9)蒸儲水沖洗,2min.10)0.2%氯化金調(diào)色,2-20s.11)蒸儲水沖洗,5min.12)5%次亞硫酸鈉,2min.13)蒸儲水沖洗,2min.14)核固紅染細胞核,5-10min.15)水稍洗.16)常規(guī)無水乙醇脫水、二甲苯透明、中性樹膠封固.(4)染色結果網(wǎng)狀纖維呈黑色、細胞核呈紅色.第四節(jié)彈力纖維一、彈力纖維的形態(tài)特點和組成成分彈力纖維由糖蛋白構成,富含親水性的極性氨基酸.彈性蛋白提供彈力纖維的彈性,它是一種不溶性蛋白質,當用弱堿處理纖維結締組織時,其仍然存在.三分之一為甘氨酸,11%為脯氨酸.與膠原纖維不同處為其氨基酸組成中約95%屬于非極性疏水氨基酸,鎖鏈賴氨

23、酸(Desmosine)和異鎖鏈賴氨素(Isodesmosine)是彈性蛋白所特有,它們起著共價交聯(lián)的作用.近年來,電鏡下看到組織培養(yǎng)的平滑肌細胞可以合成彈力纖維的兩種成分.在沒有平滑肌細胞存在時,可能由纖維母細胞形成.彈力纖維廣泛分布于身體各處,特別是在皮膚、血管、壁、韌帶、氣管、支氣管、肺泡、耳廓和腺體的導管處等最為豐富.彈力纖維由兩種成分組成,即集合束的彈力微纖維(由糖蛋白形成)和均質狀的彈力蛋白.彈力纖維在常規(guī)染色中難以區(qū)別于其他纖維,只有用特殊染色方法,才能清楚地顯示出來.近來學者研究認為,彈力纖維系統(tǒng)是由彈力纖維、前彈力纖維和耐酸纖維等三種纖維構成,這三種纖維的分布、走行和組織化學

24、均不相同.耐酸纖維用一般的彈力纖維染色法其著色很淡,前彈力纖維著色也不夠深,但如經(jīng)強氧化后醛品紅或間苯二酚品紅法那么可把彈力纖維系統(tǒng)中的三種纖維同時顯示出來.二、彈力纖維染色的應用(一)顯示皮膚組織中彈刀纖維的變化在皮膚組織病變中,特別是真皮內(nèi)的彈力纖維,時常發(fā)生改變,出現(xiàn)增生、卷曲、變性、崩解等,做彈力纖維形成聚集成堆的束狀、團塊狀及不規(guī)那么狀.見于以下病變彈力纖維?。粡椓w維增多癥；彈力過度性皮膚；皮膚疏松；皮膚環(huán)狀肉芽腫；肢端角化的彈力纖維變性；硬皮病.(二)顯示與判定心血管疾病彈力纖維是心臟和血管的主要成公之一.(1)顯示及鑒別心內(nèi)膜彈力纖維增生癥與心內(nèi)膜心肌纖維化.這兩種病變時心內(nèi)膜

25、中的彈力纖維和膠原纖維會出現(xiàn)異常增多,在HE-染色中兩者的病理變化甚為相似.因此,需要特殊染色加以顯示與鑒別.(2)顯示動脈粥樣硬化時硬化斑塊底部的內(nèi)彈力板崩解,斷裂乃至消失情況.(3)顯示與觀察梅毒性主動脈炎時動脈中層彈力纖維發(fā)生灶性破壞的程度.(4)顯示高血壓時小動脈彈力纖維顯著增生以及形成多層的病變特點.(5)用于無脈癥,顯示在大動脈血管申層彈力纖維密集排歹U,彈力層增厚.顯示老年人動脈變性：動脈的彈力板變性、增厚、斷裂、崩解等現(xiàn)象.(三)視察某些病變中的彈刀纖維是否增生與破壞如慢性支氣管炎、肺氣腫、原發(fā)性或繼發(fā)性腎固縮等,均可導致彈力纖維縱行.散亂、斷裂、破壞和增生,形成碎片或顆粒.(

26、四)顯示與鑒別腫瘤組織(1)彈力纖維瘤在彈力纖維瘤體的纖維組織中,有許多球狀或顆粒狀變化的彈力纖維.在HE染色中容易忽略,但用彈力纖維染色,能清楚見到瘤體內(nèi)豐富的彈力纖維球.(2)乳腺癌見于導管和血管壁周圍,這種現(xiàn)象多合并在硬癌和浸潤性小葉癌上.如彈力纖維染色法證實在導管癌上,伴隨出現(xiàn)彈力纖維增生,可證實是早期浸潤癌.三、各種染色方法1、Verhoeff鐵蘇木素染色法媒染劑三氯化鐵和碘配成的蘇木素染色液,即Verhoeff鐵碘蘇木素對彈力纖維有染色力,但沒有選擇性,它既可染彈力纖維,也可染細胞核和膠原纖維等.通過“染料的分散度和組織的結構密度以到達分辨不同組織的目的.如彈力纖維和細胞核的結構密

27、度都是比擬致密的,鐵蘇木素染液的粒子比擬容易地分散到狹孔的彈力纖維或細胞核的間隙中,蘇木素粒子在狹孔的彈力纖維中比擬密集,所以染色也比擬深；而分散到寬孔的膠原纖維間隙中較稀疏,所似染色也比擬淺.固定105甲醛溶液或其他固定液.試劑配制鐵碘蘇木素液：先將蘇本素1g,無水乙醇20ml,進行加溫溶解后參加10%三氯化鐵水溶液8m1,最后再參加Lugol碘?夜8ml即可(Lugol液：碘化鉀2g,碘結晶lg,蒸儲水100ml).染色方法(1)石蠟切片,脫蠟至水.(2)鐵碘蘇木素液染1530min,至顏色呈深黑色.自來水洗.(3)2%三氯化鐵水溶液分化1020s,至彈力纖維清楚為止.如果分化過度,可再返

28、回第2步重染鐵碘蘇木素液.(4)充分水洗.(5)用95%乙醇去碘2Smin,使黑色纖維更為清楚.水洗,VG復染5min.(7)95%乙醇急速分化.無水乙醇脫水,二甲苯透明,申性樹膠封固.結果彈力纖維黑色或黑藍色,胞核黑色,校原纖維呈紅色.2、Weigert間苯二酚復紅染色法三苯甲烷系堿性染料與雷鎖辛和三氯化鐵組成一種帶有弱正電荷的染料,與結構致密的、富于內(nèi)外表的彈性纖維通過非極性吸著而完成染色.非極性吸著,是染料不具有強電荷時和組織成分間的結合.就是說雷鎖辛復紅液對彈力纖維的染色.間苯二酚復紅液實際上是由堿性品紅的鐵間苯二酚色淀(Lake)形成的一種復合物,這種復合物與彈力纖維結合,并使彈力纖

29、維著色.其結合的原理不清楚,可能是彈力纖維某些局部與間苯二酚的基團形成氫鍵.固定10%甲醛液及其他固定液.試劑配制間苯二酚復紅液：堿佳品紅1g,間苯二酚2g,蒸儲水200m1,30%三氯化鐵1.25ml,濃鹽酸2ml.取一個300ml燒杯,放入堿性品紅、間苯二酚和蒸儲水,用玻璃棒攪拌,加熱煮沸.再慢慢參加30%三氯化鐵液,在攪拌下繼續(xù)煮沸35min.冷卻后過濾,傾去濾液.將濾紙和沉淀物一同放入燒杯內(nèi),置于枯燥箱內(nèi)烘干.取出后參加95%乙醇100ml,在水鍋內(nèi)加熱,并不斷攪拌至沉淀物完全溶解,取出濾紙,冷卻后過濾.補足因蒸發(fā)失去的乙醇至100ml.最后加濃鹽酸2ml,混合后即可使用.染色方法(1

30、)石蠟切片,脫蠟至水.(2)在95%乙醇液中浸2min.(3)間苯二酚復紅液染12h.(4)用95%乙醇液洗去多余染液.如果染色較深可用0.2%鹽酸乙醇分化.(5)自來水沖洗2min.用VanGieson液復染lmin.(7)95%乙醇急速分化.無水乙醇脫水,二甲苯透明,中性樹膠封固.結果彈力纖維深藍黑色,膠原纖維紅色,背景黃色.3、Hart改進間苯二酚復紅染色法此法由Weigert法經(jīng)過改進后開展而來.特點是將Weigert染液用1%鹽酸乙醇溶液配制成稀釋溶液,進行過夜染色,可顯示出較細的彈力纖維.固定甲醛固定液和其他固定液.試劑配制(1)酸性高鎰酸鉀水溶液0.5%高鎰鉀水溶液50m1,3%

31、硫酸水溶液2.5m1.此液分別配制,臨用時按比例混合使用.(2)Weigert稀釋液Weigert原液l0ml,1%鹽酸乙酉I溶液90ml.此液可保存一定時間.染色方法(1)石蠟切片,脫蠟至水.(2)酸性高鎰酸鉀水溶液氧化5min.(3)自來水洗23min.(4)用1%草酸水溶液漂白至無色.(5)充分水洗2min.用70%乙醇液略洗.(7)直接用Weigert稀釋液浸染過夜.用1%鹽酸乙醇分化數(shù)秒鐘或直接入95%乙醇液中稍分化.(9)充分水洗5l0min.(10)用VanGieson液、1%中性紅或HE進行比照染色.(11)95財乙醇及無水乙醇脫水,二甲苯透明,中性樹膠封固.結果彈力纖維呈藍黑

32、色,其他組織呈復染的顏色.4、Gomori醛復紅染色法醛復紅染色液是Gomori在Schiff試劑的使用和實驗期間偶然發(fā)現(xiàn)的.醛復紅是堿性品紅參加三聚乙醛和鹽酸配制而成,作為一種酸性催化劑,可使三聚乙醛逐漸解聚產(chǎn)生乙醛.乙醛有較高的活性,釋出后與堿性品紅染料外露的氨基起反響而產(chǎn)生偶氮甲堿,這時顏色轉變?yōu)樯钭仙?是謂成熟,稱為醛復紅染液.這秧成熟的醛復紅對特殊的蛋白質及含硫酸根的粘多糖具有很強的親合力,和彈力纖維結合很緊.另外,對肥大細胞顆粒、脂褐素、乙型肝炎外表抗原(HBsAg)、胃主細胞、胰島的？細胞和腦垂體的嗜堿細胞,也能很好著色.固定各種固定液,但以甲醛生理鹽水液固定的染色效果最正確.試

33、劑配制醛復紅染液堿性復紅0.5g,濃鹽酸1m1,70%乙醇100ml,三聚乙醛1m1.將堿性復紅溶于70%乙醇,然后參加濃鹽酸和三聚乙醛,輕輕搖動使混合均勻,于室溫下靜置12日,待變?yōu)樽仙礊槌墒?過濾于小口砂塞瓶,置冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆?(2)橘黃G染色液橘黃G2g,蒸儲水100m1,磷鴇酸5g.染色方法(1)切片脫蠟至水.(2)用Lugol碘液處理5min.(3)稍水洗.(4)5%硫代硫酸鈉液處理5min.(5)流水沖洗5min.70%乙醇稍洗.(7)入醛復紅液l0min.70%乙醇浸洗2次,每次約30s,至切片不再脫色為止.(9)稍水洗.(10)橘黃G液滴染約1s.(11)蒸儲水洗12min.

34、(12)95%乙醇無水乙醇脫水,二甲苯透明,中性樹膠封固.結果彈力纖維呈深紫色,其他為復染色.說明還可用淡綠橘黃G液、Masson三色液、VanGieson液等復染,但不宜過深.5、Pinkus酸性地衣紅-姬姆薩染色法固定10%甲醛液、Helly液或Zenker液均可.試劑配制地衣紅染色液地衣紅1g,70%乙醇100m1,濃鹽酸0.6m1.地衣紅溶于乙醇內(nèi)然后再加入濃鹽酸.(2)姬姆薩液取姬姆薩原液5滴,加蒸儲水100ml.伊紅乙醇液伊紅Y59,95%乙醇100m1,混合后不停攪拌.溶解后即可使用.染色方法(1)切片脫蠟至水.(2)經(jīng)70%乙醇漂洗.地衣紅液染3060min.(4)95%乙醇分

35、化,洗去多余染液.(5)用1%鹽酸乙酉I處理25min,直至背景無色為止.需鏡下限制.流水沖洗5l0min.(7)姬姆薩稀釋液浸染2h過夜.用95%乙醇分化,伊紅乙醇液(95%乙醇中滴數(shù)滴)中染色,直到大量的藍色從結締組織中脫掉為止.可在鏡下限制.(9)無水乙醇脫水,二甲苯透明,中性樹膠封固.結果)細胞核深藍色,彈力纖維深棕到黑色,膠原纖維粉紅到淺藍色,黑色素呈綠色到棕色,嗜伊紅顆粒呈紅色至紫色,細胞核呈深藍色.6、Uana地衣紅染色法固定甲醛液或其他固定液.試劑配制Uana地衣紅染色液：地衣紅lg,70%乙醇99ml,濃鹽酸1m1.將地衣紅溶于乙醇內(nèi),然后參加濃鹽酸.放置冰箱中保存?zhèn)溆?染色

36、方法(1)組織切片,脫蠟至水.(2)在70%乙醇中2min.置Uana地衣染色液中1530min(系溫箱內(nèi)所需時間,室溫中浸染過夜).(4)70%乙醇液分化至無多余染液脫下為止.(5)可用VanGieson液復染.95%乙醇、無水乙醇脫水,二甲苯透明,中性樹膠封固.結果彈力纖維呈棕紅色至暗棕色,其他組織呈復染的顏色.7、Gomori改進醛復紅-阿爾辛籃染色法固定各種固定液,彳！以乙醇或Bouin固定液固定效果最正確.試劑配制醛復紅-阿爾辛藍染液：鹽基性復紅0.5g,阿爾辛藍0.6g,70%乙醇98m1,濃鹽酸1ml,三聚乙醛1m1.將復紅和阿爾辛藍依次溶于乙醇內(nèi),然后參加鹽酸和三聚乙醛,充分混

37、合搖勻,放置室溫中24h,使其自然成熟后即可使用.該液用后須貯存于冰箱中可保存23個月.染色方法(1)石蠟切片,脫蠟至水.(2)用醛復紅-阿爾辛藍液染12h.(3)70%乙醇液漂洗2次,約35min.(4)蒸儲水稍洗.(5)用焰紅B液染色10l5min.直接用無水乙醇脫水,二甲苯透明,中性樹膠封固.結果彈力纖維呈深紫色,背景呈藍綠色或其他復染的顏色.8、Darrow合成地衣紅改進法(1952年)固定Zenker液、Bouin液、10%甲醛均可.試劑配制(1)A液0.4g合成地衣紅溶于100m1含有1%濃鹽酸的70%乙醇中.(2)B液即Mallory硼砂亞甲藍液,其貯存原液為1g亞甲藍與1g硼砂溶于100m1蒸儲水中.用時將此原液lml加蒸儲水至9ml即可.染色方法(1)按常規(guī)將切片脫蠟.(2)在A液中染30min.在70%乙醇中稍洗2次.(4)蒸儲水中洗2次.在稀釋的B液中染5min.蒸儲水洗.在含有0.5%透明松香(Colophony,rosin)的95%乙醇中分色并脫水2min.切片要經(jīng)常搖動,在鏡檢下掌握染色結果.在無水乙醇中快速完成脫水,二甲苯透明,中性樹膠封固.結果彈力纖維呈深紫色或紅紫色,核藍色.9、Fraenkel多色染色法(Lillie,1965年)顯示目的彈性硬蛋白、膠原纖維、肌肉和核.固定任何固定